《pkiγ在成骨细胞分化中的功能研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《pkiγ在成骨细胞分化中的功能研究（45页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、南开大掌硕士研究生毕业( 掌位) 论文总之，我们的实验结果表明，在B M P 一2 诱导的成骨细胞分化过程中，P K I y通过P K A 信号途径发挥其抑制作用，并认为P K l 7 可作为筛选治疗骨质疏松症新药的靶分子。关键词P K l 7P K A 信号途径B M P 一2C 2 C 1 2 细胞系成骨细胞分化1 1黼开大学磺士研究生毕业( 掌位) 论文A b s t r a c tP K l 7 ，am e m b e ro fP K If a m i l y , f i m c t i o n st h r o u g hi n h i b i t i n gt h ea c t i
2、 v i t yo fc A M P d e p e n d e n tp r o t e i nk i n a s e ( P K A ) S i n c eP K l 7w a sd i s c o v e r e db yU h l e ri nM i c h i g a nU n i v e r s i t y1 9 9 7 ，i t ss t r u c t u r ea n de x p r e s s i o nh a sb e e nw i d e l ys t u d i e d 。T h ep h y s i o l o g i c a lf u n c t i o no
3、fP K I ? e s p e c i a l l yi nb o n em e t a b o l i s mh a ss e l d o mb e e ni n v e s t i g a t e d ，S o m ep r e v i o u se x p e r i m e n t a lr e s u l t ss h o w e dt h a tB M P 2 ，a sas t i m u l a t o ro fo s t e o b l a s t i cd i f f e r e n t i a t i o n ，d o w n r e g u l a t e dt h e
4、l e v e lo fP K I G ( t h ef o r mo fP K Ii nh u m a nc o r r e s p o n d i n gt oP K l 7i nm o u s e ) i nh u m a nb o n em a r r o ws t r o m a lc e l l s T h i se v i d e n c es u g g e s t e dt h ep o t e n t i a l i t yo f P K l 7t ob ear e g u l a t o ro f b o n em e t a b o l i s m C o n s i
5、d e r i n gt h es i m i l a r i t yb e t w e e nh u m a nP K I Ga n dm o u s eP K l 7o ns t r u c t u r ea n df i m c t i o n ，w es t u d i e di ft h e r ee x i s t si n t e r d e p e n d e n c eb e t w e e nP K Ap a t h w a ya n dB M P 一2s i g n a l i n ga n df u r t h e ri n v e s t i g a t e dt h
6、 er o l eo fP K l 7i no s t e o b l a s t i cd i f f e r e n t i a t i o nu s i n gp l u r i p o t e n tm e s e n c h y m a lc e l ll i n eC 2 C 1 2 。O u rw o r ks h e dt i g h to ns e a r c h i n gt a r g e tm o l e c u l e so fm e d i c i n e sf o ro s t e o p o r o s i s T h ef o l l o w i n gs t
7、 u d i e sh a v eb e e np e r f o r m e di nt h i st h e s i s ：1 P K Ap a t h w a yi si n c l u d e di nB M P - 2 一i n d u c e do s t e o b l a s t i cd i f f e r e n t i a t i o n ：W es t u d i e de f f e c t so fP K Aa c t i v a t o r ( 8 - B r - c A M P ) ，P K Ai n h i b i t o r ( K T 5 7 2 0 )
8、a n dB M P - 2o nd i f f e r e n t i a t i o no fC 2 C 1 2c e l ll i n et h r o u g hA l k a l i n eP h o s p h a t a s e ( A L P )a c t i v i t ya s s a y T h er e s u l t ss h o w e dt h a t8 - B r - c A M Ps i g n i f i c a n t l ye n h a n c e dA L Pa e t i v i t yo fC 2 C 1 2c e l l si n d u c
9、e db yB M P 一2 ，b u tK T 5 7 2 0r e d u c e di t 。W h a tw ef o u n ds u g g e s t e dt h ec r o s s t a l kb e t w e e nP K Aa n dB M P 一2p a t h w a y sa n dp r o m o t e du st oi n v e s t i g a t et h ef u n c t i o no f P K l 7i no s t e o b l a s t i cd i f f e r e n t i a t i o n 2 E f f e c
10、to f o v e r e x p r e s s e dP K 计o nd i f f e r e n t i a t i o no f C 2 C 1 2c e l ll i n e ：T os t u d yt h er o l eo fP K l 7d u r i n gd i f f e r e n t i a t i o no fC 2 C 1 2 ，w ec o n s t r u c t e dam a m m a l i a ne x p r e s s i o np l a s m i do fP K l 7n a m e dp c D N A 6 B P K l 7a
11、n dt r a n s f e c t e di ti n t oC 2 C 1 2c e l l sw i t hL i p o f e c t a m i n e ，t h e nf o u n d e ds t a b l ec e l ll i n ec a l l e dC 2 C 1 2 ( P K I T ) W ed e t e c t e do v e r e x p r e s s i o no fP K l 7b o t ho nm R N Aa n dp r o t e i nl e v e l sw i t hR T - P C Ra n dw e s t e mb
12、 l o tt e c h n i q u e s B a s e do nt h i s ，w ei n v e s t i g a t e dt h ei n f l u e n c eo fo v e r m u c hP K l 7o no s t e o b l a s t i cm a r k e rg e n e sd u r i n gC 2 C 1 2d i f f e r e n t i a t i o n 。T h el l l御开大学硪士研究魁毕业( 糍位) 论冀r e s u l t ss h o w e d ：A ) A f t e rt r a n s i e n
13、 tt r a n s f e c t i o n ，C 2 C 1 2c e l l sc o u l de f f i c i e n t l yo v e r e x p r e s st h em R N Aa sw e l la Sp r o t e i no fP K l 7 a n de x c e s s i v eP K l 7i n h i b i t e dB M P - 2 * i n d u c e dA L Pa c t i v i t yi nt h e s ec e i l s ；B 、W ea l s od e t e c t e do v e r e x p
14、 r e s s i o no fP K bm R N A a n dp r o t e i ni nC 2 C 1 2 ( AP K I f ) c e l l s 。W ef o u n do v e r m u c hP K I yb l o c k e dB M P - 2 一i n d u c e dA L Pa c t i v i t ya tt h eb a s a ll e v e li ns t a b l e s ( c o n c e n t r a t i o n so fB M P * 2a r e5 0 - 2 0 0 n g m 1 ) 。M o r e o v
15、e r , P K 玲i n h i b i t e dc o m p l e t e l ye x p r e s s i o no f 西洋 c o l l a g e na n dd e c r e a s e dt h a to fO s t e r i x T h ee x p e r i m e n t ss h o w e dP K l 7i sap o t e n tr e p r e s s o ro fB M P 2 抽d u e e do s t e o b l a s t i cd i f f e r e n t i a t i o n I nc o n c l u s
16、 i o n ，o u re x p e r i m e n t a lr e s u l t ss h o w e dt h a tP K l 7p l a y san e g a t i v er o l ei nB M P - - 2 - i n d u c e do s t e o b l a s t i cd i f f e r e n t i a t i o nt h r o u g hi t so w nf u n c t i o ni nP K Ap a t h w a y ,a n dw ec o n s i d e rP K l 7a sat a r g e tm o l e c u l ei ns e l e c t i o no f m e d i c i n e sf o ro s t e o p o r o s i s 。K e y w o r d s ：P K l 7P K As i g n a l i n gp a t h w a yB M P 一2C 2 C 1 2e e l ll i n eO s
