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1、食用菌制种工艺流程尤昌建 随着食用菌产业的蓬勃发展，菌种需要量随之增 加，而现有菌种生产单位明显偏少，许多菇农不 得不向外引种。长途购运菌种不仅花费大，成本 高而且菌种因破瓶而易引起杂菌污染，从而严重 影响栽培食用菌的经济效益。菇农若能掌握菌种 生产程序和制种技术，自行制种，逐步发展成制 种专业户，也是一项很好的致富门路。 菌种生产 程序，通常分为母种、原种和栽培种，也就是通 常所说的一级、二级、三级菌种。其中母种的分 离选育技术性强，要求精化；而原种和栽培种的 制作则比较简单。一、母种的分离选育 母种主要采用人工选择、诱变育种、杂交 育种和原生质融合等手段获得。作为一般 制种专业户，可以采用
2、人工选择方式分离 培育母种。1、采集种源 从野生或人工栽培群体中，选择有代表性 的优良菇体作为种源。种菇的标准是：八 成熟，朵形圆正、肉质肥厚，无病虫害。 采集1-2朵符合上述标准的种菇编上号码， 作为分离母种的材料。从栽培室采集的应 标有原菌株代号。2、培养基配制琼脂培养基（ PDA 培养基） 马铃薯200-250克，琼脂15-20克，葡萄糖20-25克，清 水1000毫升。也可以加硫酸镁1-15克，维生素B1微量 ，磷酸二氢钾2-3克。先将马铃薯洗净去皮，挖去芽眼， 切成薄片，置于铝锅内加水煮沸30分钟，捞起后用4层纱 布过滤，取汁。然后将琼脂加入汁内，边加热边搅拌，让 琼脂充分溶化；再将
3、葡萄糖等加入，稍煮几分钟后，同样 用4层纱布过滤，取其汁液。将汁液趁热装入玻璃试管内 。装至管长的15，管口用棉花塞紧，或将汁液装入玻璃 三角瓶内，装量20毫升。然后置于高压锅内，在98-108 千帕厘米的压力下灭菌30分钟左右。灭菌后及时取出， 趁热将试管斜排于桌面上，冷却后即成为固体斜面培养基 。3、母种分离方法(1)孢子弹射法。将种菇表面消毒，吸干水分后，将菇体悬挂于装有琼 脂培养基的三角瓶内，让菇体内的袍子自然散落在培养基上萌发菌丝 。也可以剪取一小块菇体，贴附在试管斜面培养基表面，让孢子散落 在培养基上萌发菌丝，即能获得母种。 (2)组织分离法。将消毒过的种菇，在接种箱内用手从菇柄处
4、对半掰开 ，或用刀片切开，使菇体形成对开。在菌盖和菌柄交界处或菌褶处， 用接种刀切取一小块菇体，然后纵切成5毫米x10毫米的小薄片，用接 种针挑取一小块，接入斜面培养基的中央，待其萌发菌丝，即可得到 母种； (3)基内分离法。选择已长菇的木段，削去树皮及表层木质部，用75 的酒精消毒后，锯成1厘米厚的薄片，放入01的升汞水中消毒1 -2分钟，再用灭菌水洗去残液。然后再将小薄片劈成05-1厘米宽 的小条，接入斜面培养基中央，待长出菌丝后即得母种。也可以在已 长菇的菌袋中，经消毒处理后，用接种针钩取袋内色泽纯、长势旺的 菌丝体，接种在试管斜面培养基中央，待萌发菌丝后，同样获得菌种 。4、适温培养
5、通过上述不同方式将菌种分离接种于试管 后，要及时将试管移入已消毒的培养箱或 培养室内培养，温度控制在25左右，使 分离获得的孢子或菌丝在适温下发育。一 般孢子弹射3-4天后孢子萌发成菌落，10天 后菌丝长满管；组织分离接种后2-3天，菌 丝即萌发，并在培养基上蔓延生长；菇木 分离接种后，7天菌丝即恢复生长。5、选育提纯 通过上述方法得到的菌丝，不一定都是优 质的，还需要选育提纯。因此，在菌丝萌 发后，要认真观察，挑选色泽纯、健壮、 长势正常、无间断的菌丝，在接种箱内连 同培养基钩取菌丝，接入另备的试管培养 基上。在23-25的恒温条件下，培养7- 10天，待菌丝长满管后，再进行观察，从 中择优
6、取用，即为“母代”母种。6、转管扩接 母代母种可以转管扩接成“子代”母种。采用 同样的斜面培养基，每支可扩接30-50支子 代母种。生产上供应的多为子代母种。它 可以再次转管扩接。一般每支可扩接成20- 25支子代母种，但转管次数不得超过5次。7、出菇试验 分离选育的母种，还必须进行出菇试验。 方法是：把母种接种于瓶或袋装的木屑培 养基上，根据各种菇耳种性对温度的要求 ，进行适温培养，直至出菇才证实可用于 生产。二、原种繁殖培养 将母种接在瓶或袋的木屑培养基上，通过 培养，即成原种。1、原种木屑培养基配方 杂木屑775，麦麸20，蔗糖1，石 膏粉12，硫酸镁03。pH值(灭菌前 )65-7，含
