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1、摘要目的：通过观察放松性音乐和慢性应激对大鼠体重、心理行为、空间学习能力的影响，以及免疫器官的变化、检测血清中l L 1 p 、l L 2 、C O R T 、A C T H 、海马中5 H T 水平的变化，探讨放松性音乐和应激对大鼠的心理行为、免疫功能和神经内分泌的影响及其可能的影响机制，对于防治亚健康、缓解大众压力、提高人们的身心素质具有重要的实践意义。方法：S D 雄性乱7 周龄大鼠4 0 只，根据旷场实验的行为学得分筛选动物后随机分为对照组、应激组、音乐组、应激音乐组，每组l O 只。采用慢性温和应激模型，播放放松性音乐，实验结束后采用旷场实验、悬尾实验以及M o r r i s 水迷
2、宫实验观察音乐和应激对大鼠的心理行为变化。处死，取大鼠胸腺、脾脏称重，计算胸腺指数和脾脏指数。取大鼠血清和脑组织，采用E L I S A 方法检测大鼠血清I L 1 B 和l L 2 的水平，采用放射免疫方法检测大鼠血清中C O R T 、A C T H 水平，采用光学显微镜观察脑组织海马中5 H T 的表达。结果：应激组大鼠在规定时间内的水平运动次数和垂直运动次数明显减少，体重增长减慢( 尸山西医科大学硕士学位论文_ 】- - - ， 月I J吾在经济高速发展、竞争日益激烈的当代，生活和工作节奏加快，心理压力过大、人际关系的复杂、工作负荷、组织氛围、工作和失业等各种压力成为影响人们身心健康的
3、重要因素。已有研究显示，长期处于压力状态下，可引起心理行为变化，导致机体生理功能紊乱，发生一种全身适应综合征，从而引起亚健康状裂1 引，出现焦虑、抑郁、兴趣丧失、学习记忆能力下降、思维迟缓等精神症状，以及疲劳、失眠、食欲不振、头痛、头晕、口渴、咽喉不适、胸闷、心慌、胃痛、腹胀、便秘等躯体不适症状【3 4 】。反复的恶性循环则会引发急慢性应激，直接损害心血管系统和胃肠系统，造成应激性溃疡和血压升高、心率增快、加速血管硬化进程和心血管事件发生；引发免疫功能下降，导致恶性肿瘤和感染机会增加瞪J 。但如果保健和治疗措施得当，可向健康状态逆转。世界卫生组织( w H o ) 最近公布的一项预测性调查表明
4、，全世界真正健康的只有5 ，亚健康人口总的比例已占到7 5 ，其中中年人( 2 5 4 0 岁) 是高发人群，其危害性已经被医学界认为是与艾滋病并列的2 1 世纪人类健康头号大敌【6 】。因此阐明亚健康的作用机制，寻找有效的方法来应对压力，防治亚健康已成为心理界、医学界和社会广泛关注和重视的问题。近年来，随着医学科技的进步，人们逐渐认识到推拿、按摩、足疗、针灸、营养保健、生物反馈治疗等在亚健康干预中具有极为重要的作用，但这些方法由于受到时间、场地、费用的限制而未能得到广泛开展，处于亚健康状态或有心身疾患的人往往希望找到一种既有效、便宜，又无副作用，简便易行的调整或治疗方法，而音乐治疗因其有效调
5、节生理和心理的双重功效而成为人们容易接受的有效方法之一【7 1 。音乐疗法在国外已被作为医院临床非药物疗法之一而用于调整亚健康，辅助治疗头疼、手术疼痛、睡眠障碍、胃肠植物神经紊乱、心血管综合征、高血压、免疫性疾病、皮肤病、抑郁及焦虑等等。上世纪8 0 年代，音乐治疗在我国逐渐被人们重视，并将音乐疗法用于亚健康及其他心身疾病的临床治疗，取得了可喜的进展。音乐治疗学从学科创立至今半个多世纪，但却以惊人的速度在世界许多国家传播开来，并且不断发展壮大，说明它适应了现代社会人们心理健康的需求。音乐是融医学、心理学、音乐、美学、物理学等学科为一体的自我保健方法，应用特定音乐使人的行为、感情及生理功能产生一
