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1、中文摘要中文摘要大孔吸附树脂有机残留物检测方法及其标准研究大孔吸附树脂在药学领域主要用于活性成分和有效部位的分离、纯化及质量标准的制定。是十分有效的分离精制方法，由于其基础研究滞后，树脂应用的安全性得不到保障，影响了其大规模推广应用，本实验对不同型号大孔吸附树脂有机残留溶剂的检测方法及其应用进行了如下研究。一、大孔树脂的预处理方法研究不同预处理方法的考察1 、碱一醇法：树脂1 0 m l 一2 B V 乙醇溶胀一水洗一2 B V5 N a O H8 0 水浴恒温6 h 一8 0 水洗至中性一2 B V9 5 乙醇浸2 4 h 一9 5 乙醇洗脱至洗脱液于2 5 4 n 检测，其紫外吸收值小于或
2、等于0 0 3 。2 、超声法：树脂1 0 m 卜2 B V 乙醇溶胀一l B V 9 5 乙醇超声3 0 分次，洗脱至洗脱液于2 5 4 n m 检测，其紫外吸收值小于或等于0 0 3 。3 、蒸发干燥法：树脂l O m l 一2 B V 乙醇溶胀一8 0 蒸发干燥4 h 一2 B V 乙醇浸2 4 h 一水洗一2 B v5 N a O H8 0 水浴恒温6 h 一8 0 水洗至中性一2 B V9 5 乙醇浸2 4 h 一9 5 乙醇洗脱至洗脱液予2 5 4 n m 检测，其紫外吸收值小于或等于0 。0 3 。4 、真空干燥法：树脂1 0 m 卜2 B V 乙醇溶胀一8 0 真空干燥4 h
3、一2 B V 乙醇浸2 4 h 一水洗一2 B v5 N a o H8 0 水浴6 h 一8 0 水洗至中性一9 5 乙醇浸2 4 卜9 5 乙醇洗脱至洗脱液于2 5 4 n m 检测，其紫外吸收值小于或等于O 0 3 。采用以上四种方法对A B - 8 、D l O l 、1 1 P D 一4 5 0 、H P D 一6 、H P D 一7 0 0 树脂进行预处理，结果表明：超声多次，树脂破碎，不适于树脂预处理，真空干燥法乙醇洗脱体积略小，乙醇洗脱液紫外吸收值下降较快，但洗脱倍数减少优势不显著，考虑到树脂生产、应用过程中的可行性及其成本，本实验采用碱一醇预处理方法。不同紫外吸收度洗脱液有机残
4、留物比较研究利用紫外吸收法、气相色谱法和气相一质谱法检测洗脱液中有机残留的苯、甲苯、乙苯、甲基环己烷、对二甲苯、苯乙烯、邻二甲苯、二乙烯苯、萘、正十烷、正十二烷等有机残留物，建立洗脱液加水不混浊、紫外吸收值和有机溶剂含量之间的对应关系，为预处理提供统一的判断标准。取不同型号树脂，以碱一醇法预处理，分别收集洗脱液1 B V 份，置于2 5 4 n m 测定其紫外吸收值，结果：洗脱至洗脱液加入等量水不混浊时，A B 一8 、D 一1 0 1 树脂的醇洗脱体积为3 4 B v ，H P D 一4 5 0 、H P D 一6 0 0 、H P D 一7 0 0 洗脱体积卜2 B V ，此时，洗脱液的紫
5、外吸收值小于2 2 4 0 ；而洗脱至紫外吸收0 0 3 时，洗脱体积为2 0 一3 0 B V ，而且很难洗脱，与加水不混浊时的醇洗脱体积相差很大。同时，采用顶空气相色谱法及气相质谱法测定洗脱液加水不混浊、紫外吸收度0 5 、O 3 、O 1 时的有机残留溶剂含量，从气相检测结果分析：洗脱至加水不浑浊时，洗脱液中可检测到甲苯等残留溶剂，洗脱至紫外吸收小于0 5 时，醇洗脱体积为6 8 B V ，洗脱液中已检测不到待测有机残留溶剂。从气质检测结果分析，各洗脱液成分相同，含量略有差别。综合分析可见，预处理洗脱至加水不浑浊不能有效1大孔吸附树脂有机残留物检测方法及其标准研究去除有机残留物，洗脱至紫