7、水量调至60。将上述原、辅 料混合拌匀，装入750毫升的玻璃菌种瓶内 ，装料要求下松上紧。瓶口塞紧棉花，再 用牛皮纸包住瓶颈与棉塞。然后置于高压 灭菌锅内，在147千帕平方厘米压力下灭 菌2-25小时。也可进行常压灭菌，在 100下保持10-11小时，达标后趁热取出 ，让其冷却。2、接入菌种 待料温降至25以下时，在无菌条件下， 将试管种分割成若干决，通过酒精灯火焰 迅速接入原种培养基上，每支母种可按4-6 瓶原种。3、发菌培养 接种后及时将玻璃菌种瓶移入25菌种培 养室内进行培养。空间相对湿度控制在 70以上，避免强光照射。原种培养时间 一般菇类需要40-50天，草菇、银耳只需 15-20天
8、即可。4、去杂选优 原种培育过程中，要每天进行观察，如发 现有杂菌污染的，应立即淘汰三、栽培种扩大培育 将原种再次扩接在同样的木屑培养基上，在适温条件下培 养30-35天即为栽培种(又叫生产种)，可用于生产栽培。 栽培种可用750毫升菌种专用瓶，由于使用量大，所以通 常多采用聚丙烯菌种袋。袋的规格有12厘米x24厘米、15 厘米x28厘米、17厘米x33厘米等，可根据各种菇耳特性 和当地习惯选择使用。培养基灭菌采用常压灭菌灶灭菌， 要求灭菌温度达100，保持8-10小时，达标后趁热卸袋 冷却。待料温降至25以下时，在无菌条件下接入选定品 种的原种。每瓶原种可扩接成50-60瓶栽培种。菌种培育
9、室要求洁净，防强光，室温掌握在23-25，并经常检查 ，发现杂菌污染应及时淘汰，不断选优去劣。当菌丝长满 袋，尖端菌丝反转上爬1-3厘米时，为适龄的栽培种 在自然界里，食用菌都不是单独存在的， 而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在 一起的。所谓菌种分离，就是把这些和食 用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养 ，获得纯的优良菌种。(一）母种的分离培养 食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、 组织分离法以及基内菌丝分离等。1.孢子分离法 孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无 性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。 这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有 差异，且自然分化现象较严重，变异大， 需经出菇试验才
10、能在生产上应用。 （1）单孢分离法 是每次或每支试管只取一个担孢子， 让它 萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇 和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能 力，可采用此法分离生产纯菌种。单孢分 离生产上较少采用，而且技术复杂，一般 采用多孢分离法。 （2）多孢分离法 就是把许多孢子接种在同一培养基上，让 它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种 的一种方法。种菇孢子弹射法 选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳 产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用 无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干 表面水分。在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁 丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏
11、斗倒盖在培养皿上面；上端小 孔用棉花塞住。培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静 置1220小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。形成 一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇 为褐色 ，香菇、金针菇孢子印白色）。用接种针沾取少量孢子在 试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待孢子萌发，生 成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。 还可用孢子采集器收集孢子。方法是选好种菇后，按上述 程序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器 的钢丝架上，放在培养皿正中央。随即盖好玻璃罩，用纱 布将钟掌周围塞好。并在纱布上倒少许升汞或无菌水。移 入 20左右恒温箱培养。褶上涂抹法 按无菌操作分离
