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1、第十二章 (2) 几种花卉的组织培养本章内容与目的要求： 掌握百合生物学特性和快速繁殖方法 掌握兰科植物组培的大致过程 掌握胡蝶兰花梗组培的方法第一节 百合的组织培养 全世界已发现百合约89余种，主要分布地区是中国、日本、北美和欧洲等温带地区； 北美百合协会将百合园艺品种划分为10个种系； 观赏栽培的主要是4个种系，即：亚洲百合杂种系、茶香百合杂种系、东方百合杂种系、麝香百合杂种系； 以上四品系株形端正，花色清白给人以清纯、高雅的印象，是切花中的佳品。 亚洲百合我国昆明、上海 、深圳的百合切 花生产发展较快 ，已形成三大生 产基地。麝香百合目前国内切花 栽培的百合大多 是亚洲型，主要 从荷兰、
2、日本引 进，经过几年的 栽培试验，已筛 选出一批适合我 国生产的品种。一、形态特性和生物学习性百合是百合科百合属植物的统称，为多年生的草 本植物。 鳞茎无皮，广卵形，直径5 8cm，白色或黄白色 ，茎高3090cm，直立，叶多而散生，披针形，光滑 。 花单生或数花横向着生茎顶，花朵呈喇叭状、筒 状，有清香。花被先端外卷，花被筒深处淡绿色。 百合属于球根花卉，要求肥沃、疏松和排水良好 的沙壤土，以有利于鳞茎发育膨大。二、传统的繁殖方法1.分球法：百合母球生长过程中，于茎轴上逐渐 形成小鳞茎，称“茎生小球”，经一年栽培，可分 生13个甚至79个小球。2.鳞片扦插法：于89月，取成熟健壮的老鳞茎，
3、阴干后剥下鳞片，斜插于湿润木屑或颗粒泥炭中，在 适宜温度、湿度下，经24个月生根发叶，并在鳞片 基部生长出小磷片，1片鳞片可获5060个子球，三、百合的组织培养本方法自20世纪70年代后期开始，日本人以叶 片为外植体诱导出大花卷丹的小植株；我国于80年代初由兰洲百合的花药、花丝等培 育出完整小植株。 80年代以后，培养出去病毒的百合种苗和通过 胚培养获得远缘杂交的新品种。1、花器的组织培养(1)取材和灭菌花蕾（开花前数日的） 酒精70擦拭 花蕾表面 酒精灯上灼烧35s 剥 开花蕾（无菌培养皿内） 分别切取花丝、 子房、花柱等（35mm） 接种。（2）培养基花柱（花梗、茎段等）：MS + IAA
4、 l.0 + BA 0.2 ；叶片用：MS+NAA 1.0+BA 0.1 ；植株分化：MS + NAA 2.0 + IBA 0.4 + Kt0.05； 以上均附加：蔗糖3和琼脂0.7，pH5.86.2。（3）培养条件光照度2000Lx，每天照用15h，保温 20。 花器部位：以花丝的部位为好，成活率很高 ，发芽较多；其次为子房和花柱部分。 子球形成途径：一是从切中处形成愈伤组织 ，以后再发芽；或是从切口直接产生芽。 麝香百合花器培养得到的植株，生长约6个月 即可开花，未发现不正常现象，只是母株的花 较大，且全株无病毒症状。(4)生长情况2、鳞片组织培养对于扩大培养材料来源，加快繁殖速度和培养得
5、到 无病毒苗等皆有重要意义。（1）取材与消毒：以鳞片外植体，受土壤微生物的影响， 所以污染率相当高。为此外植体消毒要严加注意，可应用几种 消毒剂并用的方法，切取0.5cm2鳞片接种。（2）初代培养基：MS + 2,4D 1.0 + IAA 1.0 + Kt 0.5继代培养：MS + NAA 2 + IBA 0.4 + Kt 0.05 （3）培养条件：25土 2，照光 9-10 hd，光强1200 Lx 。（4）生长情况 接种2周后，即有98左右的鳞片切块在近轴面或边缘 上有淡黄色的不定芽原基呈环状突起（24个/块），4周 后，可形成中间抽出绿色的白色小鳞茎，其基部发生一些 粗壮的根。 将幼苗切
6、成1.52cm长的片断，接种到诱导愈伤组织的 培养基上，3周后叶子的基部、叶脉、叶缘上均可诱导出一 团团淡黄色的愈伤组织。愈伤组织转移到分化培养基10周后，逐渐膨大，分化出 许多大小不等的鳞茎，并在基部长出许多粗壮的根。（5）试管苗移栽 首先应把根部的培养基清洗干净。 移栽前，放在410低温条件下锻炼23周， 这样移栽后的幼苗生长更加健壮。 移栽幼苗最好用消毒的腐殖土或泥炭土加蛭石的 混合基质，育苗盘必须清洗消毒。 移栽后注意湿度管理，相对湿度控制在8090 ，防止烈日曝晒，后期幼苗不宜浇水过多，并及时 喷洒药剂预防病虫危害。四、鳞茎打破休眠的方法百合栽培中首先避免因球根的休眠而导致发芽率不高
