《磷脂酰胆碱的掺入对大肠杆菌生理生化性质的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《磷脂酰胆碱的掺入对大肠杆菌生理生化性质的影响（73页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、于两要磷脂酰胆碱口C ) 是真核生物膜中的主要磷脂组分，在原核生物中只存在于那些与真核生物相关联的共生菌或致病菌中。为了研究磷脂酰胆碱在原核生物细胞中的生物学作用，使用p t a c 8 5 质粒作载体，将螺旋菌p c s 基因导入E c o l iT o p l 0 细胞并成功地构建了E c o l iT o p l 0p c s + 菌株。p c s 基因的表达产物能有效地将外源的胆碱和细胞内的C D P 二酰基甘油缩合成磷脂酰胆碱，因此在培养基中加入底物胆碱时，E c o l iT o p l 0p c s + 细胞膜磷脂中可表达一定量的磷脂酰胆碱。电镜图片显示：与对照菌相比，E c o
2、 i lT o p l 0p c s +细胞壁的外层部分明显变的不光滑，凸凹不平，表明P C 的掺入可能改变大肠杆菌细胞壁的结构和组分。不同条件下的生长曲线表明，P C 的表达影响E c o l iT o p l O 在某些条件下的生长状况，与对照相比，E c o l iT o p l OI X ：S + 对某些环境因素变得较为敏感，如高盐，S D S 。抗菌肽试验发现，低浓度C e c r o p i nP 1 ，I n d o l i c i d i n 处理的T o p l Op c s + 存活率都比相同条件处理的T o p l Op t a c 8 5 存活率高4 “ - 1 0 倍
3、，表明P C 在E c o l iT o p l 0 膜中的掺入在低浓度抗菌肽条件下可以提高细菌对抗菌肽的抗性。此外，抗生素抗性分析发现，抑制E c o l iT o p l 0p c s + 生长的氨苄青霉素剂量低于对照菌，其半致死剂量I C 5 0 在7 0 0 - - 一8 0 0 1 x g m L 之间。酶活检测显示E c o l iT o p l Op c s + 细菌周质内8 内酰胺酶的酶活性只有对照菌株的1 5 ，W e s t e r nb l o t 迸一步分析发现周质内B 内酰胺酶的含量也为对照菌株的1 5 。由此可见，周质内低含量的B 内酰胺酶是导致E c o l iT
4、 o p l Op c s + 氨苄青霉素抗性降低的原因。这是首次用实验证实导入细菌膜磷脂双分子层的磷脂酰胆碱影响B 内酰胺酶通过S e c 转运途径从细胞质分泌到细菌周质空间内，提示细菌磷脂酰胆碱可能在调节蛋白转运和分泌方面起着重要的作用。关键词：磷脂酰胆碱；抗菌肽；蛋白分泌；B 一内酰胺酶；免疫印记A b s t r a c tP h o s p h a t i d y c h o l i n e ( P C ) i st h em a i np h o s p h o l i p i di ne u k a r y o t e sb u ti ti sa b s e n ti nm o
5、s tp r o k a r y o t e s B a c t e r i a lP Cp r e s e n t so n l yi ns o m ep a r a g e n s i sb a c t e r i ao rp a t h o g e n i cb a c t e r i a ，i n d i c a t i n gt h a tP Cm a yb ei n v o l v e di nt h ea s s o c i a t i o no fb a c t e r i aw i t he u k a r y o t e s T os t u d yt h eb i o l
6、 o g i c a lf u n c t i o no fP Ci np r o k a r y o t e s ，t h eb o r r e l i a lp c sg e n ew a si n s e r t e di n t op t a c 8 5p l a s m i d ，a n dt h e nr e c o m b i n a n tp t a c 8 5 - p c sw a st r a n s f o r m e di n t oE s c h e r i c h i ac o l ih o s tc e l l st oc o n s t r u c t eaT
7、o p l 0p c s + s t r a i n T h ep r o d u c to fp c sg e n ew a sa b l et os y n t h e s i z ep h o p h a t i d y l c h o l i n ee f f i c i e n t l yv i au t i l i z i n gt h ee x o g e n o u sc h o l i n ea n di n t r a c e l l u l a rC D P d i a c y l g l y c e r 0 1 E l e c t r o nm i c r o s c
8、o p eo b s e r v a t i o ns h o w e dt h a tt h eo u tl a y e ro fE c o l iT o p l 0p c s + c e l lw a l lw a sn o ta ss m o o t ha st h a to fE c o l iT o p l 0p t a c 8 5 ，i n d i c a t i n gt h a tt h ei n c o r p o r a t i o no fP Cp e r h a p sc h a n g e dt h ec o m p o n e n t so rs t r u c t