6、外吸收值小于或等于0 0 3 时，醇洗脱体积为2 0 3 0 B v ，造成醇用量的浪费，因此，预处理洗脱至紫外吸收值0 3 即可。二、树脂有机残留物检测方法研究对大孔吸附树脂有机残留溶剂检测方法分三部分进行考察。1 、不同型号树脂固体顶空进样方法比较研究。完善苯等低沸点有机残留溶剂检测方法。2 、树脂中高沸点有机残留溶剂二乙烯苯的检测方法考察。3 、树脂中萘、正十烷、正十二烷检测方法考察。具体情况如下：l 、不同型号树脂有机残留物检测方法学比较研究检测指标：苯、甲基环己烷、甲苯、乙苯、对二甲苯、苯乙烯、邻二甲苯。分别采用各型号预处理后树脂加入1 0 l 混合对照品溶液的固体添加标准曲线法测定
7、A B 一8 、D 一1 0 1 、H P D 一4 5 0 、H P D 一6 0 0 、H P D 一7 0 0 五种树脂的含量，并进行方法学考察，同时，比较以上五种树脂的标准曲线的异同。结果表明：该法的方法学考察良好，五种树脂标准曲线的斜率R s D 分别为苯4 6 1 8 ，甲基环己烷2 8 1 9 ，甲苯2 8 6 5 ，乙苯2 0 8 2 ，对二甲苯2 0 4 9 ，苯乙烯2 1 1 9 ，邻二甲苯2 0 0 7 ，所得五条标准曲线不重合，样品测定时应采用同型号的预处理后树脂添加法测定大孔吸附树脂中有机残留物含量。2 、二乙烯苯检测方法考察对二乙烯苯顶空进样、直接进样方法的最低检测
8、限进行考察，结果：1 2 0 平衡3 0分，顶空进样最低检测限为O 2 m g m 1 ，1 8 0 平衡3 0 分，顶空进样最低检测限为0 0 5 2 m g m 1 ，直接进样最低检测限为O 0 8 1 5 1 u g m 1 一。因此选择直接进样法。样品制各方法考察：提取溶剂考察三氯甲烷、二氯甲烷、甲醇、乙醇、N ，N 一二甲基甲酰胺；提取方法考察回流提取、超声提取、冷浸法；提取时间考察l h 、2 h 、3 h ，树脂用量考察0 0 5 9 、O 1 0 9 、O 1 5 9 、O 2 0 9 ，最终选择O 1 0 9 树脂加入2 5 m l 无水乙醇回流提取3 小时的制备方法。采用以
9、上方法对A B 一8 、D l O l 、H P D 一4 5 0 、H P D 一6 0 0 、H P D 一7 0 0 树脂中间二乙烯苯、对二乙烯苯进行方法学考察。结果：线性范围：间二乙烯苯在0 1 6 5 0 8 8 n g ( r = O 9 9 9 9 ) ，对二乙烯苯在0 1 6 7 n g一2 0 8 4 2 n g ( r = O 9 9 9 9 ) 。精密度考察：间二乙烯苯R s D 值3 9 ，对二乙烯苯R s D 值0 7 。稳定性考察：A B 一8 间二乙烯苯含量4 9 0 1 9 l O g g ，R s D 为4 O ；对二乙烯苯含量为7 3 5 1 0 1 0 g
10、 g ，R S D 为7 7 。重现性考察：A B 一8 间二乙烯苯平均含量为5 4 4 1 51 0 g g 一，R s D 为1 8 ；对二乙烯苯平均含量为7 1 8 4 4 1 0 g g ，R s D 为3 7 ，其它树脂未检出二乙烯苯。回收率考察：间二乙烯苯：A B 一8 、D 一1 叭、H P D 一4 5 0 、H P D 一6 0 0 、H P D 一7 0 0 的加样回收率分别为8 5 6 、8 9 7 、9 3 7 、9 3 2 5 、9 4 3 8 ：其R s D 值分别为4 8 、3 1 、2 7 、2 4 、2 6 。对二乙烯苯：A B 一8 、D 一1 0 1 、H
11、 P D 一4 5 0 、H P D 一6 0 0 、H P D 一7 0 0 的加样回收率分别为9 4 1 6 、9 1 6 8 、9 3 3 8 、9 2 6 0 、8 8 6 5 ，其R s D 值分别为6 8 、1 7 、1 7 、1 6 、2 5 。最低检测限：间二乙烯苯：最低检测浓度0 0 8 1 5 1中文摘要m 厂，最低检测量为O 0 8 1 5 1 n g ；对二乙烯苯的最低检浓度为O 0 8 3 4 m 1 ，最低检测量为0 0 8 3 4 n g 。预处理后树脂末检出二乙烯苯。结论：以直接进样法检测树脂中二乙烯苯含量，可达到1 0 4 级( p p b 级) 的检测限，克