7、及盲 花。仅靠贮藏无法打破休眠，需要人工打破休眠，方法有 ： 1.冷藏：1315预冷，35冷藏6-7周。2.温水浸泡：于48的温水中，每隔23min提起再泡入 ，反复23次，后在45温水中浸泡1h，严格掌握水温。3.激素处理：用1000xGA溶液浸泡，为避免发根阻碍，可 先将球根倒置浸泡一半，而后恢复正常位置予以静置。第二节 兰花的组织培养技术兰花系兰科植物，在自然条件下主要靠分株繁殖，繁殖率 一年只有几倍，所以无法大量繁殖生产，而且由于长期进行 无性繁殖，带病毒株增多，逐渐使种性降低，影响生长。 一、概述法国Morel(1952年)等观察到虎头兰的茎尖在无菌培养基 上能形成扁圆形的小球体，这
8、些小球体与种胚发育成的原球 体非常相似，即原球茎，是兰花培养成功的关键。原球茎增殖很快，并可形成幼苗。这一方法和技术在兰花 生产上得到广泛的应用，造就了现在的“兰花工业”的发展 。国兰原球茎的增殖国兰幼苗的形成主要部位是：顶芽侧芽和花梗等1.新芽的茎尖茎尖是细胞分裂最旺盛的部分，也是培养成功 率最高的部位。2.花梗当兰花开花约一个月后，剪取其花梗顶端及若干 个花梗腋芽。二、培养部位三、茎尖的选取、灭菌和接种1.芽的准备和灭菌灭菌：切取26cm大小的芽 流水冲洗 去 掉12片苞叶 10次氯酸钠或漂白粉溶液中 浸10 15 min 接种。剥离和切割：在切割时应将芽放在无菌水中操作，减少褐变的机会。
9、 以消除病毒为目的时要尽量小些，可以小到0.1mm：若以繁殖 为目的，培养物可在25mm左右。2、培养基 大多兰花以MS培养基最好，另外KC培养基也 不错。 大多品种兰的茎尖接种以固体培养基为好； 蕙兰属在液体培养基培养形成原球茎后则用 固体培养基进行继代培养； 卡德兰属和石斛属这一类易变褐枯死，以在 液体培养基为好。3.继代培养 接种后12个月培养的茎尖即可形成原球茎球 状体，以后即发芽生根长叶。 发芽前把它切成小块进行转移，让它继续不断 地形成原球茎球状体。 这样连续的进行继代培养，短时间可以得到大 量的原球茎球状体。 苗有34叶大小，根23条时可移植。(1)从试管内取的苗用水将琼脂冲洗掉
10、，冲洗不彻 底会发生霉菌腐烂。(2)经水冲洗的苗吸干水分阴晾1h再定植。(3)移栽后保证，50的弱光，温度2025，保 持一定的湿度，不能完全密闭，也要注意通风。根 在开始生长后可1周浇一次1000倍的复合肥料。4、试管苗的移栽第三节 蝴蝶兰的培养1.茎尖培养(1) 将芽外植体消毒：除去叶后，用水冲洗， 10的漂白粉灭菌15min。除去叶原基后，用5的 漂白粉灭菌l0min，以后用无菌水冲洗35次。(2) 接种：切取茎尖和各叶基部的腋芽，约2 3mm大小，接种到培养基中。(3) 培养基：采用VW培养基，添加15CM进行 液体培养，或进行固体培养。茎尖(4) 培养条件 温度25，光照强度2000
11、Lx，照明1624h。 液体培养基用60rmin的速度进行振荡培养，培 养710d再转移到新的培养基，培养1个月后转移到 固体培养基。 培养1个月即可形成原球茎球状体，以后再进行继 代培养，不断繁殖原球茎球状体。2、花梗腋芽的培养(1)表面消毒:带腋芽花梗 自来水冲洗 10漂白粉溶液浸 泡20min 除去腋芽的苞叶 5的漂白粉溶 液中浸泡3min 无菌水冲洗（34次） 接种。 (2)培养基：诱芽培养基：MS + BA 3;诱导原球茎培养基：MS + BA 5 + NAA 0、5;增殖培养基：MS + BA 3 + NAA 0、2 + 炭1.5克/L;生根培养基：1/2MS + BA 1 + NAA 0.5 （PH：5.4）茎尖花梗(3)培养条件：光照强度2000Lx，光照时间13h/d，保持恒温 25。（4）移栽：生根之前可以进行过渡培养，不加激素。试 管苗的移栽用苔藓作基质。复习思考题(1)百合的生物学特性怎样?怎样用鳞茎进行 组织培养? (2)兰科植物培养过程包括哪几个环节? (3)蝶兰怎样用花梗组织培养方法繁殖?
