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1、安徽医科大学硕士学位论文CD147基因及其蛋白，MMP-2、VEGF蛋白在胃癌中的表达及意义姓名：吴倩申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：张红20100501安徽医科大学硕士学位论文 3 CD147 基因及其蛋白,MMP-2、 VEGF 蛋白在胃癌组织中的表达及意义 中文摘要 目的：目的：研究CD147mRNA及其蛋白、MMP-2、VEGF蛋白在胃癌组织中的表达及与胃癌临床病理特征的关系，探讨它们在胃癌浸润和转移中的意义。方法：方法：第一部分：利用组织芯片技术结合免疫组化S-P法检测161例胃癌组织及40例癌旁正常组织中CD147、MMP-2、VEGF蛋白的表达。第二部分：利用
2、组织芯片技术结合原位分子杂交技术检测161例胃癌组织CD147mRNA的表达。结果：结果：(1) 胃癌组织和癌旁正常组织中，CD147蛋白的阳性表达率分别为81.4%（131/161）和25%（10/40），两者间差异有显著性 （P0.05） ； (2) CD147mRNA在胃癌组织中的阳性表达率为76.4%，其阳性表达与肿瘤的大小、浸润深度、淋巴结转移有关（P0.05）；(3) 胃癌组织中CD147mRNA和CD147蛋白表达呈显著正相关（rs=0.676，P 0.05）；(5) 胃癌组织和癌旁正常组织中，VEGF蛋白阳性表达率分别为69.6%（112/161）和30%（12/40），两者间
3、差异有显著性（P 0.05）； （6）胃癌组织中CD147蛋白和MMP-2蛋白，CD147蛋白和VEGF蛋白的表达均呈显著正相关 （rs=0.597,P 0.05). (3) There was a significant positive correlation between the expressions of CD147 mRNA and CD147 protein in gastric carcinoma (rs =0.676, P 0.05). (5) The positive expression rate of VEGF protein was69.6%(112/161) an
4、d 30%(12/40) respectively in gastric carcinoma and adjacent normal tissue, there was significant difference between the two groups(P 0.05).(6) There was a significant positive correlation between the expressions of CD147 protein and MMP-2 protein in gastric carcinoma (rs =0.597, P 75为4 分；阳性细胞表达的着色深度
5、：基本不着色为0 分，浅黄色为1分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。将两项积分相乘：0 2 分为阴性(- )，3 4 分为弱阳性(+ )，5 8 分为中度阳性(+)，9 12 分为强阳性(+ )，+ +为阳性表达。 2.6 统计方法 应用SPSS 17.0统计软件进行分析，组间阳性表达差异分析采用四格表2检验，CD147mRNA及其蛋白、MMP-2和VEGF蛋白表达与胃癌各组临床病理参数之间的关系采用Mann-Whitney两样本比较的秩和检验和Kruska1-wallis多样本比较的秩和检验，相关性表达分析采用Spearman秩相关检验。P 0.05) ；高分化、中分化、低分化组胃癌间CD1
6、47蛋白的表达亦无显著性差异(P 0.05)。 n 组别 阳性率 安徽医科大学硕士学位论文 18 表表2 CD147蛋白的表达与胃癌临床病理因素之间的关系蛋白的表达与胃癌临床病理因素之间的关系 Tab.2 Relationship of CD147 protein expresion with clinical pathological features of gastric cancer CD147 - + + + 性别 0.435 男 120 17 21 54 28 女 41 13 3 14 11 年龄（岁） 0.084 0.05) ；高分化、中分化、低分化组胃癌间CD147蛋白的表达差异
7、亦无显著性意义(P 0.05)。 n 组别 阳性率 安徽医科大学硕士学位论文 20 表4 MMP-2蛋白的表达与胃癌临床病理因素之间的关系 表4 MMP-2蛋白的表达与胃癌临床病理因素之间的关系 Tab.4 Relationship of MMP-2 protein expresion with clinical pathological features of gastric cancer MMP-2 - + + + 性别 0.084 男 120 23 25 55 17 女 41 13 12 9 7 年龄（岁） 0.604 0.05)；不同分化程度胃癌组织间VEGF蛋白的表达亦无显著性差异(
8、P 0.05)。 n 组别 阳性率 安徽医科大学硕士学位论文 22 表表6 VEGF蛋白的表达与胃癌临床病理因素之间的关系蛋白的表达与胃癌临床病理因素之间的关系 Tab.6 Relationship of VEGF protein expresion with clinical pathological features of gastric cancer VEGF - + + + 性别 0.204 男 120 33 28 39 20 女 41 16 11 6 8 年龄（岁） 0.294 0.05) ；CD147mRNA阳性表达与患者的性别、年龄、肿瘤的分化程度均无显著相关性(P 0.05)。
