《三七总皂甙、川芎嗪抑制病毒性心肌炎小鼠钙超载的机制研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《三七总皂甙、川芎嗪抑制病毒性心肌炎小鼠钙超载的机制研究（87页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、浙江大学博士学位论文三七总皂甙、川芎嗪抑制病毒性心肌炎小鼠钙超载的机制研究姓名：张若松申请学位级别：博士专业：儿科学指导教师：康曼丽2003.1.1浙江大学博士掌位论文三七总皂甙、川芎嗪抑制病毒性心肌炎小鼠钙超载的机制研究博士研究生张若松导师康曼丽教授中文摘要病毒性心肌炎( V ir a lm y o c a r d i t isV M C ) 是儿科临床常见的心血管疾病之一。二十世纪七十年代以来，V M C 发病日趋增多，相继报道了很多有关该病的临床资料和病毒学诊断，但其发病机制仍未完全阐明，其后各国主要关注于发病机制的研究。近年来，随着分子生物学的快速发展，对本病的研究有很大的突破，但尚无
2、特效的治疗方法。仍以对症治疗为主。随着对该病研究的深入，中西医结合治疗取得了明显的效果，显示出对V M C 的良好前景。通过柯萨奇病毒B 型( C o x s a c k i e v ir u sBC V B ) 感染小鼠急性心肌炎实验研究，至少有两种与病毒感染有关的心肌损伤机理已经明确。一种为病毒的直接损伤作用，另一种为机体的免疫反应对心肌细胞的杀伤作用。有研究表明，病毒的直接作用和免疫损伤均可引起心肌细胞钙超载，钙超载亦是V M C 心肌损害的发病机制之一。并认为钙超载是病毒引起心肌细胞损伤和坏死的共同通路之一。心肌细胞肌浆网( s a r c o p l a s m i cr e t c
3、 c u l a mS R ) 的生理功能主要是通过调节心肌细胞内钙离子浓度来控制心肌细胞的收缩和舒张。研究发现，收缩期心肌细胞内游离钙离子浓度升高的9 0 由s R 释放，而舒张期胞浆钙离子浓度的下降，7 0 一7 5 是由肌浆网钙泵摄取并储存于s R 腔内。如果S R 的结构和功能发生异常，引起钙离子代谢障碍，则易导致心肌舒缩浙江大掌博士掌位论文功能不全，直至心功能衰竭。三七总皂甙为我国常用的传统中药，是三七的主要活性成分，以R b l 和R g l 为主，R b l 和R 9 1 对钙离子转运都有抑制作用，R b l 的作用在于阻止外源性钙离子流入，而R g l 的作用则为抑制胞内，钙离
4、子的释放，由于R bz 和R 9 1 分别作用于钙转运的不同环节，故二者在作用上表现协同。大量的药理研究证实，三七总皂甙具有抑制血小板聚集、抗血栓、增加冠脉血流、降低血压和心肌负性变频及负性变力作用，从而纠正了心肌的能量缺乏。有研究表明三七总皂甙通过上述多种药理作用提高心肌细胞膜上钙泵的活性，使心肌细胞内钙超载明显减轻。川芎嗪是中药川芎的有效成分，从川芎中提取而得，是一种生物碱，川芎嗪的主要作用是活血化瘀，随着研究的增多，逐步发现川芎嗪的许多药理特性，临床应用范围亦逐步扩大。目前川芎嗪已成为临床心脑血管疾病的一种常用的比较安全的药物。较多的研究证实川芎嚷具有类似钙通道阻滞剂维拉帕米的作用，中科
5、院基础医学研究所发现川芎嗪不但能抑制高血压动物血管平滑肌细胞钙离子内流，而“能提高钙泵的活性。有报道川芎嗪佐治V M C 取得良好的疗效， u 未见作用机理的研究报道。本课题通过腹腔内注射C V B3 。制成V M C 模型，以中成药：七总皂甙和川芎嗪注射液加以干预，探讨V M C 的形态学( 光镜和电镜) ，血清心肌酶诺、心肌细胞内游离钙离子浓度、肌浆钙转运蛋白( 肌浆网钙泵、钙离子释放通道和磷达水平的变化，并在此基础上，探讨三七总皂甙j ：因素的影响。本研究旨在寻找V M C 新的治疗其可能的作用机制。网钙泵活性和肌浆网酸受纳蛋白) 基因袁和川芎嗪注射液对以药物，并进一步探讨第一部分三七总
6、皂甙和川芎嗪注射液对病毒性心肌炎小鼠心肌损害的干预作用研究用亲心肌的C o x B3 。病毒( 下c I D5o 为1 0 。5 ) O 4 m l 腹腔注射至2浙江大掌博士掌位论文B A L B ，c 小鼠( 雄性，4 6 周) ，制作V M C 模型。同时以不含病毒的培养液0 4 m l 注射于同年龄的同批实验小鼠作为对照组。腹腔注射病毒和不含病毒的培养液后约半小时，V M C 模型组和对照组分别腹腔注生理盐水0 2m l 7 天，三七总皂甙组和川芎嗪组分别将三七总皂甙( 4 0 m g k g ) 和川芎嗪( 4 0 m g k g ) 注射液稀释至0 2 m l 腹腔注射于已感染病毒的
7、小鼠，连用7 天。实验第8 天摘眼球取血后处死各组实验鼠。血清离心后集中测心肌酶谱，同时称心脏净重量，并留左室心肌作病理形态学检查( 光镜和电镜) 。结果1 实验动物心脏重量( H W ) 和体重( B W ) 的比较：实验第8 天，模型组B w 明显低于对照组( P 0 0 5 ) 。说明V M C 可使动物B w 下降，H w B w 增加，三七总皂甙和川芎嗪干预后可使V M C 引起的B w 下降和H w B W 增加得到明显改善。2 实验动物血清心肌酶谱的变化：模型组血清心肌酶诺的C K M B 、C K 、A S T 、L D H 、H B D H 与对照组比较均有显著增高( P 0
8、 0 5 ) 。3 V M C 对s RC a ”一A T P 酶和N a + - K + 一A T P 酶活性的影响：模型组S R4浙江大掌博士掌位论文C a “A T P 酶活性明显低于对照组( P 0 0 5 ) ，提示V M C 可在基因转录水平抑制S E R C A ：的表达，但对R Y R 。和P L B 的基因表达无明显影响。2 三七总皂甙对V M CS R 钙转运蛋白基因表达水平的影响：三七总皂甙干预后S E R C A 。、R y R ，和P L B 的基因表达m R N A 水平分别为0 4 6 、0 5 2和0 4 7 。与模型组比较S E R C A ：m R N A
