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1、疑难血型鉴定 与临床输血北京市红十字血液中心 血型室 苗天红红细胞血型ISBT分类血型系统：由单一基因位点、或两个或多个相邻但 相互之间极少重组同源基因所编码的一个或多个抗 原组成。（30个）血型集合：在血清学、生物化学或遗传学上有相关 性、目前不能进一步证明其为一个血型系统的一组 抗原。（5个）血型系列：目前不能归类于血型系统和血型集合的 血型抗原。 低频率抗原：抗原频率在人群中小于%。（700系 列，22个抗原） 高频率抗原：抗原频率在人群中大于99%。（901系 列，11个抗原）血型系统目前为止发现30个血型系统。临床输血最重要的两个血型系统：ABO、Rh系 统。临床输血技术规范第十五条
2、 输血科（血库）要逐项核对输血申请单、受血 者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO血 型（正、反定型），并常规检查患者Rh（D） 血型（急诊抢救患者紧急输血时Rh（D）检查 可除外），正确无误时可进行交叉配血。一、ABO血型ABO血型鉴定是输血前最重要的血清学检 测，必须保证ABO血型鉴定系统的安全性和 敏感性。应尽可能运用全自动检测系统，以减少结 果解释和抄录错误的风险。ABO血型ABO血型定型的方法正反定型不符的原因解决正反定型不符的程序ABO亚型ABO血型定型常见问题的解决方法ABO血型与临床输血ABO血型的分型原则则ABO血型的定型ABOABO定型必定型必须须须须包括包括正定型正定型
3、和和反定型反定型，正反定，正反定 型一致才能确定血型。型一致才能确定血型。正定型正定型 使用单克隆抗-A和单克隆抗-B试剂检测红细胞抗原。 反定型反定型使用A1和B型试剂红细胞检测血清中的抗体。ABO血型定型方法献血者：微量板法、微柱凝集法、纸片（玻片）法、试管法。受血者：微柱凝集法、微量板法、试管法 。不推荐使用纸片（玻片）法纸纸片（玻片）法定型的缺点1、必须在2-3分钟内看结果，时间略长，标本干燥，易将红细胞聚集误判为凝集。2、无法检出弱抗原、抗体。3、无法观察红细胞的混合外观现象。4、无法观察红细胞的溶血现象。ABO血型检测检测 ：正反定型不符ABO 正反定型相符：正定型反应强度4+；反
4、定 型反应强度 2+。ABO 正反定型不符的定义和范围ABO 正反定型不符（多或少抗原、抗体）。ABO 正反定型相符，但弱反应，正定型反应强 度4+，反定型反应强度2+。ABO 正反定型相符，但反定型反应强度差别 2+以上。正反定型不符的原因实验技术及管理原因生理性因素疾病影响临床治疗的影响正反定型不符：1、实验实验 技术术及管理原 因试剂质量问题：过期失效、被污染及使用未经确 认的试剂等。仪器设备问题：设备故障及使用未经确认的设备 等。试验技术人员的操作问题：技术错误、判读错误 （溶血、弱凝集、混合外观）、记录错误等。标本问题：采样不规范（静脉输液处采样、非抗 凝管）、标本接收不规范（溶血、
5、乳糜、变质标 本）等。正反定型不符：2、生理性因素年龄：老年人（抗体减弱）、4个月前的婴儿（抗原 或抗体不成熟）。ABO亚型：抗原减弱或血清中出现意外抗体（抗-A1、 抗-B）。意外抗体： 受检者血清中存在室温反应性IgM类同种 抗体（MN、Lewis、P血型系统同种抗体） 、冷凝集 素，这些意外抗体能与试剂红细胞发生凝集，造成反 定型异常。“先天性”无ABO抗体前带现象正反定型不符：生理性因素嵌合体血型（卡米拉，chimerism）：这种血型者 体内有两类血型红细胞群体，正定型时可出现“混 合外观”凝集现象。个体特异性：个别人血清中ABO血型物质过高， 可干扰正定型。红细胞多凝集现象：红细胞
