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1、茶和咖啡对吸烟引起的小鼠自由基损伤的保护作用茶和咖啡对吸烟引起的小鼠自由基损伤的保护作用前言前言 传统观念认为吸烟对人体的损害来自烟碱，然而，最新研究表明，吸烟中自由基的危害要远远大于烟碱。香烟固相中的自由基可以通过滤嘴将其部分除去。另一部分则包含在烟气的气相中，每吸入一口烟气，其中自由基的含量就达 106 个，过滤嘴对此类自由基的清除作用不大，必须采取更科技的手段来对其进行清除和降低。虽然这些自由基的存活时间仅仅为 10 秒，但却有着 极大的危害性，它的危害主要表现在破坏细胞膜、使血清抗蛋白酶失去活性、损伤基因导致细胞变异的出现和累积等方面，进而引起一系列疾病。吸烟作为目前产生自由基最快最多
2、的方式，其对健康的损害作用已经引起了人们的广泛关注。咖啡和茶是世界上消费最多的饮料，目前已经有很多关于喝茶和喝咖啡有利于健康和抗氧化性的报道。研究表明，茶叶中的茶多酚和咖啡中的绿原酸等物质均具有较强的抗氧化和清除自由基的能力。吸烟在现代生活中普遍存在，通过研究吸烟引起的自由基积累和健康的损伤作用以及茶和咖啡这两种常见饮品的抗氧化和自由基清除作用，对倡导健康的生活方式，有效预防和减少吸烟带来的危害具有重要意义。实验材料实验材料动物：健康雄性 KM 小鼠 60 只，体重 1822g试剂药品：绿茶（碧螺春，产自江苏） 、雀巢咖啡（速溶， 袋装， 浅棕色颗粒， 轻度烘培） 、 丙二醛（MDA）测定试剂
3、盒(南京建成生物工程研究所)、超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)、生理盐水、香烟仪器设备：光栅分光光度计、台式离心机、可调恒温水浴箱（可调至 100） 、微量移液器 （10-100ul，100-1000ul） 、电子天平、灌胃器、鼠笼、烟熏装置（自已设计制作）观察指标观察指标小鼠血浆、肝、肾组织 SOD、MDA 活性小鼠红细胞渗透脆性，开始溶血和完全溶血时的 Nacl 浓度实验方法实验方法1.样品制备：将绿茶按 20%的添加剂量加入 95100 水中浸泡 7min，倒出茶汤，再加入等量沸水 7min，合并两次茶汤；速溶咖啡粉按 1:10 的比例用 85水冲调，过滤，备
4、用，两样品均未经过特殊处理。2.分组与给药：将小鼠随机分为六组，即阳性对照组（单纯茶水组和单纯咖啡组） 、空白组（非烟熏组） 、对照组（单纯烟熏组） 、烟熏加茶水组，烟熏加咖啡组，每组 10 只，编号。单纯茶水组、烟熏加茶水组和单纯咖啡组、烟熏加咖啡组分别给予茶水和咖啡样品。给药剂量均为 20ml/Kg，空白组和对照组给予相同剂量的生理盐水，烟熏前 3 天开始灌胃给样品，然后每次烟熏前 30min 灌胃，并连续至实验结束。3.小鼠被动吸烟：将对照组，烟熏加茶水组，烟熏加咖啡组小鼠放入 15 cm 25 cm 18 cm 的长方体自制吸烟箱中熏烟,熏烟箱盖顶有一排小口,每次插入 5 根香烟。当烟
5、雾达到视线模糊的时候,用纱布将通风口罩住,使小鼠被动吸烟(熏烟过程中保持熏箱中的烟雾浓度） 。每次熏烟 2 h,期间每隔 30min 打开盖透气 5 min,重复 4 次。而阳性对照组、空白组只在无烟的相同环境中暴露相同时间。4.测定指标：一周后，处死小鼠，取材测定相应指标。（1）每只小鼠摘眼球采血 1.5ml 左右，肝素抗凝后测定红细胞脆性。采用 10 g/L 的 Nacl 溶液和蒸馏水分别配置 2.57.0 g/L 的 10 种不同浓度的 Nacl溶液(间隔浓度为 0.15 g/L) ,每支试管加入 4ml 配制的 Nacl 和 1 滴(0.05ml)抗凝血标本,双手搓动、混匀,将加入血液
6、的试管置于室温 2 h 后取出,观察,判定开始溶血管和完全溶血管,并读出该管的 Nacl 浓度。(2) 将取出的小鼠血液 3000 转/分离心 10 分钟后取血浆，检测血浆中 SOD 活性和 MDA 含量。(3) 每组取出小鼠的肝、肾组织，用预冷至 4 生理盐水冲洗表面残血，称重后研磨成匀浆，离心(3000 转/分，10 分钟） ，取上清液冷冻至-20冰箱中。采用氮蓝四唑(NBT)光化还原法检测肝、肾中的 SOD 含量，TBA 比色法测定 MDA 含量。5.统计学处理：实验结果以均数标准差(XS)表示，组间比较采用成组 t 检验，检验水准=0.05。参考资料参考资料1孟志卿等 苹果汁对吸烟小鼠
7、肝、肾、肺 SOD 和 MDA 的影响 江西农业学报 2009, 21 (10) : 1231242陈林等 瓜蒌、桃仁、鱼腥草对被动吸烟大鼠肺损伤的保护作用研究 2012033阮瑰等 吸烟对微循环的影响以及脂质过氧化的中介和自由基清除剂的保护作用 1997, 7( 4) : 34附：实验原始数据记录表附：实验原始数据记录表表 1 小鼠烟熏情况记录表日期组别烟熏开始时 间烟熏结束时 间实验者备注表 2 小鼠灌胃情况记录表 日期： 实验者：组别样品 （30ml/Kg)编号体重灌胃量备注单纯茶水组茶水单纯咖啡组咖啡空白组Nacl对照组Nacl烟熏加茶水组茶水烟熏加咖啡组咖啡表 3 小鼠红细胞脆性实验结果记录表组别编号开始溶血管 Nacl 浓度 （g/L)XS完全溶血管 Nacl 浓度 （g/L)XS备注单纯茶水 组单纯咖啡 组空白组对照组烟熏加茶 水组烟熏加咖 啡组表 4 小鼠肝、肾、血浆 SOD 测定结果记录表SOD 含量 （mol /mL) 组别编号肝脏肾脏血浆XS备注单纯茶水组单纯咖啡组空白组对照组烟熏加茶水组烟熏加咖啡 组表 5 小鼠肝、肾、血浆 MDA 测定结果记录表MDA （mol /mL) 组别编号肝脏肾脏血浆XS备注单纯茶水组单纯咖啡组空白组对照组烟熏加茶水 组烟熏加咖啡 组