6、定变化的治疗技术【8 l 。科学家们对音乐的心理生理效应及其作用机制、音乐的临床应用等方面展开深入的研究，并取得了一定的进展。已有研究表明，宁静、节奏平缓柔和、清悠澹远的音乐有助于呼吸平稳、心跳脉律正常、血压下降，能使人精神松弛、情绪和缓、消除烦躁焦虑嗍。持续倾听对各种身心损害或者情绪失调的人的机斛1 0 】起到降低基础代谢率、每分钟耗氧量及减少止痛剂的使用量，起到不是药物胜似药物的作用。聆听音乐还可以有效提高认知功能障碍的患者的智力和社会功能【l l 】。现代神经学研究亦指出音乐可以通过人的听觉作用于人的大脑边缘系统及脑干网状结构，调节大脑皮质，使人体的内脏活动及情绪与行为有良好的协调作用，
7、提高神经和神经体液的兴奋性，促进人体分泌乙酰胆碱和去甲肾上腺素等有利健康的生化物质。音乐还可以部分缓解对N K 细胞的抑制，提高淋巴细胞活性，对应激小鼠的免疫抑制有一定的缓山西医科大学硕士学位论文解作用f 眩】。现今，音乐作为非药物辅助治疗已取得了很好的疗效，它可以在一定程度上改善情绪、提高免疫力，具有调节生理和心理的双重功效，但其获得疗效的机理们仍需进一步明确。本研究采用梁祝、春江花月夜等放松性音乐对正常及慢性心理应激大鼠进行干预，采用旷场实验、悬尾实验来测试大鼠在新环境中的探究行为及“失望情绪及“抑郁”状裂1 3 l ，检测中枢神经系统的“兴奋或“抑制”状态【1 4 】。采用M o 埘s
8、水迷宫实验来反映动物的学习记忆能力f 1 5 1 ，来探讨音乐对慢性应激大鼠心理行为、情绪变化的影响。l L 1在应激反应的多种生理和病理过程中发挥关键性作用，I L - 2 的高低是机体细胞免疫的重要标志。G c 增多是应激反应中最主要的特征，5 H T 是中枢及外周神经系统的重要神经递质，对应激更为敏感，与个体对应激的应付能力密切相关【l6 1 。本实验采用夹心E L I s A 法检测I L 19 、I L - 2 水平的变化、采用放射免疫法检测大鼠血清中的C O R T 、A C T H 水平的变化以及采用免疫组化方法来检测脑组织5 H T 的表达，来探讨放松性音乐对慢性应激大鼠生理状
9、态的改善机制，为亚健康的预防和干预提供理论依据，为大众缓解压力、调整心智提供一种便捷、经济、易行的保健方法。2第一章材料与方法1 1 实验材料1 1 1 实验动物健康的6 7 周龄雄性S D 大鼠4 0 只，体重1 8 肚2 2 0 9 ，清洁级，由山西省中医药研究院实验动物中心提供，合格证号：晋动( 证) 字A 0 0 2 0 0 2 号。1 1 2 主要试剂大鼠血清I L 一1BE L I S A 试剂盒，产品编号E K 0 3 9 3 ，购自武汉博士德生物工程有限公司。大鼠血清I L 一2E L I S A 试剂盒，产品编号E K 0 3 9 9 ，购自武汉博士德生物工程有限公司。大鼠血
10、清c o R T 试剂盒，购自北京华英生物技术研究所。大鼠血清A C T H 试剂盒，购自北京华英生物技术研究所。5 一H T 抗体，产品编号B A 0 1 2 1 ，购自武汉博士德生物工程有限公司。即用型S A B C 免疫组化染色试剂盒，产品编号S A l 0 2 2 ，购自武汉博士德生物工程有限公司。D A B 显色试剂盒，购自武汉博士德生物工程有限公司。1 1 3 主要仪器M o r r i s 水迷宫实验系统( M o r r i sw a t e rm a z e ，M w M ) 由水迷宫装置、水迷宫图像自动采集和处理分析系统组成。水迷宫装置由圆形水池、圆柱形平台两部分组成。水池
11、为直径1 2 米，高O 5 米的圆筒，池壁为黑色，标有东西南北4 个入水点，将水池等分为四个象限，目标象限的中央放置一直径为9 锄，高2 7 c I I l 圆柱形隐藏平台，整个实验期间其位置保持不变。旷场实验箱( o p f i e l dt e s tc a S e ，o F T c ) 参考有关文献【1 7 】自制，本实验箱为长方体，高4 0 c m 、长8 0 c m 、宽8 0 c m ，周壁为黑色，上面敞开，底面分成面积相等、黑白相间的2 5 块，沿墙格称外周格，其余为中央格。 悬尾实验箱( s u 删t a i lt e s tc a S e S T r C ) 参考有关文献【1
