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1、细胞染色专题细胞染色专题之一：台盼蓝台盼蓝（ Trypan Blue，也称 Direct blue 14 ） ：一种死细胞染色用色素化学名：3,3-3,3-Dimethyl(1,1-biphenyl)-4,4-diylbis(azo)bis(5-amino-4-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonic acid), tetrasodium salt3,3-*3,3-二甲基 -(1,1 -二苯基 )-4,4 -二基 双(偶氮 )-双(5-氨基 -4-羟基-2,7-萘二磺酸 )，四钠盐分子式： C34H24N6Na4O14S4 分子量： 960.81 CAS Number
2、： 72-57-1 外观：黑褐色结晶粉末摩尔吸光度： 69,000(在 606nm 附近 ) 染色原理：细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说， 台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。这被称为染料排除测试（ dye exclusion） ，Erythrosin B( 红色 )、 negrosine、eosin Y、AO 和 EB也用于此目的。通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。溶于水，可以配制成10mg/m
3、l 的水溶液，水溶液呈深蓝色。台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时,细胞分离后的存活情况，用0.4%台盼蓝直接染色5-10分钟，在显微镜下观察即可。应用于细胞凋亡：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色， 则为正常细胞或凋亡细胞。尽管在凋亡的早期到中期检测是很困难的，此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。储存条件：常温保存注意事项：1. 台盼蓝对人体有毒2. 台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。3. 台盼蓝染色法对于悬浮细胞来说，还比较方便，对贴壁细胞来说，较为繁琐。因为要消化，有时， 96
4、 孔板不一定能消化干净。而且，该法是测定细胞浓度的方法，与细胞悬液的体积有关，加入的胰蛋白酶或1640 要计入终体积。可以说，该法相对准确，可能有一些人为因素的干扰。最新回复zippo at 2008-7-10 08:45:50 细胞染色专题之二：美蓝美蓝英文名： Methylene blue ，Swiss blue 中文名：亚甲基蓝、次甲基蓝、品蓝、美蓝、亚甲蓝、四甲基蓝、盐基湖蓝、碱性亚甲天蓝等。分子式： C16H18ClN3S 分子量： 319.85 g/mol 结构式：http:/en.wikipedia.org/wiki/Image:Methylene_blue.svgCAS Num
5、ber：61-73-4 EINECS Number ： 200-515-2 熔点： 100 C 沸点：分解密度：？吸收峰： 668nm 和 609nm。染色原理： 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。zippo at 2008-7-10 08:47:58 细胞染色专题之三：吖啶橙吖啶橙： N,N,N,N-tetr
6、amethylacridine-3,6-diamine 中文名： 3,6-双(二甲基氨基 )吖啶英文名： Acridine Orange （ AO） ， Euchrysine， 3,6-Acridinediamine ， Waxoline Orange A， Acridine Orange Base， Solvent Orange 15， Rhoduline Orange， Rhoduline Orange N， Acridine Orange NO，Rhoduline Orange NO， Basic Orange 14 分子式： C17H19N3 分子量： 265.35 g/mol CAS
7、 number：10127-02-3 外观：橙色、红棕色粉末染色原理：吖啶橙（ AO）与双链 DNA 形成发绿色荧光的复合物。AO 还可与单链DAN或 RNA形成发红色荧光的复合物。一个AO分子嵌入双链DNA 的三个碱基对并发出最大波长为526nm（激发 502nm）的绿色荧光。一个AO 分子与单链DNA 或 RNA 的一个磷酸基相互作用形成聚集或堆叠的结构，此结构发出最大波长为650nm（激发 460nm）的红色荧光。因此，AO用于被利用来检测双链DNA和单链 DNA 或 RNA。 它使得用氩激光激发器或流式细胞仪同时测定DNA 和 RNA成为可能。光谱数据：与DNA 作用时和荧光素相似，激
8、发最大波长502nm，发射最大525nm（绿光）。于 RNA作用时，激发最大波长移动到460nm （蓝光），发射最大移动到650nm（红光）。染色程序：1. 用 PBS或合适缓冲液制备10-50 M AO 溶液。 a) 2. 将 1/10 细胞培养基体积的AO 溶液加入细胞培养基中。b) 3. 37下孵育细胞10-20 分钟。4. 用 PBS或合适缓冲液洗涤细胞2 次。5. 用带有 500nm 激发和 530nm 发射滤光片的荧光显微镜观察细胞。a) 由于 AO 可能具有致癌性，因此操作过程中须格外小心。b) 可以用 1/10 浓度的 AO缓冲液代替培养基。储存条件：避光, 冷藏保存zippo
9、 at 2008-7-10 08:49:19 细胞染色专题之四：碘化丙啶碘化丙啶化学名： 3,8-Diamino-5-3-(diethylmethylammonio)propyl-6-phenylphenanthridinium diiodide ，3,8-二氨基 -5-3-(二乙基甲氨基 )丙基 -6-苯基啡啶二碘英文名：Propidium iodide, Propidium diiodide; PI 分子式： C27H34I2N4 分子量： 668.39 外观：红棕色粉末应用： DNA 染色染色原理：碘化丙啶 (PI)是一种溴化乙啶的类似物，它在嵌入双链DNA 后释放红色荧光。 尽管 PI
