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1、预防兽医学专业优秀论文预防兽医学专业优秀论文 青海血蜱高致病性绿僵菌菌株的筛选及青海血蜱高致病性绿僵菌菌株的筛选及生物学特性生物学特性关键词：金龟子绿僵菌关键词：金龟子绿僵菌 生物学特性生物学特性 青海血蜱青海血蜱 菌株筛选菌株筛选 分离培养分离培养 菌种鉴定菌种鉴定摘要：金龟子绿僵菌 Metarhizium anisopliae（Metschn.）Sorokin.在生物学 分类上属于半知菌亚门、丛梗孢目、瘤座孢科、绿僵菌属，是一种广谱性杀虫 真菌，能寄生 8 个目、30 个科中的 200 余种农林害虫。目前，在许多国家已作 为重要的生物防治作用物，用于害虫的防治。以绿僵菌作为生防因子的生物防
2、 治是控制蜱危害的重要措施。为获得适于田间应用的高毒力绿僵菌菌株，以及 探索利用绿僵菌防治蜱的有效途径。本文做了如下研究，从野外长角血蜱僵尸 体内分离得到一株绿僵菌，应用形态学、分子生物学方法进行了鉴定并命名为 MaLS01；通过对青海血蜱的毒力筛选实验，以期获得高毒力优良菌株，探讨不 同寄主的菌株致病性差异；系统研究了该分离株的培养特性、与常规生物杀虫 剂的相容性、最佳固体培养条件，为在青海血蜱综合防治中有效利用绿僵菌提 供理论依据，同时也为寄主与病原物互作关系的研究提供新的例证。主要实验 结果如下： 1.绿僵菌菌株的分离、培养和鉴定 采用孢子稀释分离法，从 野外长角血蜱成蜱体内进行菌株的分
3、离。取虫尸体表的分生孢子，用无菌水制 成孢子悬液，用接种环在 PDA 平板表面进行划线，于（281）的培养箱中培 养，待长出菌落后，挑取菌落边缘带菌丝的菌落进行菌株的分离，并于斜面培 养基上培养保存。观察菌株在 PDA 培养基上培养性状，光学显微镜下观察和测 量分生孢子梗、产孢细胞大小、分生孢子形状及大小等分类特征，并按照 Rombach 的分类标准初步鉴定分离菌株的分类地位，通过扩增绿僵菌属 ITS1- 58S-ITS2rDNA 序列，进一步确认该分离株为金龟子绿僵菌小孢变种，并命名 为 MaLS01。 2.青海血蜱高毒力菌株的筛选 应用绿僵菌分离株 MaLS01 并 结合实验室所保存的 6
4、 株虫生真菌对青海血蜱饱血雌蜱进行室内感染实验。结 果显示，当终浓度为 1108 孢子/mL 时，绿僵菌 MaLS01、Ma1、Ma2、Ma3，白 僵菌 Bb1、Bb2、Bb314d 的累计死亡率可达 80%、6667%、6000%、6333%、5567%、4333%、3333%。其中绿僵菌 MaLS01 显示了较高的毒力。 3.菌株 MaLS01 培养特性的研究 通过生物学 研究确定了适宜高毒菌株 MaLS01 营养生长和产孢的培养基及最佳碳氮比，明确 了该菌株生长和产孢对温度、酸碱度等培养条件的要求，以及环境条件对分生 孢子萌发的影响，确定了该菌株生长发育和繁殖的适宜温度范围。研究结果表
5、明，该菌株在 PPDA 培养基上生长良好，最适生长温度为 30、pH 值 59，最 适碳氮比在 2：051。结果显示该菌株对环境条件有良好适应性，并具有较 强的耐高温能力。 4.菌株 MaLS01 与常用农药的相溶性测定 以孢子的萌发 率为指标，分高、中、低三个浓度测定了 5 种常用生物农药与菌株 MaLS01 的相 溶性，结果表明阿维毒死蜱与供试菌株具有较好的相溶性，12 小时孢子萌发率 分别为 8529%、9000%、9644%。 5.菌株 MaLS01 固体发酵研究 选用 大米、麸皮、谷糠、苜蓿、玉米粉为原料，改变各成分的比例，设计了 A、B、C、D、E、F 六种固体培养基，以产孢量和孢
