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1、药理学专业毕业论文药理学专业毕业论文 精品论文精品论文 黑米花色素苷对机体免疫生化黑米花色素苷对机体免疫生化功能影响的研究功能影响的研究关键词：黑米花色素苷关键词：黑米花色素苷 矢车菊素矢车菊素-3-3-葡萄糖苷葡萄糖苷 免疫调节免疫调节 一氧化氮一氧化氮 HelaHela 细胞细胞 细胞凋亡细胞凋亡摘要：目的： 制备具有药理活性的黑米花色素苷并分离纯化其主要的活性部 分，通过作用于细胞、动物模型测定一系列的免疫和生化功能指标，揭示其改 善机体营养状况、抗氧化、增强免疫功能的作用，从整体和分子水平上探讨其 抗氧化、促免疫和抗肿瘤的作用机制。 方法： 1.酸化乙醇法提取黑米色 素，再联用树脂柱、
2、凝胶柱层析分离纯化花色素苷，并通过薄层层析、紫外可 见光谱分析、高效液相色谱和质谱分析鉴定纯度和结构。 2.大鼠随机分为 4 组，每组以不同剂量的花色素苷，连续给药 30 d。从大鼠股动脉取血，在全自 动生化分析仪上测定血液主要生化指标。称胸腺、脾、肝和肾湿重，并计算其 湿重指数；生化方法测定胸腺、脾、肝、肾和巨噬细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、酸 性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和(或)还 原型谷胱甘肽(GSH)的活力，并进一步观察巨噬细胞摄取中性红的能力。 3. 用 CCK-8 试剂盒检测花色素苷对小鼠脾细胞的增殖作用，硝酸盐还原酶法检测 小
3、鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)的生成量，荧光法检测小鼠腹腔巨噬细胞一氧 化氮合酶(iNOS)的活性，RT-PCR 检测 iNOS mRNA 的表达。 4.用不同浓度的 花色素苷和矢车菊素-3-葡萄糖苷分别处理 Hela 细胞后，CCK-8 法测细胞生长 抑制率；Hoechst33258 染色，激光共聚焦镜下观察细胞形态；流式细胞仪检测 凋亡率；SABC 染色检测 Bax/Bcl-2 的蛋白表达。 结果： 1.检测黑米花色 素苷的纯度为 37.69，并鉴定其主活性部分化合物为矢车菊素-3-葡萄糖苷。 2.花色素苷组大鼠血液中尿素氮(UN)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇 (TCh)、低
4、密度脂蛋白(LDL)水平都有不同程度的降低，花色素苷组大鼠组织脏 器的湿重增加(胸腺、肝)，LDH(脾、肝、肾)、ACP(胸腺、脾、肝、肾)、 AKP(胸腺、肝、肾)活力、GSH(脾、肝、肾)、SOD(胸腺、脾、肝)水平显著上升， MDA(肝、肾)的含量下降。PMO 内 ACP、LDH 活力显著升高。PM 和 AM 中的 SOD 活力升高，降低 MDA 的水平，而且能显著增强大鼠 PM、AM 的吞噬能力。3.花色素苷可促进脾细胞的增殖，并在一定浓度下呈剂量依赖效应；能刺激 小鼠腹腔巨噬细胞 NO 的生成，提高一氧化氮合酶(NOS)的活性，其中矢车菊素- 3-葡萄糖苷可以诱导 iNOS mRNA
5、 的表达。 4.25400 mg/L 花色素苷和 12.5200mol/L 矢车菊素-3-葡萄糖苷可抑制 Hela 细胞生长，抑制率呈时间 剂量依赖性；激光共聚焦镜下可见到明显的凋亡细胞；流式细胞仪检测显示可 以提高凋亡率；免疫组化检测表明 Bax 表达上升，Bcl-2 表达下降。 结论： 1.证实黑米中花色素苷主要活性成分为矢车菊素-3-葡萄糖苷。 2.花色素苷 可以降低大鼠血液主要生化指标中尿素氮(UN)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、总 胆固醇(TCh)、低密度脂蛋白(LDL)的水平，通过调节 LDH、ACP、AKP、SOD、MDA 和(或)GSH 的活性对巨噬细胞和组织器官起保护作用
