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1、Vol. 37 No. 6 Jun. 2017第 37 卷 第 6 期 2017 年 6 月 中 南 林 业 科 技 大 学 学 报 Journal of Central South University of Forestry 2. Guangdong Academy of Forestry, Guangzhou 510520, Guangdong, China;3. Boluo Forestry Research Institute, Huizhou 516100, Guangdong, China)Abstract: Sterile seedling developing from th
2、e plus tree seed was cultured as the initiation explant to establish the large-scale tissue culture of Paraserianthes falcataria, by taking uniform design and orthogonal design to selectculture mediums and optimizing inducing-multiplication,condition of culture and seedling hardening, etc. The resul
3、t showed that the explant should be cultured 2 cycles in induction medium MS + 6BA 0.5 mg/L, and then transferred into proliferation medium MS +6BA 0.2 mg/L +NAA 0.02 mg/L+sucrose 30 g/L with natural light cultured 4 cycles, which could significantly inhibit the vitrification and the proliferation r
4、ate up to 4.1; the optimum rooting medium was 1/2MS+NAA 0.01 mg/L +IBA 0.2 mg/L+ sucrose 20 g/L, the rooting rate was 72.3%, the survival rate could improve to 92.5% by rooting combining with seedling hardening.Keywords: Paraserianthes falcataria; tissue culture; optimization晏 姝，等：南洋楹组培快繁技术优化研究66第 6
5、 期1 材料与方法1.1 材 料采集广东省博罗县林业科学研究所南洋楹优树 BLS16 种子，通过无菌苗培育苗技术 *( 本技术已申请专利：201510683550.2) 建立南洋楹组培苗无菌体系，选取一株生长健壮的无菌苗作为初始外植体。1.2 方 法1.2.1 诱导培养 切除外植体根部后，切分为 2 段，其中一段含 1 个顶芽和一个腋芽，另一段含 2 个腋芽（含子叶），接入诱导培养基培养 50 d 后，切除基部老化愈伤组织并分割，再培养 40 d。诱导培养基的成分为：MS + 6BA 0.5 mg/L，附加蔗糖 30 g/L、卡拉胶 7 g/L、pH 值 5.8（下同）。观察植株分化情况。 1
6、.2.2 增殖培养 将愈伤组织和丛芽转入预备试验获得的较适宜增殖培养基（MS + 6BA 0.1 mg/L），长度大于3.0cm 的芽体单独切下，并分段切割，每段至少含2 个芽。连续培养 8 个周期，每个周期 35 d，获得无性系瓶苗试验材料。增殖培养基优化试验采用均匀设计建立试验方案（表 1），每个处理试验瓶苗数为 25 瓶，35 d 后统计各处理增殖倍数、平均苗高，并观察植株生长状况。表 1 3因素6水平试验方案（U63） Table 1 Test project of 3 factors with 6 levels（U63）试验号6-BA /(mgL-1)NAA /(mgL-1)蔗糖 /
7、(gL-1)10.100.012520.150.033030.200.023040.3002550.400.052560.500.04301.2.3 生根与炼苗不定芽增长到 3 5 cm 时，切下转入生根培养基。生根培养基优化试验采用正交设计建立试验方案（表 2），每个处理试验瓶苗数为 20 瓶。培养室内暗培养 10 d 后，移到室外遮阴蓬中闭瓶炼苗 7 d，统计各处理生根率，并将生根率进行反正弦转换后进行正交试验结果方差分析。瓶苗生根后，揭去瓶盖注入清水（保持水量为培养基平面以上 1 2 cm），开盖炼苗 3 d 后可移栽。表 2 正交设计试验方案（L34） Table 2 Test pro
8、ject of orthogonal design（L34）试验号MS /(mgL-1) NAA /(mgL-1) IBA /(mgL-1) 蔗糖 /(gL-1)11/20.020.22021/20.040.42531/20.060.63041/30.020.43051/30.040.62061/30.060.22571/40.020.22581/40.040.63091/40.060.4201.2.4 培养条件培养室温度为 (252)，光照强度 1 500 3 000 lx，光照时间每天 12 h。增殖培养的前 4 个周期培养光源采用自然光（可接受除 11 点到 15点的直射阳光）。 1.2