10、不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与 Calcein-AM 或者 FDA等荧光化合物一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。光谱性质： PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm 和 615nm 。染色过程：1 用 PBS或适当的缓冲液制备1050M 的 PI 溶液。 a) 2 将 1/10 培养基体积的PI溶液加入到细胞培养基中。b) 3 在 37培养细胞10-20 分钟。4 用 PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次。5 用 535nm 激发波长， 615nm 发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞。a) 由于 PI可能具有致癌性，请小心操作。b) 也可以用1
11、/10 浓度的 PI缓冲液代替培养基。保存条件： 4避光保存注意事项：对人体有刺激性，请注意适当防护zippo at 2008-7-10 08:50:05 细胞染色专题之五：罗丹明123罗丹明 123：Rhodamine 123 分子式： C21H17ClN2O3 分子量： 381 外观：橙红色、红棕色固体/粉末溶解性：可溶于DMSO CAS Number：62669-70-9 染色原理：Rh 123 是一种细胞通透性的、阳离子的荧光探针，容易被有活性的线粒体摄取，没有细胞毒性。 Rh123 透过细胞膜在活细胞的线粒体内聚集，发出黄绿色荧光，可用于对许多种细胞进行染色， 包括植物细胞和细菌。由
12、于细胞内ATP的量与 Rh123 的荧光强度之间有相关性，此化合物被应用于检测细胞内的ATP 。 Rh123还用于癌症研究。光谱性质： l exl em (MeOH) = 505nm534nm. e (505 nm, MeOH) = 97,000. 染色步骤：1. 将 0.4mg Rh123 溶解到 1ml DMSO 中制备成 1mM Rh123-DMSO 溶液。2. 用载玻片准备细胞。细胞数目应为5 10e4 - 5 10e5个 /ml 。3. 孵育该载玻片，用PBS或 Hanks液洗涤细胞。4. 用培养基稀释1mM Rh123 溶液以制备1-20 M Rh123 缓冲液。5. 将 Rh12
13、3 缓冲液 a) 加入载玻片并在37下孵育 30 分钟至 1 小时。6. 去除 Rh123 缓冲液并用培养基洗涤细胞。b) 7. 用带有荧光素滤光片的荧光显微镜观察细胞。a) 加入细胞前将Rh123 缓冲液放在37 下孵育。b) 洗涤细胞后为了固定，加入10福尔马林缓冲液并孵育15-20 分钟，接着用PBS洗涤。储存条件：避光冷藏保存zippo at 2008-7-10 09:09:40 细胞染色专题之六：溴乙锭溴乙锭： Ethidium bromide 化学名：溴化3,8-二氨基 -5-乙基 -6-苯基啡啶英文名：2,7-Diamino-10-ethyl-6-phenylphenanthri
14、dinium bromide，2,7-Diamino-10-ethyl-9-phenylphenanthridinium bromide，3,8-Diamino-1-ethyl-6-phenylphenantridinium bromide，3,8-Diamino-5-ethyl-6-phenylphenanthridinium bromide，Homidium bromide ，EB ，EtBr 别名：胡溴胺 ;溴乙胺菲啶 ;溴乙菲啶分子式： C21H20BrN3 分子量： 394.31 g/mol 结构式：http:/en.wikipedia.org/wiki/Image:Ethidium
15、_bromide.svgCAS number：1239-45-8 熔点： 260 - 262 C（ from wiki ）性质：从酒精中结晶的是具苦味的深红晶体，熔点 238 240 ； 20时溶于 20份水和 750 份氯仿。染色原理：EB不能穿过活细胞的细胞膜，然而可以通过死细胞破损的细胞膜而对细胞核DNA 染色。 EB含有一个可以嵌入的堆积碱基之间的一个平面基团，这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近， 导致染料与DNA 结合并呈现荧光， 由于 EB-DNA复合物的荧光产率远大于未结合染料的荧光产率，所以当电泳凝胶中含有游离EB 时，也可检测出少量DNA。它是一种高灵敏的荧光试剂，也是一
16、种重要的荧光染料，常用于检测DNA 和 RNA。EB与 DNA 结合后抑制 DNA 的复制和转录。光谱性质：EB-DNA复合物的激发波长和发射波长分别为518nm 和 605nm。染色过程：1. 用 PBS或合适的缓冲液制备10-50 M EB 溶液。 a) 2. 将 1/10 培养基体积的EB溶液加入细胞培养基中。b) 3. 37下孵育细胞10-20 分钟。4. 用 PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次。5. 用带有 515nm 激发波长和600nm 发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。a) 由于 EB可能有致癌性，操作时须十分小心。b) 可以用 1/10 浓度的 EB缓冲液代替培养基。储存条件：避光, 冷冻保存zippo at 2008-7-10 09:10:24 细胞染色专题之七：曙红Y 曙红：Eosin Y 中文名：水溶伊红；四溴荧光黄；朝红；四溴荧光素钠；曙红钠盐；曙红,水溶性；黄光曙红英文名：Eosine Yellowish，Bromoeosine，Tetrabromoflu