6、， 其中提高 LDH、ACP 的水平激活巨噬细胞活性和吞噬功能，表明花色素苷对机体 具有重要的免疫调节功能。 3.花色素苷有促进小鼠脾细胞的增殖作用并通过 增加一氧化氮合酶(NOS)合成，进而刺激小鼠巨噬细胞 NO 的生成，其中矢车菊素-3-葡萄糖苷可以诱导小鼠巨噬细胞 iNOS mRNA 转录。表明花色素苷具有促进 免疫的活性。 4.花色素苷与矢车菊素-3-葡萄糖苷都可抑制 Hela 细胞生长， 诱导其凋亡，其诱导凋亡的作用的机制与凋亡相关基因促凋亡基因 Bax 表达上 调，抗凋亡基因 Bcl-2 表达下调有关。正文内容正文内容目的： 制备具有药理活性的黑米花色素苷并分离纯化其主要的活性部分
7、， 通过作用于细胞、动物模型测定一系列的免疫和生化功能指标，揭示其改善机 体营养状况、抗氧化、增强免疫功能的作用，从整体和分子水平上探讨其抗氧 化、促免疫和抗肿瘤的作用机制。 方法： 1.酸化乙醇法提取黑米色素， 再联用树脂柱、凝胶柱层析分离纯化花色素苷，并通过薄层层析、紫外可见光 谱分析、高效液相色谱和质谱分析鉴定纯度和结构。 2.大鼠随机分为 4 组， 每组以不同剂量的花色素苷，连续给药 30 d。从大鼠股动脉取血，在全自动生 化分析仪上测定血液主要生化指标。称胸腺、脾、肝和肾湿重，并计算其湿重 指数；生化方法测定胸腺、脾、肝、肾和巨噬细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷 酸酶(ACP)、碱
8、性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和(或)还 原型谷胱甘肽(GSH)的活力，并进一步观察巨噬细胞摄取中性红的能力。 3. 用 CCK-8 试剂盒检测花色素苷对小鼠脾细胞的增殖作用，硝酸盐还原酶法检测 小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)的生成量，荧光法检测小鼠腹腔巨噬细胞一氧 化氮合酶(iNOS)的活性，RT-PCR 检测 iNOS mRNA 的表达。 4.用不同浓度的 花色素苷和矢车菊素-3-葡萄糖苷分别处理 Hela 细胞后，CCK-8 法测细胞生长 抑制率；Hoechst33258 染色，激光共聚焦镜下观察细胞形态；流式细胞仪检测 凋亡率；SABC 染色检测 Ba
9、x/Bcl-2 的蛋白表达。 结果： 1.检测黑米花色 素苷的纯度为 37.69，并鉴定其主活性部分化合物为矢车菊素-3-葡萄糖苷。 2.花色素苷组大鼠血液中尿素氮(UN)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇 (TCh)、低密度脂蛋白(LDL)水平都有不同程度的降低，花色素苷组大鼠组织脏 器的湿重增加(胸腺、肝)，LDH(脾、肝、肾)、ACP(胸腺、脾、肝、肾)、 AKP(胸腺、肝、肾)活力、GSH(脾、肝、肾)、SOD(胸腺、脾、肝)水平显著上升， MDA(肝、肾)的含量下降。PMO 内 ACP、LDH 活力显著升高。PM 和 AM 中的 SOD 活力升高，降低 MDA 的水平，而且能
10、显著增强大鼠 PM、AM 的吞噬能力。3.花色素苷可促进脾细胞的增殖，并在一定浓度下呈剂量依赖效应；能刺激 小鼠腹腔巨噬细胞 NO 的生成，提高一氧化氮合酶(NOS)的活性，其中矢车菊素- 3-葡萄糖苷可以诱导 iNOS mRNA 的表达。 4.25400 mg/L 花色素苷和 12.5200mol/L 矢车菊素-3-葡萄糖苷可抑制 Hela 细胞生长，抑制率呈时间 剂量依赖性；激光共聚焦镜下可见到明显的凋亡细胞；流式细胞仪检测显示可 以提高凋亡率；免疫组化检测表明 Bax 表达上升，Bcl-2 表达下降。 结论： 1.证实黑米中花色素苷主要活性成分为矢车菊素-3-葡萄糖苷。 2.花色素苷 可
11、以降低大鼠血液主要生化指标中尿素氮(UN)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、总 胆固醇(TCh)、低密度脂蛋白(LDL)的水平，通过调节 LDH、ACP、AKP、SOD、MDA 和(或)GSH 的活性对巨噬细胞和组织器官起保护作用， 其中提高 LDH、ACP 的水平激活巨噬细胞活性和吞噬功能，表明花色素苷对机体 具有重要的免疫调节功能。 3.花色素苷有促进小鼠脾细胞的增殖作用并通过 增加一氧化氮合酶(NOS)合成，进而刺激小鼠巨噬细胞 NO 的生成，其中矢车菊 素-3-葡萄糖苷可以诱导小鼠巨噬细胞 iNOS mRNA 转录。表明花色素苷具有促进 免疫的活性。 4.花色素苷与矢车菊素-3-葡萄糖