6、因遗传的表面异常， 发生多凝集现象。试剂红细胞保护剂因素：患者体内可能含有针对 试剂红细胞保护剂成分相应的抗体，导致反定型 发生与ABO 血型抗体无关的红细胞凝集反应。正反定型不符：3、疾病的影响白血病或其它造血系统恶性疾病：造成ABO（或 RhD）抗原减弱甚至消失、ABO抗体减弱。低丙种球蛋白血症：因免疫球蛋白水平下降而使 反定型时不凝集或弱凝集。肝脏疾病、结核病等：导致血浆白蛋白/球蛋白比 例倒置，干扰反定型。真性红细胞增多症、多发性骨髓瘤等：红细胞呈 钱串状干扰正定型，多发性骨髓瘤患者血浆中的 M蛋白会干扰反定型。正反定型不符：疾病的影响自身抗体：自身免疫性溶血性贫血、淋巴瘤、胶 原疾病
7、（红斑狼疮）等患者的自身抗体会干扰反 定型。红细胞自身凝集：患者体内存在高效价冷凝集素 使红细胞发生自发的凝集现象。感染：G-菌感染可导致类B、全凝集或多凝集，干 扰正定型。红细胞致敏：受免疫球蛋白致敏的红细胞，在含 高蛋白介质的试剂中可发生凝集。正反定型不符：疾病的影响急性大量失血：外周血网织红细胞增多，并出现 有核红细胞，使正定型减弱。血型型物质过高：某些疾病（如腹腔癌）导致血 浆中存在大量的型物质，中和抗-A或抗-B抗体， 引起正定型为假阴性或弱阳性。正反定型不符：4、临临床治疗疗影响近期输血：患者近期输入异型红细胞，使正定型 时显示“混合外观”现象，输入异型的血浆会干扰 反定型。造血干
8、细胞移植：ABO不同型造血干细胞移植， 可影响正、反定型。单采血浆或血浆置换治疗：血浆稀释会造成反定 型减弱，如果使用大量的非同型的血浆做置换治 疗，标本中血浆为输入的，可能造成反定型异常 。正反定型不符：临临床治疗疗影响免疫抑制治疗：可能会导致抗体减弱。大量输液：抗体被稀释，反定型减弱。静脉输入高分子药物：如甘露醇、右旋糖苷、羟 乙基淀粉等会干扰正反定型。正反定型不符结结果分类类：红细红细 胞ABO亚型血液病致抗原减弱血型型物质过高急性大量失血4个月内婴儿近期输（异型）血造血干细胞移植（异型）红细胞自身凝集直抗强阳性红细胞获得性B、多凝集红细胞红细胞血型嵌合体等正反定型不符结结果分类类：血浆
9、浆年龄（4个月内婴儿、老年人）。白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制剂的患者、先天丙种球蛋 白缺乏的患者、免疫缺陷的患者抗体减弱。先天无ABO抗体。前带现象。单采血浆或血浆置换治疗。大量输液。意外抗体。ABO不同型造血干细胞移植患者。近期输入异型血浆。缗钱状红细胞非特异性凝集等。正反定型不符处处理的程序排除人为因素及操作失误。查阅、询问临床资料，设计针对性试验。选择试管法做正反定型。ABO血型鉴定的特殊技术。一、询问询问 、查阅临查阅临 床资资料 （临临床输输血申请单请单 ）患者的年龄患者的临床诊断患者的近期输血史患者的近期用药史、治疗史患者是否进行了造血干细胞移植患者以前的血型二、试试管法试试管法定
10、型的优优点可以反复离心看结果。可以随意延长抗原抗体反应时间 ，可以改变反应 温度（4、37孵育），有利于弱抗原、抗体 的检出或排除冷凝集素的干扰。可以观察红细胞混合外观现象。可以观察红细胞溶血现象。试试管法正反定型ABO正定型中各种试剂试剂 用途抗-A、抗-B抗-AB 确认弱A、B抗原，与弱A、B抗原亲和力强,会产生较强反应，主要用于鉴定Ax和Bx。抗-H 用于检查ABO亚型及孟买及类孟买型。抗-A1 用于A亚型检测。ABO反定型中各种试剂试剂 用途A1、B细细胞O细细胞 检查是否存在ABO系统以外室温反应性抗体干扰ABO反定型。自身对对照 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干
11、扰(如冷凝集等)。A2细细胞 用于A亚型的鉴定（A亚型产生抗-A1抗体）。三、ABO血型鉴鉴定的特殊技术术吸收放散试验唾液型物质检测毛细管离心分离自身和输入红细 胞DTT处理自身凝集红细 胞分子生物学检测 （血型基因）吸收放散试验试验表达弱A和弱B抗原的红细红细 胞与相应应抗体反 应应不出现现凝集现现象，但可以吸收相应应的抗体，并且可以将其放散出来，通过检测过检测 放散出来的抗体，可以证证明弱A或弱B抗原的存在。吸收用RBC：盐水洗涤3次的待检压积 RBC 1ml。吸收用的标标准血清：人源或可用于吸收放散的单克隆抗-A、抗-B 。将压积RBC和标清按等体积比例混合，在4孵育至少1小时，期间每隔
