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1、口腔临床医学专业毕业论文口腔临床医学专业毕业论文 精品论文精品论文 脂多糖诱发急性牙髓炎脂多糖诱发急性牙髓炎致敏的三叉神经节功能蛋白质组学研究致敏的三叉神经节功能蛋白质组学研究关键词：关键词：c-fosc-fos 蛋白蛋白 胶质纤维酸性蛋白胶质纤维酸性蛋白 蛋白质组学蛋白质组学 神经系统致敏神经系统致敏 口腔颌面口腔颌面 部急慢性疼痛部急慢性疼痛 急性牙髓炎急性牙髓炎摘要：目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题正是 神经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有 很多优点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研究牙髓和 口颌面疼痛的机制具有
2、重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封 LPS 的方法，建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症 阶段脑干中相关核团 c-fos 和 GFAP 的变化时程，探讨中枢致敏机制；进而应用 蛋白质组学新技术，筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白， 寻找痛觉相关蛋白。 材料与方法：雄性 SD 大鼠，设正常对照组和实验组。 实验组动物左上第一磨牙开髓，封 LPS，于 6 小时、12 小时、24 小时、48 小时 取牙齿、三叉神经节和脑干组织，用 HE 染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用 免疫组化、Western-blot 的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(Vc)
3、、三叉 神经脊束核极间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内 c-fos 和 GFAP 的变化 时程，用蛋白质组学方法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。 结果： 1HE 染色结果：随着 LPS 封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展， 程度加重。12-24 小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量 中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗出明显，成牙 本质细胞排列紊乱，部分牙髓变性坏死。48 小时部分动物病变扩展至根尖周组 织。 2脑干 c-fos 蛋白变化时程：在 LPS 致急性牙髓致敏后，与对照组相 比，实验组 Vc 核 c-fos 阳性神经元表达数目
4、明显增加，并呈时间依赖性，24 小时达到最高；对侧 Vc 核及 Vi 核的 c-fos 表达数目少于实验侧，但变化趋势 与实验侧相近；NTS 的 c-fos 阳性神经元数目显著增加，6h 最高，随时间逐渐 降低，48 小时仍高于对照组。 3急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞 GFAP 的 变化时程：在 LPS 致急性牙髓炎致敏后，Vc 变化时程慢于 c-fos 阳性神经元， 24h 至 48h 数量增多，此时星形胶质细胞胞体变大，突起增粗，染色加深，与 c-fos 阳性神经元分布区域相近。对侧 Vc 未见显著变化。而三叉神经节的卫星 胶质细胞 48 小时才出现较弱的阳性表达。 4蛋白质组分析鉴定出
5、48 个差 异点蛋白质斑点，其中 21 个表达量上调，27 个下调，经质谱检测出 10 个点， 分别为甲状腺素运载蛋白；内质网蛋白 ERp29；低分子量神经丝蛋白；盘膜边 缘蛋白；血清白蛋白前体；外周髓磷脂 P0 蛋白；组织蛋白酶 B；丙酮酸脱氢酶 E1；复制蛋白 A 和细胞骨架肌动蛋白。 结论： 1开髓封 LPS 可以有效的 造成急性牙髓炎动物模型，是较好的痛觉致敏模型： 2在急性牙髓炎致敏 过程中，随着炎症的进展，脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活，相 互作用，共同造成神经系统的致敏； 3在鉴定的 10 种蛋白质中，包括了细 胞结构蛋白、分子伴侣蛋白，生物合成相关蛋白、以及在应激反应
6、和能量代谢 等重要生命活动中起关键作用的酶，细胞骨架破坏、能量代谢改变、信号转导 异常等共同参与了 LPS 急性牙髓致敏的形成； 4内质网蛋白 ER29、神经丝 蛋白及髓磷脂 P0 蛋白可能成为评价牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的生物指标，为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提供重要的线索， 对研究三叉神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。正文内容正文内容目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题正是神 经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很 多优点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研究牙髓和口 颌面疼痛的机
7、制具有重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封 LPS 的方法，建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症 阶段脑干中相关核团 c-fos 和 GFAP 的变化时程，探讨中枢致敏机制；进而应用 蛋白质组学新技术，筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白， 寻找痛觉相关蛋白。 材料与方法：雄性 SD 大鼠，设正常对照组和实验组。 实验组动物左上第一磨牙开髓，封 LPS，于 6 小时、12 小时、24 小时、48 小时 取牙齿、三叉神经节和脑干组织，用 HE 染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用 免疫组化、Western-blot 的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(
8、Vc)、三叉 神经脊束核极间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内 c-fos 和 GFAP 的变化 时程，用蛋白质组学方法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。 结果： 1HE 染色结果：随着 LPS 封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展， 程度加重。12-24 小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量 中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗出明显，成牙 本质细胞排列紊乱，部分牙髓变性坏死。48 小时部分动物病变扩展至根尖周组 织。 2脑干 c-fos 蛋白变化时程：在 LPS 致急性牙髓致敏后，与对照组相 比，实验组 Vc 核 c-fos 阳性神经元表
