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1、外科学外科学( (普通外科普通外科) )专业优秀论文专业优秀论文 胃癌中胃癌中 FascinFascin 基因的表达及与进基因的表达及与进展期胃癌预后相关的蛋白质组学研究展期胃癌预后相关的蛋白质组学研究关键词：胃癌关键词：胃癌 FascinFascin 基因基因 基因表达基因表达 蛋白质组学蛋白质组学 串联质谱串联质谱 肿瘤标志物肿瘤标志物摘要：第一部分 Fascin 基因在胃癌中的表达及其意义 目的：Fascin 蛋白代 表一类肌动蛋白结合蛋白家族，其蛋白质编码的产物是一种细胞骨架蛋白。这 种蛋白可以与 F-肌动蛋白相结合，定位于细胞质张力纤维和细胞膜皱褶 （ruffles）边缘的丝状伪足、
2、微棘（microspikes）等细胞突起的核心肌动蛋 白束，通过与 F-肌动蛋白的结合，可以完成细胞的附着和运动。这种结构的形 成受细胞细胞外基质和细胞内信号的调控。研究发现，在正常人上皮细胞中， 在食道鳞状上皮基底层和表皮基底层中均有表达，而在其他的上皮组织没有表 达。在对于肿瘤组织上皮研究中发现，在多种癌症上皮细胞中，Fascin 呈阳性 表达，且在部分肿瘤中与肿瘤的预后有一定关系。在对于 Fascin 在消化道肿瘤 中表达的研究，目前报道较少。本实验通过免疫组化方法研究 Fascin 蛋白在 249 例胃癌病人肿瘤细胞中的表达，结合肿瘤病人的临床病理学特征，综合分 析不同类型肿瘤细胞的临
3、床病理特征与 Fascin 表达之间的关系，以期发现 Fascin 在胃癌中的表达及与预后的关系。 研究方法：采用免疫组织化学方 法对北京大学临床肿瘤医院自 19962001 年间手术切除的胃癌手术标本 249 例 行 Fascin 免疫组化染色，研究 Fascin 在胃癌病人的表达。同时收集这些病例 的临床资料，包括病人的年龄、性别、胃癌的分期、肿瘤的 TNM 分期、肿瘤细 胞的分化。对病人的术后生存进行随访观察。通过统计学软件 SSPS13.0，分析 所得到的临床病理数据和 Fascin 的表达水平的关系。 结果：249 例病人中， 55 例病人肿瘤细胞呈阳性表达（22.1） ，其中 37
4、 例表达为“1+” （14.9） ， 18 例病人肿瘤细胞表达为“2+” （7.2） 。通过对 Fascin 的表达与临床病理学 资料的研究，我们发现 Fascin 的表达与病人的年龄（p=0.032） 、胃癌细胞的分 化程度相关，其中，在高分化的胃癌肿瘤细胞中，Fascin 的表达与低分化的肿 瘤细胞相比较有显著性差异（p=0.001） 。而在性别、肿瘤的 T、N、M 分期方面， Fascin 的表达无明显差异。另外，我们发现，在 Fascin 表达呈强阳性（2+） 的病人中，其预后要明显差于阴性表达的病人。 结论: 1.Fascin 在正常 胃腺上皮中无表达，在胃癌中有表达，胃癌中 Fas
5、cin 的表达，提示胃癌细胞的 运动骨架发生改变。 2.Fascin 在分化不同的胃癌中表达有差异，提示胃癌 的分化与其表达强度不同与存在一定关系。 3.Fascin 在胃癌病人中的高表 达提示预后不良。 第二部分与进展期胃癌预后相关的蛋白组学研究 研究 目的:胃癌是危害我国人类健康的常见恶性肿瘤，具有较高的发病率和死亡率， 严重威胁人类的生命和健康。虽然早期胃癌治疗目前的五年生存率可以达到 85以上，但在我国这部分病人的比例仅仅占到 10-30。在就诊的胃癌病 例中，绝大部分为进展期胃癌，其整体治疗效果不好，预后差异较大。因此术 前通过寻找合适的肿瘤标志物，对于术前准确的病理分期（TNM）
6、、提供针对性 措施的治疗、判断进展期胃癌病人的预后等方面有深远的意义。 肿瘤标志物， 是恶性肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞的基因表达而合成、分泌的，或因 机体对肿瘤反应而异常产生的、反应肿瘤存在和生长的一类物质，是检测、诊 断、治疗、监测肿瘤和判断肿瘤预后的重要标志。目前临床上常用的胃癌肿瘤标志物有 CEA，CA19-9 等，由于缺乏一定的特异性和敏感性，主要用于胃癌病 人的初筛和治疗后的复发监测。目前临床工作中，缺少反映进展期胃癌预后相 关的肿瘤标志物。 蛋白组学（protemics）是以蛋白质组为研究对象，分析 细胞内动态变化蛋白质的组成成份、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的 相互作