9、.5 苗木移栽用浓度为 5% 的多菌灵洗净瓶苗根部的培养基后，于晴天下午 4 点半后移栽至育苗基质中，育苗基质为体积比为 3 1 的黄心土和泥碳土，覆盖透明塑料薄膜，每天早晚用喷雾器喷水，保持湿度 85%，晴天时需覆盖遮阴网。30 d 后除去塑料薄膜。2 结果与分析2.1 外植体诱导与分化外植体接入诱导培养基 10 d 后，基部出现膨大并逐步伴有淡黄色愈伤组织产生；继续培养 14 d后，子叶基部、腋芽和顶芽可见绿色芽原基突起，随后迅速萌生小芽；培养至 50 d 后，基部愈伤组织老化、颜色变为黑褐色，丛芽伸长速度变缓，大部分分化出的小芽被愈伤组织包围。分割转接培养40 d，可继续诱导丛芽的分化，
10、但有效芽诱导率明显降低，当芽生长到 2 3 cm 时停止伸长，并随着时间的推移，逐渐变粗、透明、多水。试验结果表明，南洋楹外植体的诱导对激素反应十分敏感，长时间、 高激素环境打破了植物内外源激素的平衡，使体内激素受体趋于饱和状态9， 导致丛芽玻璃化、叶片卷曲变脆，严重影响后期的伸长生长。2.2 增殖培养及其培养基优化将愈伤组织和丛芽转入预备试验获得的低激67第 37 卷中 南 林 业 科 技 大 学 学 报素增殖培养基（MS + 6BA 0.1 mg/L），培养光源采用自然光（可接受除 11 点到 15 点的直射阳光）培养 4 个周期后，植株玻璃化现象明显改善，恢复正常生长。经 8 个周期增殖
11、培养后，平均增殖倍数 2，共获得生长良好的无性系瓶苗 200 瓶。增殖培养基优化试验结果（表 3）表明，随着 6-BA浓度从 0.1 0.5 mg/L 递增，增殖倍数呈先增大后降低的趋势， 而苗径组织成熟度降低、 苗色变黄；NAA 的浓度与增殖倍数无明显相关规律，2 种激素浓度对苗高生长的影响也不明显；低激素和高碳源浓度组合的苗径组织成熟度较高、含水量少，极少出现玻璃化现象。可见，适宜浓度的 6-BA 是促进南洋楹增殖倍数提高的主导因素， 其中试验3：6-BA 0.2 mg/L +NAA 0.02 mg/L+ 蔗糖 30 g/L 增殖倍数可达到4.1、 平均苗高3.2 cm， 且苗木生长健壮、
12、苗色正常、愈伤组织幼化，有利于进一步生根培养或继续增殖培养。表 3 增殖培养基优化试验结果 Table 3 The results of proliferation medium optimization test试验号增殖倍数平均高 /cm生长情况13.03.0苗径纤细；叶片多，叶色绿；基部愈伤头小、组织老化23.22.8苗径细；叶片较多，叶色较绿；基部愈伤头较大、组织较软嫩34.13.2苗径较粗壮；叶片较多，叶色较绿；基部愈伤头较大、组织较软嫩43.02.8苗径粗嫩；叶片较多，叶色较绿；基部愈伤头大、组织软嫩52.82.5苗径粗嫩；叶片多，叶色偏黄，掉叶较多；基部愈伤头小、组织软嫩62.5
13、2.7苗径粗嫩；叶色黄，掉叶多；基部愈伤头小、组织老化2.3 生根培养基筛选选择苗高 3 5 cm、叶色正常、茎干健壮的植株进行生根培养基筛选试验。转入生根培养基培养 10 20 d 后 , 观察不同生根培养基中植株的生根效果。4 个试验因素包括 MS、NAA、IBA、蔗糖， 各3个浓度水平对生根率的影响方差分析 （表4）结果表明，NAA 浓度对生根率的影响在 0.01水平上差异极限著，MS 浓度在 0.1 水平差异显著，而 IBA 和蔗糖对生根率的影响不显著。表 4 不同因素对生根率的影响方差分析 Table 4 Variance analysis of the effects of dif
14、ferent factors on rooting rate变异来源自由度平方和均方差F 值Pr FMS2266.095 56133.047 814.620.064 0NAA24 755.215 62 377.607 8261.240.003 8IBA221.668 910.834 41.190.456 5蔗糖218.202 29.101 10.840.543 5从表 5 可知，在不同配方生根培养基中，植株生根及生长表现各不相同。在低 NAA 浓度条件下，根系多数从韧皮部生出，且根系柔软、不宜折断；随着激素浓度的提高，根部愈伤组织增多，根系从愈伤组织生出，且根系粗、脆，在移栽时容易脱落 ； 在
15、低MS浓度条件下， 植株易变黄、 掉叶，可能与南洋楹生长速度快、对营养元素需求较大有关；正常生长的植株，无论是韧皮部生根或愈伤组织生根，生根时间约为 15d 左右。生根试验结果表明，试验 1：1/2MS+NAA 0.01 mg/L +IBA 0.2 mg/L+ 蔗糖 20 g/L 诱导生根效果最好，生根率可达 72.3%。表 5 生根培养基筛选试验结果 Table 5 The results ofrooting medium screening test试验号生根率 /%生根时 间 /d生根情况172.313韧皮部皮孔生根，愈伤头小，根细软240.916愈伤头较大，根系从愈伤组织生出，根较粗短
16、320.014愈伤头大，根系从愈伤组织生出，根粗、脆466.613部分韧皮部皮孔生根，根较粗、较多538.510愈伤头大，少量根系从愈伤组织生出610.017植株偏黄，少量根系从愈伤组织生出760.013掉叶较多，部分韧皮部皮孔生根，根较少833.317植株掉叶、变黄，少量根系从愈伤组织生出90-植株枯黄、掉叶2.4 强化炼苗生根法移栽效果分析将传统生根加炼苗方法和强化炼苗生根法移栽成活率统计数据进行了对比（表 6），结果表明，传统方法生根加炼苗需要 24 d，平均根长 4.7 cm，移栽成活率为 55.0%；强化炼苗法将生根与炼苗过程结合进行，培育时间缩短至 16 d，平均根长 2.3 cm，移栽成活率提高至 92.5%，且植株健壮、苗色深绿，移栽效果显著提高。晏 姝，等：南洋楹组培快繁技术优化研