9、水平有显著升高( P 0 0 5 ) ，提示三七总皂甙对R Y Rz3 川芎嗪注射液对V M CS R 钙转运蛋白基因表达水平的影响：川芎嗪组S E R C A ：、R y R2 和P L B 的基因表达m R N A 水平分别为0 4 2 、0 5 4 和0 4 7 。与模型组比较，s E R C A ：I I i R N A 水平有显著升高( P 0 0 5 ) ，提示川芎嗪对R y Rz 和P L B 的基因表达无明显影响。结论1 三七总皂甙和川芎嗪注射液能够明显改善V M C 小鼠的病理形态学变化和血清酶谱的升高。2 V M C 小鼠存在心肌细胞内钙超载，并伴有s RC a ”- A
10、T P 酶和N a + 一K +一A T P 酶活性降低。心肌细胞钙超载与S RC a ”一A T P 酶活性降低密切相关。3 V M C 小鼠S Rs E R C A ：的基因表达水平降低，P L B 和R y Rz 的基因表达水平则无明显影响。4 三七总皂甙干预可减轻V M CS E R C A ：的基因表达下调程度，但不能恢复到正常水平。可提高S RC a “- A T P 酶和N a + 一K + 一A T P 酶活性，减轻心肌细胞钙超载，对P L B 和R y Rz 的t u R N A 水平则无明显影响。5 川芎嗪可部分减轻V M C 降低的S E R C Az m R N A 含
11、量，并提高V M C 的s RC a ”一A T P 酶和N a + 一K + 一A T P 酶活性，减轻心肌细胞钙超载，对P L B 和R y Rz 的m R N A 表达则无明显影响。6浙江大掌博士掌位论文S t u d yO nt h eE f f e c to fT o t a lS a p o n i n so fP a n a xN o t o g i n s e n ga n dL i g U s t r a z i n eo nM y o c a r d i a lC a l c i u mO v e r l o a di nt h eM i c ew i t hV i r a
12、 lM y o c a r d i t i sA f f i l i a t e dC h i l d r e n SH o s p i t a lo f l eM e d i c a lC o l l e g eo f Z h e j i a n gU n i v e r s i t yP o s t g r a d u a t eZ h a n gR o o s o n gT u t o rP r o fK a n gM a n l iA b s t r a e tV i r a lm y o c a r d i t i s ( V M C ) i so n eo f t h ec o m
13、 m o nc a r d i o v a s c u l a rd i s e a s e si np e d i a 仃i c s S i n c et h e1 9 7 0 S ，t h eo g c u I T e n c eo f v i r a lm y o c a r d i t i sh a sb e c o n l em o r ea n dm o r e ，a n dt h e r eh a v eb e e nm a n yr e p o r t so nt h ec l i n i c a ld a t aa n dv i r o l o g i c a ld i a
14、g n o s i so fi t H o w e v e r , i t sp a t h o g e n e s i sh a sn o tc l a r i f i e a t e dc o m p l e t e l y , t h u s , l a t e ro n , t h ef o c u so fr e s e a r c ho fa l lc o t m t r i e ss h i f t e dt oi t sp a t h o g e n e s i s I nr e c e n t y e a r s ，a l o n g w i t h t h er a p i
15、 d d e v e l o p m e n to f m o l e c u l a r b i o l o g y , t h er e s e a r c h0 1 1t h i sd i s e a s eh a sh a ds e i n eg r o a tb r e a k t h r o u g h s ，b u tn ot h e r a p yw i t ho b v i o u se f f e c th a sb e e nf o u n do u ty e t T h ew a yt od e a lw i t hi ti ss t i l lm a i n l yt
16、 h es p e c i f i ct r e a 嘲o fs p e c i f i cs y m p t o m s A l o n gw i t ht h ed e e pg o i n go ft h er e s e a r c ho nt h ed i s e a s e , t h ei n t e g r a t e dt r a d i t i o n a lC h i n e s ea n dw e s t e r nm e d i c i n eh a sp r o d u c e do b v i o u se f f e c t s ，s h o w i n gag o o dp r o s p e c to f t h et r o a U n e n to f v i r a lm y o c a r d i t i s T h ee x p e r i m e n t a ls t u d yo nt h em o u s ea
