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1、(新)医学微生 物学 （实验二） 主讲人：岳启安实验内容一、细菌的分布二、消毒与灭菌三、细菌的遗传变异四、细菌的生化反应五、球菌一、细菌的分布1.空气2.手指（自做）3. 齿垢涂片（自做） 4. 泥土（示教）1.To examine bacteria in air of laboratory10min37 24hcoverTo observethe result2.To examine bacteria on fingerPress as fingerprintbefore sterilizationafter sterilizationAYour sign3.齿 垢 涂 片NSStep of
2、 Gram stainPurple (G+) Red(G- )Smear Smear crystal violet Lugols iodine 95% ethyl alcohol safranin +washwashwash1min2min3 0 seconds washBlot dry with bibulous paperthe oil- immersion objective (fixed)1min 齿垢涂片二、消毒与灭菌1.紫外线杀菌试验2.药敏试验抑菌圈抗生素滤纸片3.化学消毒剂的杀菌试验（自做）三、细菌的遗传变异细菌的变异现象1.HO变异2.L型变异3.耐药性变异变形杆菌迁徙生长现
3、象1.HO变异形态结构变异青霉素、溶菌酶 正常形态细菌 L型变异抗体或补体 (部分或完全失去胞壁)葡萄球菌葡萄球菌L型2.L型变异3. 耐药性变异四、细菌的生化反应根据细菌含有不相同的酶系统，可分解不 同的营养物质，用生化方法来鉴定细菌, 称细菌的生化反应1、细菌的分解代谢（1）糖发酵试验(Fermentation of sugars)细菌分解糖时，则产酸，使指示剂 变为黄色( “”)；有些细菌在分解糖产酸的同时还产生气体，在管中 有气泡出现(“)；如细菌不分解该 糖时，指示剂不变色 (“)。五糖生化反应：葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖（指示剂-溴甲酚紫）（对应发酵管颜色：红、黄、蓝、白、
4、黑）大肠杆菌： 伤寒杆菌： 伤寒杆菌大肠杆菌（2）吲哚试验有些细菌如大肠杆菌等能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚（靛基质），与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛相互作用，形成玫瑰红色化合物，为吲哚试验阳性。五、球 菌1.球菌形态观察2.球菌培养物观察3.血浆凝固酶试验4.抗O试验Staphylococcus(Gram stain)1.球菌形态观察Streptococcus （Gram stain）pneumococcusMeningococcus淋球菌（gonococcus）金黄色葡萄球菌菌落2.球菌培养物观察乙型溶血性链球菌菌落3.血浆凝固酶试验血浆凝固酶能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的人或兔血浆发生凝
5、固的酶类物质。凝固酶有两种：一种是分泌至菌体外的蛋白质称为游离凝固酶；另一种结合于 菌体表面并不释放的凝固酶，称结合凝 固酶或凝聚因子。凝 固 酶游离 凝 固 酶结合 凝 固 酶协同因 子凝血酶样物质纤维蛋白原纤维蛋白原( (液态）液态）纤维蛋白（固态）纤维蛋白（固态）血浆凝固（试管法）（纤维蛋白原受体）血浆纤维蛋白原+细菌凝聚（玻片法）（1）试管法取两支灭菌小试管，每管加入1：4稀释的兔血浆0.5ml，用灭菌接种环沾取金黄色葡萄球菌培养物，在一小试管内壁研磨使成均匀的混悬液；另一试管用表皮葡萄球菌做为对照。将两试管放在37水浴箱或温箱中24h 观察结果。观察结果时使试管倾斜，凡血浆呈现胶胨样
6、凝集者即为阳性，仍呈液状者为阴性。沾菌的接种环在此处 管内壁上轻轻研磨（2）玻片法在载玻片上各滴兔血浆、盐水一滴，取金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌平板培养物加入其中混匀，立即观察结果。有明显小凝块出现为阳性，无此现象者时为阴性。此法较简便，但不如试管法锐敏、准确。Procedures:Rabbit plasmaNSS.aureus S. epidermidisAfter mixing4.抗 O 试 验原理：乙型溶血性链球菌产生溶血毒素“O” （SLO ），具有很强的抗原性，可刺激机体产生抗体，于感染后23周至病愈后数月到一年可检出SLO抗体，风湿热病人血清中SLO抗体显著升高，一般其效价在1：4
7、00以上。因此，测定SLO抗体含量，可了解近期内有无链球菌感染的病史，作为风湿病辅助诊断的指标。SLO胶乳试剂测定抗O试验（反应板法）血清中ASLO的测定可用于链球菌感染的 诊断，ASLO高滴度的病人血清被适量的 SLO中和后还有多余的ASLO，这些多余的 抗体即与SLO胶乳试剂反应，出现清晰、均 匀的凝集颗粒。SLO胶乳试剂是根据免疫学 原理将羟化聚苯乙烯胶乳与SLO共价交联作 为抗原，用于测定受链球菌感染病人血清中 的ASLO。2. Soluble streptolysin O，shake up 13 minute;3. Soluble streptolysin O combine wit
8、h latex beads ， shake up 58 minuteNegative controlPositive control 1. Patient Serum Negative controlPositive control Patient Serum ASO test: ASO titer 1: 400 units, help to diagnose rheumatic fever.Uniformity turbidityWhite granule agglutination+-.实验报告一、球菌形态绘图（葡萄球菌、链球菌、脑膜炎双球菌、肺炎双球菌）二、记录并分析血浆凝固酶试验结果三、记录并分析抗“O”试验结果