12、苷都可抑制 Hela 细胞生长， 诱导其凋亡，其诱导凋亡的作用的机制与凋亡相关基因促凋亡基因 Bax 表达上 调，抗凋亡基因 Bcl-2 表达下调有关。 目的： 制备具有药理活性的黑米花色素苷并分离纯化其主要的活性部分，通过作用于细胞、动物模型测定一系列的免疫和生化功能指标，揭示其改善机体 营养状况、抗氧化、增强免疫功能的作用，从整体和分子水平上探讨其抗氧化、 促免疫和抗肿瘤的作用机制。 方法： 1.酸化乙醇法提取黑米色素，再联 用树脂柱、凝胶柱层析分离纯化花色素苷，并通过薄层层析、紫外可见光谱分 析、高效液相色谱和质谱分析鉴定纯度和结构。 2.大鼠随机分为 4 组，每组 以不同剂量的花色素苷
13、，连续给药 30 d。从大鼠股动脉取血，在全自动生化分 析仪上测定血液主要生化指标。称胸腺、脾、肝和肾湿重，并计算其湿重指数； 生化方法测定胸腺、脾、肝、肾和巨噬细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶 (ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和(或)还原型 谷胱甘肽(GSH)的活力，并进一步观察巨噬细胞摄取中性红的能力。 3.用 CCK-8 试剂盒检测花色素苷对小鼠脾细胞的增殖作用，硝酸盐还原酶法检测小 鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)的生成量，荧光法检测小鼠腹腔巨噬细胞一氧化 氮合酶(iNOS)的活性，RT-PCR 检测 iNOS mRNA 的表达。 4.用
14、不同浓度的花 色素苷和矢车菊素-3-葡萄糖苷分别处理 Hela 细胞后，CCK-8 法测细胞生长抑 制率；Hoechst33258 染色，激光共聚焦镜下观察细胞形态；流式细胞仪检测凋 亡率；SABC 染色检测 Bax/Bcl-2 的蛋白表达。 结果： 1.检测黑米花色素 苷的纯度为 37.69，并鉴定其主活性部分化合物为矢车菊素-3-葡萄糖苷。 2.花色素苷组大鼠血液中尿素氮(UN)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇 (TCh)、低密度脂蛋白(LDL)水平都有不同程度的降低，花色素苷组大鼠组织脏 器的湿重增加(胸腺、肝)，LDH(脾、肝、肾)、ACP(胸腺、脾、肝、肾)、 AKP(胸腺
15、、肝、肾)活力、GSH(脾、肝、肾)、SOD(胸腺、脾、肝)水平显著上升， MDA(肝、肾)的含量下降。PMO 内 ACP、LDH 活力显著升高。PM 和 AM 中的 SOD 活力升高，降低 MDA 的水平，而且能显著增强大鼠 PM、AM 的吞噬能力。3.花色素苷可促进脾细胞的增殖，并在一定浓度下呈剂量依赖效应；能刺激 小鼠腹腔巨噬细胞 NO 的生成，提高一氧化氮合酶(NOS)的活性，其中矢车菊素- 3-葡萄糖苷可以诱导 iNOS mRNA 的表达。 4.25400 mg/L 花色素苷和 12.5200mol/L 矢车菊素-3-葡萄糖苷可抑制 Hela 细胞生长，抑制率呈时间 剂量依赖性；激光
16、共聚焦镜下可见到明显的凋亡细胞；流式细胞仪检测显示可 以提高凋亡率；免疫组化检测表明 Bax 表达上升，Bcl-2 表达下降。 结论： 1.证实黑米中花色素苷主要活性成分为矢车菊素-3-葡萄糖苷。 2.花色素苷 可以降低大鼠血液主要生化指标中尿素氮(UN)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、总 胆固醇(TCh)、低密度脂蛋白(LDL)的水平，通过调节 LDH、ACP、AKP、SOD、MDA 和(或)GSH 的活性对巨噬细胞和组织器官起保护作用， 其中提高 LDH、ACP 的水平激活巨噬细胞活性和吞噬功能，表明花色素苷对机体 具有重要的免疫调节功能。 3.花色素苷有促进小鼠脾细胞的增殖作用并通过 增加一氧化氮合酶(NOS)合成，进而刺激小鼠巨噬细胞 NO 的生成，其中矢车菊 素-3-葡萄糖苷可以诱导小鼠巨噬细胞 iNOS
