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1、生物化学与分子生物学专业毕业论文生物化学与分子生物学专业毕业论文 精品论文精品论文 裂殖酵母中核裂殖酵母中核仁蛋白仁蛋白 Dnt1Dnt1 与肿瘤抑制因子与肿瘤抑制因子 ChfrChfr 的同源蛋白的同源蛋白 Dma1Dma1 相互作用的研究相互作用的研究关键词：关键词：DmalDmal 蛋白蛋白 DntlDntl 蛋白蛋白 SINSIN 信号途径信号途径 裂殖酵母裂殖酵母 核仁蛋白核仁蛋白 肿瘤抑制因肿瘤抑制因 子子摘要：在裂殖酵母 S.pombe 中，人类肿瘤抑制因子 Chfr 的同源蛋白 Dmal 是纺 锤体检验点蛋白和胞质分裂的抑制因子，它通过抑制 SIN(septation init
2、iation network)信号途径来阻止胞质分裂的起始；在有丝分裂后期 Dmal 同时定位在纺锤体极体(spindle pole body，简称 SPB；相当于哺乳动物的中 心体)和有丝分裂环上。而核仁蛋白 Dntl 与出芽酵母中的 Netl/Cfil 具有同源 序列，是一个新发现的有丝分裂早期 SIN 的抑制因子；整个细胞周期 Dntl 都在 核仁内有定位，在有丝分裂后期还会定位在纺锤体及 SPB 上。基于 Dmal 和 Dntl 都有在 SPB 上定位，并且均可调控胞质分裂过程，因此本论文主要研究 Dmal 和 Dntl 两种蛋白的相互作用关系。 我们将 Dmal 和 Dntl 分别在
3、细菌和 dntl的酵母细胞中表达后，进行 pull-down 实验，纯化后的结果显示 Dmal 与 Dntl 在体外有着直接的相互作用；随后我们在细菌内表达 Dmal 的全长和 FHA 区域缺失突变体，让其分别与酵母细胞内表达的 Dntl-13myc 进行体外结合 实验，Western blot 检测结果发现两种蛋白之间的相互作用是通过 Dmal 的 FHA 区域介导的，而 FHA 区域，被认为是一个可以识别并结合到被磷酸化的肽链或 蛋白上的区域。本论文中分别用 CIAP 和 -PPase 对蛋白进行去磷酸化处理， 结果发现 Dntl 蛋白磷酸化后才可以与 Dmal 相结合。 因为 Dmal
4、与磷酸化 Dntl 在有丝分裂中期的相互作用可以达到最强，而 CDK1 和 Plol 是调节酵母细 胞周期中的两个关键激酶，其活性都是在有丝分裂中期达到最高；我们分别利 用 CDK1 位点突变的 dntl(7A)、dntl(11A)和 Plol 突变体 plol-24c、plol-25 以及与 Plo 激酶活性有关的突变体 cut12.1 检测这两种激酶对 Dntl 磷酸化的影 响，结果显示 CDK1 和 Plol 可能并不影响 Dntl 的磷酸化进而影响 Dntl 与 Dmal 的相互作用。 本论文初步阐明了 Dmal 与 Dntl 蛋白的相互作用机制，在正常 的有丝分裂中期被磷酸化后的 D
5、ntl 可以很强地结合到 Dmal 上，以达到在这一 时期抑制 Dmal 的 E3 泛素连接酶活性的目的，保护 Dmal 的底物不会在这一时期 过早被降解。鉴于裂殖酵母中的 Dmal 是哺乳动物中 Chfr 的同源蛋白，对于 Dmal 的深入研究将加深我们对于 Chfr 的功能的认识。正文内容正文内容在裂殖酵母 S.pombe 中，人类肿瘤抑制因子 Chfr 的同源蛋白 Dmal 是纺锤 体检验点蛋白和胞质分裂的抑制因子，它通过抑制 SIN(septation initiation network)信号途径来阻止胞质分裂的起始；在有丝分裂后期 Dmal 同时定位在纺 锤体极体(spindle