6、子萌发率为指标进行筛选， 结果表明培养基 F 在产孢量和孢子萌发率上具有一定优势，可以作为菌株 MaLS01 的固体发酵用培养基。正文内容正文内容金龟子绿僵菌 Metarhizium anisopliae（Metschn.）Sorokin.在生物学分 类上属于半知菌亚门、丛梗孢目、瘤座孢科、绿僵菌属，是一种广谱性杀虫真 菌，能寄生 8 个目、30 个科中的 200 余种农林害虫。目前，在许多国家已作为 重要的生物防治作用物，用于害虫的防治。以绿僵菌作为生防因子的生物防治 是控制蜱危害的重要措施。为获得适于田间应用的高毒力绿僵菌菌株，以及探 索利用绿僵菌防治蜱的有效途径。本文做了如下研究，从野外
7、长角血蜱僵尸体 内分离得到一株绿僵菌，应用形态学、分子生物学方法进行了鉴定并命名为 MaLS01；通过对青海血蜱的毒力筛选实验，以期获得高毒力优良菌株，探讨不 同寄主的菌株致病性差异；系统研究了该分离株的培养特性、与常规生物杀虫 剂的相容性、最佳固体培养条件，为在青海血蜱综合防治中有效利用绿僵菌提 供理论依据，同时也为寄主与病原物互作关系的研究提供新的例证。主要实验 结果如下： 1.绿僵菌菌株的分离、培养和鉴定 采用孢子稀释分离法，从 野外长角血蜱成蜱体内进行菌株的分离。取虫尸体表的分生孢子，用无菌水制 成孢子悬液，用接种环在 PDA 平板表面进行划线，于（281）的培养箱中培 养，待长出菌落
8、后，挑取菌落边缘带菌丝的菌落进行菌株的分离，并于斜面培 养基上培养保存。观察菌株在 PDA 培养基上培养性状，光学显微镜下观察和测 量分生孢子梗、产孢细胞大小、分生孢子形状及大小等分类特征，并按照 Rombach 的分类标准初步鉴定分离菌株的分类地位，通过扩增绿僵菌属 ITS1- 58S-ITS2rDNA 序列，进一步确认该分离株为金龟子绿僵菌小孢变种，并命名 为 MaLS01。 2.青海血蜱高毒力菌株的筛选 应用绿僵菌分离株 MaLS01 并 结合实验室所保存的 6 株虫生真菌对青海血蜱饱血雌蜱进行室内感染实验。结 果显示，当终浓度为 1108 孢子/mL 时，绿僵菌 MaLS01、Ma1、
9、Ma2、Ma3，白 僵菌 Bb1、Bb2、Bb314d 的累计死亡率可达 80%、6667%、6000%、6333%、5567%、4333%、3333%。其中绿僵菌 MaLS01 显示了较高的毒力。 3.菌株 MaLS01 培养特性的研究 通过生物学 研究确定了适宜高毒菌株 MaLS01 营养生长和产孢的培养基及最佳碳氮比，明确 了该菌株生长和产孢对温度、酸碱度等培养条件的要求，以及环境条件对分生 孢子萌发的影响，确定了该菌株生长发育和繁殖的适宜温度范围。研究结果表 明，该菌株在 PPDA 培养基上生长良好，最适生长温度为 30、pH 值 59，最 适碳氮比在 2：051。结果显示该菌株对环境
10、条件有良好适应性，并具有较 强的耐高温能力。 4.菌株 MaLS01 与常用农药的相溶性测定 以孢子的萌发 率为指标，分高、中、低三个浓度测定了 5 种常用生物农药与菌株 MaLS01 的相 溶性，结果表明阿维毒死蜱与供试菌株具有较好的相溶性，12 小时孢子萌发率 分别为 8529%、9000%、9644%。 5.菌株 MaLS01 固体发酵研究 选用 大米、麸皮、谷糠、苜蓿、玉米粉为原料，改变各成分的比例，设计了 A、B、C、D、E、F 六种固体培养基，以产孢量和孢子萌发率为指标进行筛选， 结果表明培养基 F 在产孢量和孢子萌发率上具有一定优势，可以作为菌株 MaLS01 的固体发酵用培养基
11、。 金龟子绿僵菌 Metarhizium anisopliae（Metschn.）Sorokin.在生物学分类上 属于半知菌亚门、丛梗孢目、瘤座孢科、绿僵菌属，是一种广谱性杀虫真菌， 能寄生 8 个目、30 个科中的 200 余种农林害虫。目前，在许多国家已作为重要 的生物防治作用物，用于害虫的防治。以绿僵菌作为生防因子的生物防治是控制蜱危害的重要措施。为获得适于田间应用的高毒力绿僵菌菌株，以及探索利 用绿僵菌防治蜱的有效途径。本文做了如下研究，从野外长角血蜱僵尸体内分 离得到一株绿僵菌，应用形态学、分子生物学方法进行了鉴定并命名为 MaLS01；通过对青海血蜱的毒力筛选实验，以期获得高毒力优