12、 8 】自制，本实验箱为长方形，长5 0 c m 、宽5 0 c m ，高6 0 c m ，正面敞开，实验箱放置的高度距地面约1 米左右。计时器，亿备通( 福建) 实业有限公司。音箱，漫步者R 6 0 0 T C ，深圳市漫步者科技股份有限公司。纯音乐M P 3 ，昂达V X 8 1 眈G B ，广州昂达电子。R D 乃0 0 声强计，西门子R D F 3 0 0 乾圳公司。电子精密天平，型号L P 2 B ，北京东方华测科学技术中心。台式高速冷冻离心机，T G L 1 6 G 上海安亭科学仪器厂。隔水式电热恒温培养箱，W G P 3 0 0 ，上海安亭科学仪器厂。3电热手提式压力灭菌消毒器，
13、S Y Q D s Y - 2 8 0 ，上海申安科学仪器厂。低速离心机，L D 5 2 A ，北京医用离心机厂。自动化板式酶标监测仪，Z S 2 ，北京航宇浪琴医疗设备有限公司。自动纯水蒸馏器，S Z 9 6 ，上海亚荣生化仪器厂。酸碱度离子剂测定仪，P H 2 儿，意大利哈纳有限公司。加热恒温磁力搅拌器，s H 一5 ，北京金北德工贸有限公司。光学读数分析天平，T G 3 2 8 B ，湘仪天平仪器厂。脱色摇床，T S 1 ，江苏海门市麒麟医用仪器厂。电子精密天平，A R 5 1 2 0 ，梅特勒托利多仪器( 上海) 有限公司。医用净化工作台S W 二C J 一2 皿，苏州安泰空气技术有限
14、公司。光学显微镜，B H 2 ，O L y M P U S 公司。电热恒温水浴锅，H w s Y 北京市长风仪器仪表公司。高速台式离心机，T G L 1 6 B ，上海安亭科学仪器厂。S N 6 9 5 A 型智能放免Y 测量仪，上海原子核研究所日环仪器一厂。1 2 实验方法1 2 1 动物分组与处理健康清洁级s D 大鼠4 0 只，雄性，体重2 0 0 士2 0 9 。饲养室内温度2 1 2 3 ，湿度5 0 左右，每天循环室内光暗周期为1 2 1 1 1 2 h ( 光照时间8 ：O p 2 0 ：0 0 ) ，每笼5 只群养，大鼠自由摄食和饮水。适应性饲养l 周后进行3 m i n 旷场
15、行为测定，总得分低于3 0 分或高于1 2 0分的动物予以剔除。本实验采用2 ( 有应激、无应激) 2 ( 有音乐、无音乐) 析因设计，共有四个组别。将实验动物随机分成四组，分别为对照组、慢性心理应激组( 应激组) 、音乐组和应激音乐组。对照组：大鼠同期饲养，除每周日的行为学测试和称重外不做任何干预。应激组：大鼠接受四周的慢性应激程序，应激源包括采用束缚、鼠笼倾斜、食物剥夺、变换合笼饲养对象。音乐组：音乐选择中外柔和平缓的古典纯音乐梁祝、春江花月夜、雨过天晴等。将实验动物与录音机放置在同一高度，距离为2 米。播放音乐时用声级计测量声强为5 0 d B 左右，播放时间为每晚6 ：0 1 2 ：o
16、 o 。实验场与动物房距离5 0 m 。音乐应激组：接受慢性应激四周( 模型同上) ，同时每晚6 ：0 0 1 2 ：0 0 与音乐组一起接受音乐干预。1 2 2 慢性心理应激模型的建立慢性温和应激模型( C h r 0 I l i cI I l i l ds 仃c s s ) 是由l 洫等人【1 9 】于2 0 世纪8 0 年代初创立。它通过给予动物连续数周的、各种不同的温和应激刺激，使之更现实地模拟人们日常生活中4山西医科大学硕士学位论文遭遇的困难。经过长期温和应激刺激后的的动物在行为学、生物化学和生理方面发生了变化，如快感缺失、反应迟钝、活动减少、学习记忆能力下降，睡眠紊乱等，因此，它是迄今为止能够比较反映亚健康症状的动物模型，可以比较真实的反映动物的内在变化和干预的作用。本实验中慢性应激组接受为期4 周的慢性应激程序，食物剥夺，鼠笼倾斜，变换合笼饲养对象( 合笼饲养) ，束缚四种应激形式组合构成慢性心理应激模型。周一至周六每天进