6、pole body，简称 SPB；相当于哺乳动物的中心体)和有丝分 裂环上。而核仁蛋白 Dntl 与出芽酵母中的 Netl/Cfil 具有同源序列，是一个新 发现的有丝分裂早期 SIN 的抑制因子；整个细胞周期 Dntl 都在核仁内有定位， 在有丝分裂后期还会定位在纺锤体及 SPB 上。基于 Dmal 和 Dntl 都有在 SPB 上 定位，并且均可调控胞质分裂过程，因此本论文主要研究 Dmal 和 Dntl 两种蛋 白的相互作用关系。 我们将 Dmal 和 Dntl 分别在细菌和 dntl的酵母细胞 中表达后，进行 pull-down 实验，纯化后的结果显示 Dmal 与 Dntl 在体外有
7、着 直接的相互作用；随后我们在细菌内表达 Dmal 的全长和 FHA 区域缺失突变体， 让其分别与酵母细胞内表达的 Dntl-13myc 进行体外结合实验，Western blot 检测结果发现两种蛋白之间的相互作用是通过 Dmal 的 FHA 区域介导的，而 FHA 区域，被认为是一个可以识别并结合到被磷酸化的肽链或蛋白上的区域。本论 文中分别用 CIAP 和 -PPase 对蛋白进行去磷酸化处理，结果发现 Dntl 蛋白磷 酸化后才可以与 Dmal 相结合。 因为 Dmal 与磷酸化 Dntl 在有丝分裂中期的 相互作用可以达到最强，而 CDK1 和 Plol 是调节酵母细胞周期中的两个关
8、键激 酶，其活性都是在有丝分裂中期达到最高；我们分别利用 CDK1 位点突变的 dntl(7A)、dntl(11A)和 Plol 突变体 plol-24c、plol-25 以及与 Plo 激酶活性 有关的突变体 cut12.1 检测这两种激酶对 Dntl 磷酸化的影响，结果显示 CDK1 和 Plol 可能并不影响 Dntl 的磷酸化进而影响 Dntl 与 Dmal 的相互作用。 本 论文初步阐明了 Dmal 与 Dntl 蛋白的相互作用机制，在正常的有丝分裂中期被 磷酸化后的 Dntl 可以很强地结合到 Dmal 上，以达到在这一时期抑制 Dmal 的 E3 泛素连接酶活性的目的，保护 Dm
9、al 的底物不会在这一时期过早被降解。鉴 于裂殖酵母中的 Dmal 是哺乳动物中 Chfr 的同源蛋白，对于 Dmal 的深入研究将 加深我们对于 Chfr 的功能的认识。 在裂殖酵母 S.pombe 中，人类肿瘤抑制因子 Chfr 的同源蛋白 Dmal 是纺锤体检 验点蛋白和胞质分裂的抑制因子，它通过抑制 SIN(septation initiation network)信号途径来阻止胞质分裂的起始；在有丝分裂后期 Dmal 同时定位在纺 锤体极体(spindle pole body，简称 SPB；相当于哺乳动物的中心体)和有丝分 裂环上。而核仁蛋白 Dntl 与出芽酵母中的 Netl/Cf
10、il 具有同源序列，是一个新 发现的有丝分裂早期 SIN 的抑制因子；整个细胞周期 Dntl 都在核仁内有定位， 在有丝分裂后期还会定位在纺锤体及 SPB 上。基于 Dmal 和 Dntl 都有在 SPB 上 定位，并且均可调控胞质分裂过程，因此本论文主要研究 Dmal 和 Dntl 两种蛋 白的相互作用关系。 我们将 Dmal 和 Dntl 分别在细菌和 dntl的酵母细胞 中表达后，进行 pull-down 实验，纯化后的结果显示 Dmal 与 Dntl 在体外有着 直接的相互作用；随后我们在细菌内表达 Dmal 的全长和 FHA 区域缺失突变体， 让其分别与酵母细胞内表达的 Dntl-1
11、3myc 进行体外结合实验，Western blot 检测结果发现两种蛋白之间的相互作用是通过 Dmal 的 FHA 区域介导的，而 FHA 区域，被认为是一个可以识别并结合到被磷酸化的肽链或蛋白上的区域。本论 文中分别用 CIAP 和 -PPase 对蛋白进行去磷酸化处理，结果发现 Dntl 蛋白磷 酸化后才可以与 Dmal 相结合。 因为 Dmal 与磷酸化 Dntl 在有丝分裂中期的相互作用可以达到最强，而 CDK1 和 Plol 是调节酵母细胞周期中的两个关键激 酶，其活性都是在有丝分裂中期达到最高；我们分别利用 CDK1 位点突变的 dntl(7A)、dntl(11A)和 Plol