9、达数目明显增加，并呈时间依赖性，24 小时达到最高；对侧 Vc 核及 Vi 核的 c-fos 表达数目少于实验侧，但变化趋势 与实验侧相近；NTS 的 c-fos 阳性神经元数目显著增加，6h 最高，随时间逐渐 降低，48 小时仍高于对照组。 3急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞 GFAP 的 变化时程：在 LPS 致急性牙髓炎致敏后，Vc 变化时程慢于 c-fos 阳性神经元， 24h 至 48h 数量增多，此时星形胶质细胞胞体变大，突起增粗，染色加深，与 c-fos 阳性神经元分布区域相近。对侧 Vc 未见显著变化。而三叉神经节的卫星 胶质细胞 48 小时才出现较弱的阳性表达。 4蛋白质组分析鉴
10、定出 48 个差 异点蛋白质斑点，其中 21 个表达量上调，27 个下调，经质谱检测出 10 个点， 分别为甲状腺素运载蛋白；内质网蛋白 ERp29；低分子量神经丝蛋白；盘膜边 缘蛋白；血清白蛋白前体；外周髓磷脂 P0 蛋白；组织蛋白酶 B；丙酮酸脱氢酶 E1；复制蛋白 A 和细胞骨架肌动蛋白。 结论： 1开髓封 LPS 可以有效的 造成急性牙髓炎动物模型，是较好的痛觉致敏模型： 2在急性牙髓炎致敏 过程中，随着炎症的进展，脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活，相 互作用，共同造成神经系统的致敏； 3在鉴定的 10 种蛋白质中，包括了细 胞结构蛋白、分子伴侣蛋白，生物合成相关蛋白、以及在应
11、激反应和能量代谢 等重要生命活动中起关键作用的酶，细胞骨架破坏、能量代谢改变、信号转导 异常等共同参与了 LPS 急性牙髓致敏的形成； 4内质网蛋白 ER29、神经丝 蛋白及髓磷脂 P0 蛋白可能成为评价牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的 生物指标，为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提供重要的线索， 对研究三叉神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。 目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题正是神经科 学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很多优 点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研究牙髓和口颌面疼痛的机制具有重
12、要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封 LPS 的 方法，建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症阶段脑 干中相关核团 c-fos 和 GFAP 的变化时程，探讨中枢致敏机制；进而应用蛋白质 组学新技术，筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白，寻找痛 觉相关蛋白。 材料与方法：雄性 SD 大鼠，设正常对照组和实验组。实验组 动物左上第一磨牙开髓，封 LPS，于 6 小时、12 小时、24 小时、48 小时取牙齿、 三叉神经节和脑干组织，用 HE 染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用免疫组化、 Western-blot 的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(Vc)
13、、三叉神经脊束核 极间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内 c-fos 和 GFAP 的变化时程，用蛋 白质组学方法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。 结果： 1HE 染色结 果：随着 LPS 封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展，程度加重。 12-24 小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量中性粒细胞 浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗出明显，成牙本质细胞排 列紊乱，部分牙髓变性坏死。48 小时部分动物病变扩展至根尖周组织。 2脑干 c-fos 蛋白变化时程：在 LPS 致急性牙髓致敏后，与对照组相比，实验 组 Vc 核 c-fos 阳性神经元表达数目
14、明显增加，并呈时间依赖性，24 小时达到 最高；对侧 Vc 核及 Vi 核的 c-fos 表达数目少于实验侧，但变化趋势与实验侧 相近；NTS 的 c-fos 阳性神经元数目显著增加，6h 最高，随时间逐渐降低，48 小时仍高于对照组。 3急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞 GFAP 的变化时程： 在 LPS 致急性牙髓炎致敏后，Vc 变化时程慢于 c-fos 阳性神经元，24h 至 48h 数量增多，此时星形胶质细胞胞体变大，突起增粗，染色加深，与 c-fos 阳性 神经元分布区域相近。对侧 Vc 未见显著变化。而三叉神经节的卫星胶质细胞 48 小时才出现较弱的阳性表达。 4蛋白质组分析鉴定出 4
15、8 个差异点蛋白 质斑点，其中 21 个表达量上调，27 个下调，经质谱检测出 10 个点，分别为甲 状腺素运载蛋白；内质网蛋白 ERp29；低分子量神经丝蛋白；盘膜边缘蛋白； 血清白蛋白前体；外周髓磷脂 P0 蛋白；组织蛋白酶 B；丙酮酸脱氢酶 E1；复制 蛋白 A 和细胞骨架肌动蛋白。 结论： 1开髓封 LPS 可以有效的造成急性 牙髓炎动物模型，是较好的痛觉致敏模型： 2在急性牙髓炎致敏过程中， 随着炎症的进展，脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活，相互作用， 共同造成神经系统的致敏； 3在鉴定的 10 种蛋白质中，包括了细胞结构蛋 白、分子伴侣蛋白，生物合成相关蛋白、以及在应激反应
16、和能量代谢等重要生 命活动中起关键作用的酶，细胞骨架破坏、能量代谢改变、信号转导异常等共 同参与了 LPS 急性牙髓致敏的形成； 4内质网蛋白 ER29、神经丝蛋白及髓 磷脂 P0 蛋白可能成为评价牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的生物指标， 为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提供重要的线索，对研究三叉 神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。 目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题正是神经科 学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很多优 点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研究牙髓和口颌面 疼痛的机制具有重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封 LPS 的 方法，建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症阶段脑 干中相关核团 c-fos 和 GFAP
