《HFABP死后诊断早期心肌梗死的免疫组化实验性研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HFABP死后诊断早期心肌梗死的免疫组化实验性研究（56页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、重庆医科大学硕士研究生学位论文英文缩写D AA DC AA T PM IE M IA M IC A SC H DC O M P A R EF A B PH F A B Phm i ndWI H CH ES PP B SH B F PS C DP T A HC K M BM Y O英汉缩略语名词对照英文全称d e p l e a t i o na r e a sa r e ad e n s i t yc o r o n a r ya r t e r ya d e n o s i n et r i p h o s p h a t em y o c a r d i a li n f a r c t
2、i o ne a r l ym y o c a r d i a li n f a r c t i o na c u t em y o c a r d i a li n f a r c t i o nc o r o n a r ya t h e r o s c l e r o s i sc o r o n a r ya r t e r yd i s e a s ec o m p a r ef a t t ya c i db i n d i n gp r o t e i nH e a r tt y p ef a t t ya c i d b i n d i n gp r o t e i nh o
3、u rm i n u t e sd a yw e e ki m m t m o h i s t o c h e m i s t r yh e m a t i n ea n de o s i ns t r e p t a v i d i n p e r o x i d a s ep h o s p h a t eb u f f e rs a l i n eh e m a t o x y l i nb a s i cf u c h s i np i c r i ca c i ds u d d e nc a r d i a cd e a t hp h o s p h o t u n g s t i
4、ca c i dh e m a t o x y l i nM Bi s o e n z y m eo fc r e a t i n el d n a s em y o g l o b i n中文全称缺失面积面积密度冠状动脉三磷酸腺苷心肌梗死早期心肌梗死急性心肌梗死冠状动脉粥样硬化冠心病比较脂肪酸结合蛋白心肌脂肪酸结合蛋白小时分钟天周免疫组织化学苏木精一伊红链霉素抗生物素一过氧化酶磷酸盐缓冲液苏木精碱性品红苦味酸心脏性猝死磷乌酸苏木精心肌型肌酸激酶同功酶肌红蛋白重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果据我所知，除了文中特别加以标注
5、和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任学位论文作者签名：复晕窒整日期：肋0 9 z 1 2 - ：) -学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学学校有权保留并向国家有关部门或机构迭交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅
6、学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文论文作者签名指导教师签名日期重庆医科大学硕士研究生学位论文H F A B P 死后诊断早期心肌梗死的免疫组化实验性研究摘要背景：S C D 的研究是法医病理学重要的任务之一，而A M I 的死后诊断是法医病理学的重点和难点。不足6 h 的心肌梗死死亡病例，其心肌在肉眼和光学显微镜下无特异性的改变，不使用特殊方法，难以对A M I 引起的猝死作出早期的组织学诊断。在常规的组织学染色出现特征性的形态学改变以前，缺血心肌已经发生了一系列的病理生理变化。生物化学，组织化学、酶组织化学、荧光组织化学染色，电子显
7、微镜技术都能显示心肌的早期损害，但是上述方法因操作过于复杂，缺乏特异性、稳定性，费用过高，以及易受到组织自溶、腐败等因素的影响而限制了它们在法医学中的应用。I H C 作为一项快捷、简便、实用的方法，它可以显示缺血心肌细胞内蛋白质质和量的变化，从而为A M t 死后诊断提供了一种可能。心脏型脂肪酸结合蛋白是一种小分子蛋白质( ( 1 4 1 5 k D a ) ，且有严格的器官特异性，大量地存在于心肌细胞浆中，其作用是上调心肌细胞中的长链脂肪酸。具有分子量小、心肌细胞中含量高且为水溶性的特点，当心肌细胞缺血时，心脏型脂肪酸结合蛋白( H F A B P ) 很容易迅速地透过细胞膜而漏出到细胞间
8、质，从而进入血液循环。大量的临床研究证实心肌缺血1 2 小时内，用血液中脂肪酸结合蛋白的浓度诊断心肌梗死在特异性和敏感性方面都优于肌红蛋2重庆医科大学硕士研究生学位论文白，原因主要是脂肪酸结合蛋白的分子量较肌红蛋白( 1 8 k D a ) J , 且有心脏特异性。因此心肌脂肪酸结合蛋白目前被世界卫生组织列为新推荐的诊断急性心肌梗死的早期指标之一。用于心肌缺血引起猝死的死后诊断的I H C 指标能否用于法医病理学诊断，需要考虑其特异性和敏感性以外，还必须考虑组织自溶、腐败等因素对抗原的影响。因此用于心肌缺血引起猝死的死后诊断的各种I H C 指标的死后稳定性及其在死后不同时间的表达变化规律是值