12、突变体 plol-24c、plol-25 以及与 Plo 激酶活性 有关的突变体 cut12.1 检测这两种激酶对 Dntl 磷酸化的影响，结果显示 CDK1 和 Plol 可能并不影响 Dntl 的磷酸化进而影响 Dntl 与 Dmal 的相互作用。 本 论文初步阐明了 Dmal 与 Dntl 蛋白的相互作用机制，在正常的有丝分裂中期被 磷酸化后的 Dntl 可以很强地结合到 Dmal 上，以达到在这一时期抑制 Dmal 的 E3 泛素连接酶活性的目的，保护 Dmal 的底物不会在这一时期过早被降解。鉴 于裂殖酵母中的 Dmal 是哺乳动物中 Chfr 的同源蛋白，对于 Dmal 的深入研究
13、将 加深我们对于 Chfr 的功能的认识。 在裂殖酵母 S.pombe 中，人类肿瘤抑制因子 Chfr 的同源蛋白 Dmal 是纺锤体检 验点蛋白和胞质分裂的抑制因子，它通过抑制 SIN(septation initiation network)信号途径来阻止胞质分裂的起始；在有丝分裂后期 Dmal 同时定位在纺 锤体极体(spindle pole body，简称 SPB；相当于哺乳动物的中心体)和有丝分 裂环上。而核仁蛋白 Dntl 与出芽酵母中的 Netl/Cfil 具有同源序列，是一个新 发现的有丝分裂早期 SIN 的抑制因子；整个细胞周期 Dntl 都在核仁内有定位， 在有丝分裂后期还
14、会定位在纺锤体及 SPB 上。基于 Dmal 和 Dntl 都有在 SPB 上 定位，并且均可调控胞质分裂过程，因此本论文主要研究 Dmal 和 Dntl 两种蛋 白的相互作用关系。 我们将 Dmal 和 Dntl 分别在细菌和 dntl的酵母细胞 中表达后，进行 pull-down 实验，纯化后的结果显示 Dmal 与 Dntl 在体外有着 直接的相互作用；随后我们在细菌内表达 Dmal 的全长和 FHA 区域缺失突变体， 让其分别与酵母细胞内表达的 Dntl-13myc 进行体外结合实验，Western blot 检测结果发现两种蛋白之间的相互作用是通过 Dmal 的 FHA 区域介导的，
15、而 FHA 区域，被认为是一个可以识别并结合到被磷酸化的肽链或蛋白上的区域。本论 文中分别用 CIAP 和 -PPase 对蛋白进行去磷酸化处理，结果发现 Dntl 蛋白磷 酸化后才可以与 Dmal 相结合。 因为 Dmal 与磷酸化 Dntl 在有丝分裂中期的 相互作用可以达到最强，而 CDK1 和 Plol 是调节酵母细胞周期中的两个关键激 酶，其活性都是在有丝分裂中期达到最高；我们分别利用 CDK1 位点突变的 dntl(7A)、dntl(11A)和 Plol 突变体 plol-24c、plol-25 以及与 Plo 激酶活性 有关的突变体 cut12.1 检测这两种激酶对 Dntl 磷
16、酸化的影响，结果显示 CDK1 和 Plol 可能并不影响 Dntl 的磷酸化进而影响 Dntl 与 Dmal 的相互作用。 本 论文初步阐明了 Dmal 与 Dntl 蛋白的相互作用机制，在正常的有丝分裂中期被 磷酸化后的 Dntl 可以很强地结合到 Dmal 上，以达到在这一时期抑制 Dmal 的 E3 泛素连接酶活性的目的，保护 Dmal 的底物不会在这一时期过早被降解。鉴 于裂殖酵母中的 Dmal 是哺乳动物中 Chfr 的同源蛋白，对于 Dmal 的深入研究将 加深我们对于 Chfr 的功能的认识。 在裂殖酵母 S.pombe 中，人类肿瘤抑制因子 Chfr 的同源蛋白 Dmal 是纺锤体检 验点蛋白和胞质分裂的抑制因子，它通过抑制 SIN(septation initiation network)信号途径来阻止胞质分裂的起始；在有丝分裂后期 Dmal 同时定位在纺 锤体极体(spindle pole body，简称 SPB；相当于哺乳动物的中心体)和有丝分 裂环上。而