9、 表表7 CD147mRNA的表达与胃癌临床病理因素之间的关系的表达与胃癌临床病理因素之间的关系 Tab.7 Relationship of CD147mRNA expresion with clinical pathological features of gastric cancer CD147mRNA - + + + 性别 0.568 男 120 25 49 33 13 女 41 13 12 11 5 年龄（岁） 0.840 0.05)，在胃癌不同组织学分级的组织中CD147蛋白表达水平均有一定的差异， 但无统计学意义，提示CD147蛋白表达与胃癌的分化程度无关。研究认为，CDl47与肿
10、瘤的演进密切相关， 其机制可能为： CDl47可通过上调透明质烷的产量来促进肿瘤的生长31；通过诱导血管内皮生长因子的产生促进肿瘤血管的增生；也能通过刺激间质细胞及肿瘤细胞本身产生多种基质金属蛋白酶来降解基底膜及包绕肿瘤的基质，突破基质屏障促进肿瘤侵袭、转移32。本研究中我们发现，随着胃癌肿块体积的增大CD147表达水平增强，这意味着CD147可能在胃癌的增殖方面起着一定的作用。Zucker33等研究发现在转染CD147cDNA使CD147过度表达的MDA-MB-436乳腺癌细胞系中瘤细胞的生长能力得到提高， 并认为可能是由于CD147诱导肿瘤细胞产生生长因子并释放到胞外间隙所致。我们还发现，
11、随着肿瘤浸润深度增加，CD147蛋白表达增加；161例胃癌组织中伴有淋巴结转移的有103例，其中87例见CD147蛋白阳性表达，其阳性表达水平明显高于无淋巴结转移组，差异有统计学意义(P 0.05)，但随着肿块体积的增大其表达水平增强，提示VEGF在胃癌中的高表达可促进肿瘤生长，分析原因可能为VEGF促进大量血管的生成，为胃癌的快速生长提供了足够的养分。我们还发现随着肿瘤浸润深度增加，VEGF蛋白表达增加；有淋巴结转移组VEGF蛋白阳性表达水平明显高于无淋巴结转移组，差异有统计学意义(P 0.05)；临床分期中、期胃癌VEGF蛋白阳性表达水平显著高于在、期胃癌中的表达(P 0.05)，提示VE
12、GF蛋白阳性表达与胃癌的浸润和转移有关。 我们认为VEGF高表达的胃癌组织，大量新生血管的生成，血管通透性的增加，为癌细胞向基质扩散和脱落进入血管创造了更大的可能性，因此VEGF阳性表达的胃癌组织更易发生浸润和转移。 4.5 CD147蛋白和VEGF蛋白在胃癌组织中表达的相关性 在共培养的乳腺癌细胞和成纤维细胞中，CDl47过表达时VEGF的表达上调，抑制CDl47的表达、中和CDl47蛋白的活性，都会使VEGF的表达受到抑制。Zheng 安徽医科大学硕士学位论文 37 et a1研究发现CDl47与VEGF在胃癌组织中的表达呈显著正相关， 并认为CDl47可以通过调节基质细胞中VEGF和MM
13、Ps的表达影响血管的生成和肿瘤的演进30 ；研究表明，过表达CDl47能刺激肿瘤血管生成和肿瘤生长，用反义RNA抑制CDl47表达，则二者都被抑制47,48。这些研究均表明CDl47的表达与VEGF的产生密切相关，提示CDl47可诱导肿瘤组织中血管生成。在本次研究中我们分析CD147蛋白和VEGF蛋白在胃癌组织中表达的相关性发现CD147蛋白和VEGF蛋白呈显著正相关(rs =0.499，P 0.05)，进一步证实CD147在调节肿瘤组织中VEGF的表达及血管生成中的作用，从而为CD147促进胃癌快速发展提供理论依据。Tang等49对CDl47如何诱导VEGF产生并对其可能的信号通路如P13K
14、Akt、MAPK、JUN、p38激酶进行了研究，认为CDl47是通过P13K-Akt途径调节VEGF的表达。 本次课题主要从形态学角度对CD147、MMP-2及VEGF与胃癌的关系进行探讨，认为CD147、MMP-2及VEGF均可作为判断胃癌生物学行为的重要标志，并且CD147作为MMP-2及VEGF的上游调节因子， 检测其表达水平对判断胃癌的恶性行为尤其重要，其阻抑剂的进一步探索可能成为抑制胃癌浸润转移的一条新途径。 安徽医科大学硕士学位论文 38 5. 结论 本研究采用组织芯片技术为实验平台，运用免疫组织化学S-P方法检测胃癌组织和癌旁正常组织中CD147、MMP-2和VEGF蛋白的表达；
15、运用原位分子杂交技术检测胃癌组织中CD147 mRNA的表达，并分析它们与胃癌临床分期、淋巴结转移等临床病理因素之间的关系， 以及CD147蛋白与MMP-2、 VEGF蛋白表达的相关性，探讨它们在胃癌浸润转移中的作用及意义。结果表明： （1）CD147 蛋白在胃癌组织中阳性表达率明显高于在癌旁正常组织中的表达，差异有统计学意义（P 0.05）；随着胃癌肿块体积增大， CD147 蛋白表达增强；CD147 蛋白在侵出浆膜组的阳性表达水平比未侵出浆膜组高（P 0.05）；伴有淋巴结转移组 CD147 蛋白的阳性表达水平显著高于无淋巴结转移组；临床、期的胃癌组织 CD147 蛋白阳性表达水平显著高于
16、临床、期；提示 CD147 可促进胃癌生长并与胃癌的浸润和转移有关。 （2）CD147 mRNA 表达水平与胃癌肿块大小、浸润深度，及有无淋巴结转移有关，提示 CD147 mRNA 阳性表达与胃癌发展有关。 （3）胃癌组织中 CD147 蛋白和 CD147 mRNA 表达水平呈显著正相关（rs=0.676 ，P 0.05），提示 CD147 蛋白表达的调控可以存在于转录水平。 （4） MMP-2蛋白在胃癌组织中的表达水平显著高于在正常胃粘膜组织中的表达， 差异有统计学意义 （P 0.05） ； MMP-2蛋白表达水平与肿瘤的浸润深度、 TNM分期及有无淋巴结转移有关，肿瘤浸润深度增加，MMP-2蛋白表达增加，伴有淋巴结转移的MMP-2表达水平明显高于无淋巴结转移组（P 0.05），临床分期中，、期胃癌MMP-2蛋白阳性表达水平显著高于在、期胃癌中的表达(P 0.05)，提示MMP-2与胃癌的浸润和转移
