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1、基于溶胶一凝胶的I g G 免疫传感器黎雪莲，袁若+ ，柴雅琴，张凌燕( 西南师范大学化学化工学院，重庆市现代分析化学重点实验室重庆4 0 0 7 1 5 )在对免疫传感器的研究巾，生物分子的固定化方法是构建性能优良的免疫传感器较为关键的步骤。近年发展起来的溶胶一凝胶( s 0 1 g e l ) 技术，为生物分子的固定化开拓了 新途径“1 ，尤其是有机修饰前提的提出，为功能团的引入和生物分予的固定开辟了更广阔的天地。考虑到免疫传感器应用的时实性和在线分析，本文以3 一巯基三甲氧基硅烷( M P S ) 为前提制各新型巯基化溶胶一凝胶前驱体，滴涂于修饰了普鲁士蓝( P B ) 的P t 盘电
2、极表面然后通过三维网状结构上巯基吸附的大量金胶，将I g G 抗体固定于电极上，最后用过氧化氢酶( H R P ) 而非牛血清白蛋白( B S A ) 以封闭非特异性结合位点和扩大电流的响应，制备了用于检测I g G 的免疫电极。 1 实验部分I 1 免疫电极的电化学表征采用循环伏安法( C V ) 对免疫电极逐层修饰过程的电化学行为进行了研究。在0 2 -O 5V 扫描范围内( 图1 ) ，裸P t 电极在0 1t o o lL 1 1P B S 中呈现出普鲁士蓝的可逆氧化还原峰( 图l a ) ，当电极修饰了三维溶胶- 凝胶后，响应电流明显降低( 图l e ) 随着 金胶的加入，峰电流又增
3、大，当电极修饰了I g G 抗体后，响应电流又明显降低( 图l b和I d ) ，当电极进一步修饰了不同浓度的抗原后，其响应电流进一步下降，甚至消失( 没显示出图形) 。C V 图的结果表明，三维溶胶一凝胶膜能较稳定地吸附于修饰了普鲁士蓝的电极上，而且通过吸附于电极上的金胶，能成功地将I g G 抗体修饰于电极表面，并保 持了其生物活性。圈l 不同修饰状态电极于测试底液( o 1m 0 1 L 。1p H7 0 P B S ) 中的循环伏安曲线联系人：袁若E - m a i l ：y u a n r u o s w n ue d u c r lF a x ：( 0 2 3 ) 6 8 2 5
4、2 2 7 7 国家自然科学基金及重庆市自然科学 基金资助7 7”，oo如 H1 2 实验条件的优化选择结果表明，在H 2 0 2 的浓度为0 1 7m m o lL 1 ，酶促时间为1m i n ，测试底液的p H 为7 O ， 与抗原结合时阃为7m i n 的实验条件下，可获得较好的实验结果。2 结果与讨论制备的免疫电极对培G 抗原的电流响应在I 6 2 1 7 2 n gm L “ 1 范围内呈良好的线性关系。将免疫电极分别置于线性区间的3 个不l 司I g G 抗原浓度下培育7m i n 后，按实验方法 平行4 次测定响应电流，相对标准偏差R S D 4 2 。将同一支电极连续扫描2
5、0 0 圈，电流的下降率仅为3 7 。同时，传感器具有良好的选择性，大量的乙肝、牛血清白蛋白等血清中常见抗原不干扰测定。与文献工作相比，本方法制备的免疫电极无需媒介体：用含有大量巯基的三维溶胶一凝胶膜以防止P B 的渗漏和增大金胶的吸附量，从而增大结台的抗体量；用过氧化氢酶代替牛血清白蛋白以封闭非特异性结合位点，对同一浓度的l g G 抗原测定所获得的电流响应更大。参考文献：1 J B J i a ，B Q W a n g ，A G W ue ta l ，A n a lC h e m 。2 0 0 2 7 4 ：2 2 1 72 J W a n g ，E VA P a m i d i ，D R
6、 Z a n e R e ，J A m C h e r ，LS o c 。1 9 9 8 12 0 ：5 8 5 2 3 梁汝萍，邱建丁，蔡沛祥等蔚学学在b 艺学学撼2 0 0 3 2 4 ：7 9 34 B H a g h i g h i ，S V a r m a ，E M A l i z a d e he ta 1 T a l a n t a ，2 0 0 4 。6 4 ：3AN o v e lA m p e r o m e t r i cI m m u n o s e n s o rB a s e do nI m m o b i l i z a f i o no f I m m u n
7、o 舀o b u l i nG ( I g G ) A n t i b o d yo nP l a t i n u mE l e c t r o d eM o d i f i e dP r u s s i a nB l u ea n dG o l dn a n o p a r t i d e sa sw e l la sT h r e e - d i m e n s i o n a lS 0 1 g e lM a t r i x e s X u e - L i a nL i ，R u oY u a n ，Y a - Q i n gC a i ，L i n g - Y a hZ h a n g ( C h o n g q i n gK e yL a b o r a t o r yo fA n a l y t i c a lC h e m i s t r y , C o l l e g eo fC h e m i s t r y a n dC h e m i c a lE n g i n e e r i n g ，S o u t h w e s tC h i n aN o r m a lU n i v e r S i t y ，C h o n g q i n g4 0 0 7 1 5 )7 8
