《大黄素对白蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《大黄素对白蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响（25页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、大黄素对白蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化的 影响主讲：房向东The effect of Emodin on the human renal tubular epithelial to mesenchymal transition induced by albumin研究背景1技术路线与方法2结 果3讨 论4结 论5概 要蛋白尿不仅仅是肾脏损伤的生物学标志，还 是加速肾脏疾病向终末期肾衰进展的主要危 险因素之一。 研究背景肾脏损伤蛋白尿 临床表现反作用物理损伤诱导化学趋化因子、炎症因子激活补体促进细胞凋亡损伤及加速纤维化 机制1、正常肾单位的丢失和肾结构的破坏 2、成纤维细胞及肌成纤维细胞的大量
2、增生 3、细胞外基质的产生和积聚 病理变化肾脏纤维化研究背景肾间质 纤维化肾小球 硬化肾脏纤维化肾间质纤维化是关键！间质纤维化的程度更能预测肾功能的变化 ！研究背景肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（TEMT）在肾间质纤维化的发生发展中有着重要的作用，它被定义为肾小管上皮细胞丢失了上皮表型，而获得 新的肌成纤维细胞特征的过程。研究背景转分化ECMECMECM上皮细胞肌成纤维细胞化学名：3-甲基-1，3，8-三羟基蒽醌大黄素传统的生物学作用：抗 菌消炎、抗肿瘤、免疫 抑制、保肝、护肾 研究背景保护肾脏作用：清除氧 自由基及炎症因子、抗 细胞增殖、促细胞外基 质降解、阻滞TEMT体内外研究发现大黄
3、素可延缓糖尿病肾病、 梗阻性肾病等肾脏纤维化发生，其中阻滞 TEMT过程发挥重要地位。研究背景研究目的白蛋白能否诱导HK-2细胞转发生转分化过程 、促进细胞外基质合成大黄素对白蛋白产生的上述过程是否产生影响技术路线与分组空白对照组 大黄素对照组大黄素干预组白蛋白诱导组HK-2细胞无处理因素20g/ml大黄素作用 0、12、24、48h5mg/ml白蛋白刺激时同 时加入20g/ml 大黄素作用0、12、24、 48h观察各组细胞形态学变化，收集细胞总RNA半定量检测-SMA、E-cadherin、FNmRNA的表达5mg/ml白蛋白作用 0、12、24、48h 各组实验重复3次，所有数据以xs表
4、示，行方差齐性检验，多组间 计量资料采用单因素方差分析 用SPSS12.0软件对数据进行处理 以P0.05为有显著性差异, P0.01有非常显著性差异 RT-PCR正常HK-2细胞仅表达少量的-SMA、FNmRNA， 而E-cadherinmRNA的表达较强。E-cadherin -SMA FNM 0 12 24 48h 大黄素对照组上述因子的表达与正常对照组无差 异结 果白蛋白诱导HK-2细胞表型转化及大黄素干预后的效果 白蛋白可诱导HK-2细胞发生表型转化，即E-CadherinmRNA的表达下调， -SMAmRNA的表达上调，与0h比较，12h后即有差异，48h后差异显著， p0.01。
5、而同时加入20g/ml大黄素作用后，其变化趋势明显减弱。-SMA 白蛋白诱导大黄素干预M 0 12 24 48h 结 果白蛋白诱导HK-2细胞表型转化及大黄素干预后的效果 E-cadherin 大黄素干预白蛋白诱导M 0 12 24 48h M 0 12 24 48h 白蛋白诱导HK-2细胞分泌纤维连接蛋白（FN）的情况及大黄素干预后的效果FN的表达随白蛋白刺激时间延长而逐渐增多，在大黄素干预后其表达上调趋势亦明显减缓。FN白蛋白诱导大黄素干预M 0 12 24 48h 讨 论蛋白尿与肾小管间质损伤蛋白尿的水平反映了肾小球损伤的程度MDRD试验 把蛋白尿基础排出量作为独立的危险因素纳入加速慢性
6、肾脏病进展的研究临床研究发现CKD患者在应用 ACEI、ARB类药物可非依赖降压作用减少尿蛋白量的排泄 而延缓慢性肾脏病恶化速度 降尿蛋白和延缓GFR下降之间有着紧密的联系，蛋白尿的程度对CKD预后具有很强的预测 价值 。讨 论 蛋白尿与肾小管间质损伤我们的实验结果发现，5mg/ml人纯化白蛋白刺激HK-2细胞一段时间内后，上 皮细胞表型标志物E-cadherinmRNA表达下调，肌成纤维细胞表型物- SMAmRNA表达上调，且随白蛋白作用时间的延长表达水平逐渐增强。 结果表明HK-2细胞发生表型转变，介导了肾小管间质纤维化的发生。讨 论TEMT与肾小管间质纤维化 TEMT在肾间质纤维化的发生
7、发展过程中发挥重要 作用 TEMT过程包括：肾小管上皮细胞的黏附属性缺失 (E-钙粘蛋白减少)，肾小管基底膜的破坏，表达- SMA的肌成纤维细胞增多及其向间质迁移最终导致 间质纤维化。 。 肾间质纤维化的另一决定因素是ECM合成与降解 平衡的调节 肌成纤维细胞分泌FN参与ECM构成。 本研究选择 FN作为观察ECM聚积的评价指标TEMT与肾小管间质纤维化讨 论 我们实验结果发现正常肾小管上皮细胞因未发生明 显转分化，其FNmRNA的分泌甚微， 而5mg/ml人白蛋白诱导HK-2细胞转分化的发生同 时，检测到FNmRNA表达呈现时间依赖性增强， 进一步参与肾间质纤维化的形成。TEMT与肾小管间质
8、纤维化讨 论讨 论大黄素阻滞TEMT在肾间质纤维化中的作用实验中，我们通过使用20g/ml大黄素与白蛋白共同作用HK-2细胞制造干预 模型。 实验结果发现，经大黄素干预后HK-2细胞后其E-cadherinmRNA的表达亦有 渐降趋势，-SMA mRNA表达上升，但在48h内其下降/上升趋势呈明显减缓 ，较白蛋白诱导组有明显差异。 大黄素部分阻滞了HK-2细胞的TEMT过程。讨 论大黄素阻滞TEMT在肾间质纤维化中的作用而通过对FNmRNA表达情况的检测发现：经大黄素干预后，FNmRNA表达亦 受到部分抑制。原因可能为：1、大黄素阻滞了HK-2细胞的转分化发生，使得Myof细胞生成 减少，进而减少了FN的表达和分泌来源；2、大黄素可抑制Myof细胞对FN的 表达和分泌过程。！20g/ml大黄素可在48h内呈时间依赖性的减轻白蛋白诱导 的HK-2细胞转分化过程，延缓肾间质纤维化的进展。