9、 u r eo fEc o l ic e l lw a l l T h eg r o w t hC U r v e Su n d e rd i f f e r e n tc o n d i t i o n sd e m o n s t r a t e dt h a tt h ei n c o r p o r a t i o no fP Ca f f e c t e dt h eg r o w t ho fEc o l ip c s + s t r a i nu n d e rs o m ec o n d i t i o n s ，a n dt h ep c s + b a c t e r i
10、a lc e l l sb e c a m em o r es e n s i t i v et os o m ee n v i r o n m e n t a lf a c t o r s ，s u c ha sN a + a n dS D S A n t i b a c t e r i a lp e p t i d et e s t ss h o w e dt h a tt h es u r v i v a lr a t i oo fT o pl Op c s + t r e a t e dw i t hc e c r o p i nP 1o ri n d o l i c i d i nw
11、 a s4 1 0f o l dh i g h e rt h a nt h o s eo fT o p l 0p t a c 8 5 R e s i s t a n c et oa n t i b a c t e r i a lp e p t i d ei n d i c a t e st h a tt h ei n c o r p o r a t i o no fP Ci n t oE c o l iT o p l 0m a yh e l pt h eb a c t e r i a lc e l l st or e s i s tt oa n t i b a c t e r i a lp e
12、 p t i d eu n d e rl o wc o n c e n t r a t i o n I na d d t i o n ，a n t i b i o t i ct e s t ss h o w e dt h a th i g hc o n c e n t r a t i o n so fa m p i c i l l i ni n h i b i t e dt h eg r o w t ho fE c o l iT o p l 0p c s + w i t ha nI C s oo f7 0 “ - - 8 0 0l a g m L , b u tn o tEc o l iT o
13、 p l 0p t a c 8 5 A c t i v ea s s a y sr e v e a l e dt h a tt h eI B - l a c t a m a s ea c t i v i t yi np e r i p l a s mw a so n l y1 5o ft h a tf o r t h ec o n t r o ls t r a i nEc o l iT o p l 0p t a c 8 5 W e s t e r nb l o t t i n gc o n f i r m e dt h a tt h el o wa c t i v i t yo f1 3 -
14、1 a c t a m a s ei nEc o l dT o p l Op c s + r e s u l t e df r o mal o w e ra m o u n to f1 3 - 1 a c t a m a s ei ni t sp e r i p l a s m O u rr e s u l t sd e m o n s t r a t e dt h a tP Ci n c o r p o r a t e di n t ob a c t e r i a lm e m b r a n er e t a r d e dt h es e c r e t i o no fE s c h
15、 e r i c h i ac o l ip e n i c i l l i n1 3 - 1 a c t a m a s ef r o mc y t o p l a s mi n t op e r i p l a s m ，w h i c hs u g g e s t e dt h a tP Cm i g h tp l a yar o l ei nt h er e g u l a t i o no fp r o t e i ns e c r e t i o ni nt h o s eb a c t e r i aa b l et os y n t h e s i z ep h o s p h
16、 a t i d y l c h o l i n e K e yw o r d s ：p h o s p h a t j d y l c h o l i n e ；a n t i b a c t e r i a lp e p t i d e ；p r o t e i ns e c r e t i o n ；1 3 - 1 a c t a m a s e ；w e s t e r nb l o t缩写词A m p ：氨苄青霉素( a m p i c i l l i n )I P T G ：异丙基一1 3 一D 一硫代半乳糖苷( I s o p r o p y l - B - D - t h i o g a l a c t o p y r a n o s i d e )C C T ：磷酸胆碱胞嘧啶核苷酸转移酶( P h o s p h o c h o l i n ec y t i d y l y l t r a n s f e r a s e )C K I ：胆碱激酶( c h o l i n ek i