7、用与联系，在整体水平上研究蛋白质的组成与调控的活动规律。同时质 谱技术的飞速发展和二维电泳技术的不断进步，为蛋白质组研究进行高灵敏度、 高速鉴定提供了有力支持，为分析体液中各种复杂蛋白质成分提供了可能。用 蛋白质组学来研究肿瘤，有利于筛选肿瘤标志蛋白，判断肿瘤的预后，确定肿 瘤治疗靶标，寻找新的肿瘤特异抗原。 通过蛋白质组学技术研究不同预后的 进展期胃癌病人之间蛋白表达的差异，可以帮助我们发现一系列的反应不同预 后的进展期胃癌病人的蛋白表达，通过这些蛋白质的筛选和进一步研究，以期 发现能够反应进展期胃癌病人预后的肿瘤标志物，通过这些标志物，可以对胃 癌的分期做出准确判断，可以推测胃癌病人的预后
8、，以及寻找胃癌药物靶向治 疗的新思路。 研究方法:为了鉴定与进展期胃癌患者预后相关的蛋白，我们 回顾性选取了预后相差较大的两组进展期胃癌患者的冰冻组织为研究对象（预 后好的一组患者的生存期均gt;34 个月，预后差一组患者的生存期均 lt;15 个月） 。分别提取两组的组织蛋白经等量混合、胰酶消化过夜后， 应用 NanoLC-MS/MS（LTQ） （纳升级液相色谱串联质谱，线性离子阱）方法得到 两组差异蛋白的氨基酸序列，数据经 Mascot 服务器及 Swiss-prot、NCBI 非冗 余蛋白质数据库进行了常规序列相似性分析及蛋白的鉴定。 针对两组间表达 差异较大的基因 S100P 和 Hn
9、RNP A2/B1，我们采用了免疫组化方法对 93 例进展 期胃癌病人的标本进行了检测，同时采用统计学方法对其在胃癌中的表达与临 床病理参数及患者预后的关系进行了分析。 研究结果:应用蛋白质组的方法， 在预后好的组中共鉴别出 284 个蛋白，在预后差的组中鉴别出 213 个蛋白，其 中，130 个蛋白只在预后好的一组被识别，58 个蛋白只在预后差的一组被识别。 其中在两组间均鉴别出且差异大于 3 倍的有 14 个，大于两倍的有 28 个。对于 两组中分别鉴别出的蛋白，应用 WEGO 在线工具，对其基因功能进行了分类，这 些蛋白涉及钙离子的信号传导、细胞代谢、应激反应、细胞骨架蛋白等等，为 进一
10、步寻找可以预测进展期胃癌预后的肿瘤标志物奠定了基础。这些蛋白中， 有些已经被文献证实与胃癌的预后或转移等相关。 通过对 16 例预后不同的 进展期胃癌病人的临床病理学资料进行分析，我们发现，在不同预后的进展期 胃癌病人中，发生淋巴结转移在 N1 和超过 N1 转移的两组中，其差异具有显著 性。我们期望通过差异蛋白组学的研究，筛选出能够预测进展期胃癌病人淋巴 结转移状态的肿瘤标志物，针对两组间表达差异较大的基因 S100P 和 HnRNP A2/B1，我们采用了免疫组化方法进行了检测，同时对其在胃癌中的表达与临床 病理参数及患者预后的关系进行了描述，结果发现，S100P 在正常胃粘膜中表 达较高
11、，在胃癌中的表达下降，在本组的 93 例病例中其阳性表达率为 47.3，并且其在胃癌中的高表达与患者的预后相关（P=0.0375） ，S100P 在胃 癌中的高表达与原发肿瘤的浸润深度和淋巴结转移状态相关 （P0.006，P=0.006） 。研究表明，免疫组化和蛋白质组学的分析鉴定结果是 一致的，S100P 可以用来作为判断进展期胃癌的淋巴结转移和预后的肿瘤标志 物。而在 HnRNPA2/B1 的免疫组化中发现，其在胃癌组织中的表达为 92.6， 而在癌旁的非肿瘤组织中，也发现了其阳性表达，统计学分析，HnRNP A2/B1 的表达与病人的临床病理学资料中差异无显著性意义，表明其并不适合作为判
12、断进展期胃癌预后的肿瘤标志物。 结论: 1.应用蛋白质组学研究技术，可 以在不同预后的进展期胃癌病人筛选出差异表达的蛋白，这些蛋白涉及钙离子 的信号传导、细胞代谢、应激反应、细胞骨架蛋白等等，可以为鉴定胃癌病人 的分期、预后相关的肿瘤标志物研究提供基础。 2.淋巴结转移状态（超过第 一站的淋巴结转移）是影响进展期胃癌病人预后的一个关键因素。 3.S100P 可以反应进展期胃癌病人的淋巴结转移状态，从而可以作为肿瘤标志物用来判 断进展期胃癌病人的预后。 4.HnRNP A2/B1 不适合用于判断进展期胃癌预后 的肿瘤标志物。 5.进展期胃癌的蛋白质组学研究中筛选的蛋白质还需要进行 进一步的验证。
13、正文内容正文内容第一部分 Fascin 基因在胃癌中的表达及其意义 目的：Fascin 蛋白代表 一类肌动蛋白结合蛋白家族，其蛋白质编码的产物是一种细胞骨架蛋白。这种 蛋白可以与 F-肌动蛋白相结合，定位于细胞质张力纤维和细胞膜皱褶 （ruffles）边缘的丝状伪足、微棘（microspikes）等细胞突起的核心肌动蛋 白束，通过与 F-肌动蛋白的结合，可以完成细胞的附着和运动。这种结构的形 成受细胞细胞外基质和细胞内信号的调控。研究发现，在正常人上皮细胞中， 在食道鳞状上皮基底层和表皮基底特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换 码，则无法显示正文内容，请您下载相应
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