12、15分钟混匀一次。用冷盐水洗涤孵育后的细胞4-6次，得到压积RBC，加入等量盐水。56水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。用标准试剂红细 胞检测放散液。唾液型物质检测质检测大约约78%的个体具有Se基因，它控制着产产生水溶性 的ABH抗原的分泌。通过检测过检测 分泌型人唾液中的ABH 物质质可作血型鉴鉴定。用于：ABO亚亚型、近期输输血史等型物质准备：1-2ml唾液，沸水煮10分钟，离心后得到的上清 。标标清的修正：标清用盐水稀释至与相应红细 胞产生4+的最高 稀释度。中和：将上清与修正的标清等体积混合,室温放置30分钟。检测 ：用Ac检测 中和后的抗-A, Bc检测 中和后的抗-B，O
13、c检 测中和后的抗-H。结果判断：通过ABH抗血清的抑制试验证 明ABH抗原存在于 唾液中。毛细细管离心分离自身和输输入红细红细 胞新生成的自体红细红细 胞比输输入的旧红细红细 胞密 度小，可以通过过离心方法与输输入的红细红细 胞分离开 。用盐水洗涤红细 胞3次，在保留白膜层的情况下尽可能去掉上 清，混匀。在微量红细 胞比积管中加入洗涤红细 胞，封死管底。用专用离心机离心15min。在距红细 胞柱顶上5mm处切开微量红细 胞比积管，用注射器 将管中的红细 胞冲到试管中。将分离出的红细 胞洗涤，用盐水配成2-4%红细 胞悬液备用。巯巯基试剂试剂 消除自身凝集红细红细 胞巯基试剂：DTT、2-Me
14、巯基试剂可以裂解IgM抗体单体间的二硫键，用 以消除冷自身抗体造成的红细胞的自发凝集，为 血型检测提供不凝集的红细胞。用盐水洗涤红细 胞3遍并配成50%的悬液，加入 等量的0.01M的DTT，37孵育30分钟，将细胞 洗涤3遍后配成2-4%的悬液备用。分子生物学检测检测 血型应用试剂盒通过PCR-SSP方法检测ABO单体 型。通过测序参照已知单体型进行分析。ABO亚亚型ABO亚型是指在常见的A、B、AB、O 4种血型之 下进一步细分的ABO血型。亚型必须具有遗传基础，有明确的血清学特点。因年龄、疾病等不可遗传的因素造成的血型改变 不是亚型。虽然有基因改变，但不影响血清学特点的ABO血 型不是亚
15、型。ABO亚亚型A亚型：A2、A3、Aint、Ax、Am、Ay、Aend、Ael 等。B亚型：B3、Bx、Bm、Bend、Bel 等。A亚B 、AB亚 Aw、BwB（A）、A（B）cisAB 孟买、类孟买（Hh血型系统）ABO亚亚型ABO亚型的发现正反定型不符成人、未患使抗原、抗体减弱的疾病正定凝集强度应 4+，反定凝集强度 2+。正定凝集强度弱于4+提示可能是亚型。注意：凝集强度和凝集状态（正常凝集、混合外观）反定凝集强度2+，或仅存在冷反应性不规则 抗-A、抗-B提示可能是亚型。注意：靠反定预测亚型不如正定可靠 ！举例ABO定型常见问题见问题 的解决方法ABO亚亚型正定：抗-A、抗-B、抗
16、-AB、抗-A1、抗-H反定：A1c、A2c、Bc、Oc、自身对照吸收放散试验唾液型物质检测血型基因检测有条件者可作家系调查ABO定型常见问题见问题 的解决方法A、B抗原减弱延长反应时间 、4孵育吸收放散唾液型物质检测既往血型调查血型基因检测临床追踪：一般病情缓解后血型抗原恢复ABO定型常见问题见问题 的解决方法抗体减弱延长反应时间 、4孵育酶处理试剂红细 胞既往血型调查ABO定型常见问题见问题 的解决方法冷自身抗体用37温盐水洗涤红细 胞、45热放散3分钟。巯基试剂(DTT)处理红细胞。将血浆和红细胞分别在37孵育后再混合。自身吸收、O型红细胞吸收、兔红细胞基质吸收 去除血清中的冷自身抗体。ABO定型常见问题见问题 的解决方法