9、得进一步研究。目的：本研究利用结扎左侧冠状动脉前降支的方法建立动物心肌缺血模型，运用免疫组化的方法，探讨H F A B P 在死后诊断早期心肌梗死的敏感性及死后稳定性，以期对其在法医学中诊断S C D 的应用价值进行评价。实验分为两部分：一H F A B P 在缺血心肌中的表达及敏感性研究方法：结扎大鼠左侧冠状动脉前降支的方法建立大鼠心肌缺血模型，检测H F A B P 在大鼠心肌缺血不同时间的表达。4 5 只健康S D 大白鼠，重2 5 0 3 0 0 克，雌雄不限，随机分为8 个实验组和1 个对照组，每组5 只。对照组大白鼠除不结扎冠状动脉外，其它步骤与实验组完全相同。各实验组大白鼠分别于
10、结扎后1 5 分钟、3 0 分钟、l 小时、2小时、3 小时、4 小时、6 小时、8 小时后处死，对照组大白鼠于手术后0 小时处死取出心脏放入1 0 中性缓冲福尔马林液中固定2 4 h 。取材后作H E 染色和H F A B P 免疫组织化学染色，显微镜下观察两组标本的H E 、I H C 切片；并按I H C 染色结果判定标准对I H C 染色进行全面3重庆医科大学硕士研究生学位论文的观察、判断，采用图像分析技术，客观测量I H C 切片中H F A B P 的缺失面积和阳性面积。结果：1 常规H E 染色：对照组及心肌缺血3 h 以内组，心肌细胞染色清晰、边界清楚、横纹存在，仅见有轻度心肌
11、间质水肿。心肌缺血4 h 后缺血区可见少许心肌细胞轻度水肿，缺血区边缘有少许炎性细胞浸润、心肌嗜伊红性增强，未见明显的细胞坏死。心肌缺血8 h 可见心肌嗜伊红性明显增强，部分心肌细胞出现凝固性坏死，炎性细胞增多。2 免疫组织化学染色：对照组，I i , 肌胞浆全部染成均匀的棕黄色，用苏木素衬染后，细胞核染成淡蓝色，心肌细胞间质及其他细胞成分不着色。实验组心肌细胞H F A B P 在缺血心肌内的脱失表达具有明显的时间规律。缺血1 5 分钟组，在心内膜下心肌、乳头肌可见散在或小灶性的部分H F A B P 缺失。缺血3 0 分钟组，开始出现脂肪酸结合蛋白的完全脱失，但仍然局限于心肌内膜下和乳头肌
12、。缺血1 小时和2 小时组的心肌则出现斑片状缺失且波及到心肌中层，缺血3 小时累及心肌外层。缺血4 小时，心肌细胞则出现全层细胞的完全脱失并随着缺血时间的延长，脱失面积增大。H F A B P 在心肌缺血不同时间的各组缺失面积经比较和统计学分析表明：实验组的H F A B P 缺失面积与其各相应对照组比较均有显著性差异，H F A B P 在缺血3 小时内各组之间没有明显的差异性，而心肌缺血3 小时与心肌缺血4 小时的心肌细胞中H F A B P 脱失面积仍有显著差异，说明H F A B P 的敏感性主要体现在心肌缺血3 h 以前。4重庆医科大学硕士研究生学位论文二H F A B P 在诊断早
13、期心肌梗死的死后稳定性的实验性研究方法：结扎左侧冠状动脉前降支的方法建立家兔心肌梗死3 小时模型，检测H F A B P 在死后不同时间的表达情况。2 0 只健康新西兰大白兔，体重2 - 2 5 k g ，雌雄不限，随机分为实验组( B 组n = 1 0 ) 和对照组( A 组n = 1 0 ) 。实验组予以结扎左冠状动脉前降支造成心肌缺血持续3 小时后断颈处死，取缺血区心肌；对照组除不结扎冠状动脉外，其它步骤与实验组完全相同。术后0 时直接处死，取左心室心肌。两组标本在4 。C 放置，分别于死后l h 、2 h 、4 h 、8 h 、1 6 h 、1 d 、2 d 、3 d 、4 d 、5
14、d 、6 d 、7 d 、10 d 、2 w 、取材作H E 染色和H F A B P 免疫组化染色。观察两组标本的H E 切片：并按I H C 染色结果判定标准对I H C 染色进行全面的观察、判断，采用图像分析技术，客观测量I H C 切片中H F A B P的缺失面积和阳性表达强度。结果：1 常规H E 染色：缺血心肌组织可见细胞浊肿、水样变，横纹模糊或消失，胞浆灶性嗜伊红性增强、胞核缩小而染色加深，心肌纤维波浪样改变等心肌早期缺血的病理改变，未见典型心肌梗死改变。缺血心肌4 。C 放置3 4 天，心肌结构部分改变如心肌细胞浊肿、横纹模糊或消失与正常心肌死后变化相似，缺乏特异性。放置7
15、14 天，缺血心肌组织和细胞形态与对照组类似。2 免疫组织化学染色：对照组心肌组织在4 “ C 放置3 d 内，H F A B P在心肌细胞胞浆内呈强阳性表达，未见明显的脱失区；4 。C 放置4 d 心肌内膜下出现部分小片状缺失。缺血区心肌组织均可见不规则点、灶、S重庆医科大学硕士研究生学位论文片状H F A B P 缺失区；部分区域心肌细胞H F A B P 阳性表达强度减弱。连续H E 染色对比发现H F A B P 缺失区及阳性表达减弱区的心肌细胞胞浆嗜伊红性增强、细胞核缩小而染色加深。梗死区与非梗死交界区域的心肌细胞内H F A B P 阳性表达强度减弱与周围阳性表达的非缺血区心肌分界
16、清楚。H F A B P 在在对照组及心肌梗死组不同时间的缺失面积两两比较和统计分析表明：4 。C 放置3 d 内H F A B P 阳性表达强度无明显减弱，缺失面积无增加；随着两组标本在4 。C 放置时间的延长，H F A B P阳性表达强度和阳性反应面积有减弱趋势。死后放置4 d 以内H F A B P脱失面积与相应正常对照组有显著性差异( 胙0 0 5 ) ，放置超过5 d 以上，其脱失面积与正常对照组无显著性差异( 矿O 0 5 ) 。结论：1 大鼠心肌缺血后1 5 m i n 艮1 可出现H - F A B P 脱失，随着缺血时间的延长，心肌细胞内H F A B P 的缺失面积增加，心肌缺血4 d , 时达到高峰。H F A B P 检测心肌缺血敏感性强，能明确显示缺血3 d , 时内的缺失区。所以H F A B P 可用于死后病理诊断急性心肌缺血。2 H F A B P 的稳定性一般，受自溶影响相对较小。死后4 。C 放置4 天以内，兔缺血区