12、服了树脂固体顶空进样法二乙烯苯检测限高的缺点，该法简便、可靠，是较好的二乙烯苯的质量控制方法。3 、萘、正十烷、正十二烷检测方法考察以A B 一8 为例，采用固体顶空进样法对树脂中残留的萘、正十烷、正十二烷检测方法进行研究，通过对溶剂标准曲线法及固体添加标准曲线法进行比较，结果表明，溶剂标准曲线法回收率为萘1 3 1 4 、正十烷1 2 5 2 、正十二烷2 8 5 ，不适于树脂中有机残留溶剂的测定；固体添加标准曲线法方法学考察良好，是测定树脂中萘、正十烷、F 十二二烷含量的有效方法。结果：树脂中萘、F 十烷、正十二烷含量很高，分别为2 4 8 2 3 l p p m 、7 9 3 9 9 3
13、 p p m 、5 9 4 3 5 7 p p m ；线性范围：萘：3 1 9 6 3 1 5 4 6 p p m ( r = 0 9 9 9 5 ) ，正十烷：9 o o 1 2 7 8 7 4 9 p p m( r = O 9 9 9 4 ) ，正十二烷：8 0 3 1 3 4 6 5 5 9 p p m ( r = O 9 9 9 1 ) ：精密度考察：萘、F 十烷、正十二烷的R s D 值分别为1 0 1 、8 8 、9 9 ：重现性考察：萘、F 十烷、正十二烷的R S D 值分别为6 4 、1 4 、2 8 ；稳定性考察：萘、正十烷、正十二烷的R S D 值分别为5 0 、5 4 、
14、5 7 ；回收率考察：萘、正十烷、正十二烷加样回收率分别为9 4 1 、9 9 4 、9 6 0 2 ，其R S D 值分别为4 2 、5 1 、5 5 ；最低检测限：萘O 7 8 p p m ，正十烷O 8 2 p p m ，正十二烷0 6 5 p p m 。结论；树脂中萘、正十烷、正十二烷含量很高，而我国对其含量未有限定，相关的检测方法亦报道极少，因此，采用本方法对其进行检测，制定相应的标准，是十分必要的。三、预处理评价方法研究采用碱一醇法对A B 一8 、D 一1 0 1 、H P D4 5 0 、H P D 一6 0 0 、H P D 一7 0 0 树脂进行预处理，分别取洗脱液加入等量
15、水不浑浊、紫外吸收值O 5 、O 3 、O 1 、O 0 3 的树脂各O 0 5 9 ，加入1 0 p 1 9 5 乙醇，顶空气相色谱法测定其中有机残留物含量。结果：洗脱至加水不浑浊的树脂，其有机残留溶剂含量分别为：A B 一8 含甲苯4 2 6 p p m 、乙苯1 2 7 5 p p m 、萘1 2 8 7 2 p p m 、正十烷6 2 0 2 p p m 、正十二烷2 0 8 6 2 p p m ；D l O l 含甲苯1 3 O l p p 皿、萘1 2 8 7 3 p p m 、正十烷2 1 5 3 7 p p m 、正十二烷1 7 3 4 9 p p m ；H P D 一4 5 0 含萘3 0 5 3p p m ；H P D 一6 0 0 含萘4 9 3 8 p p m ；H P D 一7 0 0 含萘2 8 5 5 p p m 、甲苯1 5 1 p p m 。沈脱至紫外吸收值0 5 、O 3 、0 1 、O 0 3 的树脂均未检出苯、甲苯、乙苯、甲基环己烷、对二甲苯、苯乙烯、邻二甲苯、萘、正十烷、正十二烷、二乙烯苯等有机残留物。结论：预处理洗脱至加水不混浊时，有机残留物未能有效除去，沈脱至紫外吸收低于O 5 可除去树脂中残留的有机物，与从树脂洗脱液检测所得的结论相符，因此，将预处理合格的标准定
