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1、 内容提纲研究背景及意义实验方法及步骤实验结果及分析讨论研究背景及意义1.市场饵料添加剂污染严 重且有富集作用，对人体 有害。研究背景及意义 2.草鱼生长激素参与鱼体生长代谢，能够 加速蛋白质合成和脂类降解等生理功能。研究背景及意义3.植酸酶降低磷对环境的污染并消除植酸的 抗营养作用，同时改善动物对蛋白质和矿物 质等营养物质的利用率。研究背景及意义草鱼生长激素和植酸酶的融合基因的融合蛋白促生长 污染小 高表达 大量提取 实验方法及步骤100ml250ml500mlIPTG恒温振荡培养箱1.菌株培养实验方法及步骤2.蛋白样品制备离心超声波破碎离心沉淀上清PBS实验方法及步骤3.SDS-PAGE电
2、泳分析比较4.蛋白纯化5.蛋白定量实验结果及分析pET-28aH17PHYHAP实验结果及分析H17PHYHAP28KDa52KDa80KDa实验结果及分析实验结果及分析蛋白浓度H17 为1.55 mg/mL，PHY为 1.852 mg/mL，HAP 为 1.414mg/mL，总共提取分别得到约H17 为7.75mg，PHY 为9.26mg ，HAP 为7.07mg目的蛋白。讨论 重组蛋白在大肠杆菌中的表达形式可分为三种： 1.胞外分泌表达， 2.周质空间表达， 3.胞内表达， HAP主要以第三种胞内表达为主，这种表达易形成无 活性的包涵体，需要经过复杂的变性和复性才能得到有 活性的蛋白。 当在大肠杆菌中大量表达外源蛋白时，表达的蛋白容易 形成包涵体，不利于纯化及后续的酶活性检测或酶学性 质研究。讨论提高重组基因表达蛋白HAP可溶性表 达的方法： 1.选择适合的载体和宿主菌； 2.降低重组蛋白合成的速率； 3.改变培养基成分； 4.与分子伴侣或折叠酶共表达； 5.通过替换氨基酸增加可溶性等。