12、时；应选择成熟的种菇， 用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶 片表面子实体尚未弹射的孢子，再在培养 基上划线接种。钩悬法 取成熟菌盖的几片菌褶或一小块耳片（黑 木耳、毛木耳、白木耳，用无菌不锈钢 丝（或铁丝、棉线等其他悬挂材料）悬挂 于三角瓶内的培养基的上方，勿使接触到 培养基或四周瓶壁。置适宜温度下培养、 转接即可。贴附法 按无菌操作将成熟的菌褶或耳片取一小块 ， 用溶化的琼脂培养基或阿拉伯胶、浆糊 等贴附在配管斜面培养基正上方的试管壁 上。经612小时的培养，待孢子落在斜面 上，立即把孢子连同部分琼脂培养基移植 到新的试管中培养即可。 孢子分离得到的母种、必须进一步提纯复 壮，当母种定植一
13、星期左右，菌丝布满斜 面时，选择菌丝健壮、生长旺盛无老化、 无感染杂茵的母种试管，进而转管扩大， 一般到栽培种，转管不宜超过5次。 孢子分离得到的母种，必须通过出菇试验 ，鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。 一般菌类如蘑菇、平菇、凤尾菇、香菇、 冬菇和草菇等，都可用多孢分离法获得母 种。 例：银耳孢子分离 按无菌操作获取种耳后，悬挂种耳的三角瓶经12 小时培养后，瓶底培养基表面就有“孢子印”。取 出种耳，置 2025温箱培养23天，培养基 表面会出现乳白色透明的糊状小菌落，就是银耳 的酵母状分生孢子形成的少量银耳菌丝。此时移 接入试管斜面培养基上，待长满斜面后，再移接 入营养丰富，且表面比较干
14、燥的培养基上。经30 天左右，菌落长出白色菌丝。 银耳的酵母状分生孢子、菌丝只有与羽毛状菌丝 的子囊菌（香灰菌丝）混合培养时，由后者帮助 分解木材及其他一些纤维物质，提供营养，才能 利于银耳孢子萌发，菌丝的定植和子实体的形成 。 在两种菌丝交会时，先选出两种纯菌丝。 羽毛状菌丝要纯化选育，一般要选取生长 迅速，爬壁力强的试管斜面或种瓶，取先 端菌丝，转管移接，置2528上培养 ，重复转管几次即可得到优良纯种 银耳菌丝的特点，菌丝生长缓慢，担孢子 也不易萌发。在进行两菌混合时，先取经8 IO天培养的银耳菌丝斜面，按无菌操作 方法在该斜面上距银耳菌丝约0.5厘米处接 入一 小块羽毛状菌丝。置25下
15、培养1周即 得到混合好的银耳母种。2组织分离培养法 利用子实体内部组织，进行无性繁殖而获 得母种的简便方法，即组织分离。该法操 作简便，菌丝生长发育快，品种特性易保 存下来，特别是杂交育种后，优良菌株用 组织分离法能使遗传特性稳定下来。（1）子实体分离 种菇要选朵大盖厚，柄短，八九分成熟的 优良品种。切去菇两基部，在无菌箱内以 0.1的升汞水浸几分钟，再用无菌水冲洗 并揩干或用75酒精棉球擦拭菌盖与菌柄2 次，进行表面消毒。接种时，只要将种菇 撕开，在萌盖和菌柄交界处或菌褶处，挑 取一小块组织；移接 到PDA培养基上。置 25左右温度下培养3-5天，就可以看到组 织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩
16、大即得 到菌种。如香菇、平菇等可以用此方法。（2）菌核分离 茯苓、猪苓、雷丸等菌的子实体不易采集 。而常见的是它贮藏营养的菌核。用菌核 分离，同样可以获得菌种。方法是将菌核 表面洗净，用酒精或升汞消毒后，切开菌 核，取中间组织一小块，约黄豆大小，接 种在PDA 培养基斜面上，保温培养。应注 意的是，菌核是贮藏器官，大部分是多糖 类物质，只含有少量的菌丝，因此挑取的 组织块要大一些，如果组织块过小，则不 易分出菌种。（3）菌素分离 有一部分子实体不易找到，也没有菌核， 可以用菌素进行分离。如蜜环菌、假蜜环 菌。其操作方法是先用酒精或升汞将菌素 表面黑色皮层轻轻擦拭23次， 然后去掉 黑色外皮层（菌鞘），抽出白色菌髓部分 ；用无菌剪刀将菌髓剪一小段，接种在培 养基上，保温培养，即得该菌菌种。 菌素分离要注意：因菌素比较细小