12、良菌株，探讨不 同寄主的菌株致病性差异；系统研究了该分离株的培养特性、与常规生物杀虫 剂的相容性、最佳固体培养条件，为在青海血蜱综合防治中有效利用绿僵菌提 供理论依据，同时也为寄主与病原物互作关系的研究提供新的例证。主要实验 结果如下： 1.绿僵菌菌株的分离、培养和鉴定 采用孢子稀释分离法，从 野外长角血蜱成蜱体内进行菌株的分离。取虫尸体表的分生孢子，用无菌水制 成孢子悬液，用接种环在 PDA 平板表面进行划线，于（281）的培养箱中培 养，待长出菌落后，挑取菌落边缘带菌丝的菌落进行菌株的分离，并于斜面培 养基上培养保存。观察菌株在 PDA 培养基上培养性状，光学显微镜下观察和测 量分生孢子梗
13、、产孢细胞大小、分生孢子形状及大小等分类特征，并按照 Rombach 的分类标准初步鉴定分离菌株的分类地位，通过扩增绿僵菌属 ITS1- 58S-ITS2rDNA 序列，进一步确认该分离株为金龟子绿僵菌小孢变种，并命名 为 MaLS01。 2.青海血蜱高毒力菌株的筛选 应用绿僵菌分离株 MaLS01 并 结合实验室所保存的 6 株虫生真菌对青海血蜱饱血雌蜱进行室内感染实验。结 果显示，当终浓度为 1108 孢子/mL 时，绿僵菌 MaLS01、Ma1、Ma2、Ma3，白 僵菌 Bb1、Bb2、Bb314d 的累计死亡率可达 80%、6667%、6000%、6333%、5567%、4333%、3
14、333%。其中绿僵菌 MaLS01 显示了较高的毒力。 3.菌株 MaLS01 培养特性的研究 通过生物学 研究确定了适宜高毒菌株 MaLS01 营养生长和产孢的培养基及最佳碳氮比，明确 了该菌株生长和产孢对温度、酸碱度等培养条件的要求，以及环境条件对分生 孢子萌发的影响，确定了该菌株生长发育和繁殖的适宜温度范围。研究结果表 明，该菌株在 PPDA 培养基上生长良好，最适生长温度为 30、pH 值 59，最 适碳氮比在 2：051。结果显示该菌株对环境条件有良好适应性，并具有较 强的耐高温能力。 4.菌株 MaLS01 与常用农药的相溶性测定 以孢子的萌发 率为指标，分高、中、低三个浓度测定了
15、 5 种常用生物农药与菌株 MaLS01 的相 溶性，结果表明阿维毒死蜱与供试菌株具有较好的相溶性，12 小时孢子萌发率 分别为 8529%、9000%、9644%。 5.菌株 MaLS01 固体发酵研究 选用 大米、麸皮、谷糠、苜蓿、玉米粉为原料，改变各成分的比例，设计了 A、B、C、D、E、F 六种固体培养基，以产孢量和孢子萌发率为指标进行筛选， 结果表明培养基 F 在产孢量和孢子萌发率上具有一定优势，可以作为菌株 MaLS01 的固体发酵用培养基。 金龟子绿僵菌 Metarhizium anisopliae（Metschn.）Sorokin.在生物学分类上 属于半知菌亚门、丛梗孢目、瘤座
16、孢科、绿僵菌属，是一种广谱性杀虫真菌， 能寄生 8 个目、30 个科中的 200 余种农林害虫。目前，在许多国家已作为重要 的生物防治作用物，用于害虫的防治。以绿僵菌作为生防因子的生物防治是控 制蜱危害的重要措施。为获得适于田间应用的高毒力绿僵菌菌株，以及探索利 用绿僵菌防治蜱的有效途径。本文做了如下研究，从野外长角血蜱僵尸体内分 离得到一株绿僵菌，应用形态学、分子生物学方法进行了鉴定并命名为 MaLS01；通过对青海血蜱的毒力筛选实验，以期获得高毒力优良菌株，探讨不 同寄主的菌株致病性差异；系统研究了该分离株的培养特性、与常规生物杀虫 剂的相容性、最佳固体培养条件，为在青海血蜱综合防治中有效利用绿僵菌提供理论依据，同时也为寄主与病原物互作关系的研究提供新的例证。主要实验 结果如下： 1.绿僵菌菌株的分离、培养和鉴定 采用孢子稀释分离法，从 野
