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1、T H E S I SB i o a c t i v em e t a b o l i t e sf r o mf o u rf u n g ih a r b o r e di ns p e c i a le n v i r o n m e n tP o s t g r a d u a t e ：Z h a n gJ i eS u rx v i s e dby“buoervlseOb yP r o f T a nR e n x i a n gS c h o o lo fL i f eS c i e n c e ，N a n ji n gU n i v e r s i t y2 0 0 9 5
2、2 3目录中文摘要I英文摘要I I I主要缩略语第一章细胞松弛素的化学结构与生物学研究11 1 引言11 2 细胞松弛素的化学结构分类21 3 细胞松弛素的生物学活性研究1 51 4 细胞松弛素的生物合成研究1 81 5 结语2 0参考文献2 1第二章黄花蒿内生真菌C h a e t o m i u mg l o b o s u m 次生代谢产物的研究2 92 1 引言2 92 2 次生代谢产物的结构解析2 92 3 次生代谢产物生物活性研究4 22 3 1 体外抗肿瘤活性研究4 22 3 2 免疫抑制和细胞毒活性研究4 32 4 实验部分4 42 4 1 仪器与试剂4 42 4 2 培养基4
3、 42 4 3 菌种来源及发酵方法4 52 4 4 提取和分离方法4 62 4 5 体外抗肿瘤活性测试方法M T T 法4 62 4 6 免疫抑制和细胞毒活性测试方法4 72 4 7 化合物结构鉴定4 82 5 结果与讨论4 9参考文献5 0第三章狗牙根内生真菌彳妒P 馏f ，凇n i g e ，次生代谢产物的研究5 23 1 引言5 23 2 次生代谢产物的结构解析5 23 3 免疫抑制和细胞毒活性研究6 93 4 实验部分7 13 4 1 仪器与试剂7 13 4 2 菌种来源及发酵方法7 13 4 3 提取和分离方法7 13 4 4 免疫抑制和细胞毒活性测试方法7 23 4 5 化合物结构
4、鉴定7 23 5 结果与讨论7 3参考文献7 4第四章墨西哥湾海泥中真菌A s p e r g i l l u sf u m i g a t u s 次生代谢产物的研究7 64 1 引言7 64 2 次生代谢产物的结构解析7 64 3 实验部分8 04 3 1 仪器与试剂8 04 3 2 培养基8 04 3 3 菌种来源及发酵方法8 04 3 4 提取和分离方法8 04 3 5 化合物结构鉴定8 14 4 结果与讨论8 2参考文献8 2第五章大刀螳螂肠道真菌D a l d i n i ae s c h s c h o l z i i 次生代谢产物的研究8 45 1 引言8 45 2 次生代谢产
5、物的结构解析8 45 3 实验部分9 75 3 1 仪器与试剂9 75 3 2 培养基9 75 3 3 菌种来源及发酵方法9 75 3 4 提取和分离方法9 85 3 5 化合物结构鉴定9 95 4 结果与讨论1 0 0参考文献1 0 1致谢1 0 3附录A 读博期间已发表和待发表的论文1 0 4附录B 部分化合物谱图1 0 5附录C 化合物3 5 和3 8 的单晶数据1 4 5南京大学博士学位论文：四株特境真菌新活性次生代谢产物的研究毕业论文题目：望挂挂蕉县苴堑鲨：睦盔生垡盘芒堑丝盟宝2 0 0 6级博士研究生姓名：鲞态指导教师( 姓名、职称) ：堡垒叠耋监微生物是寻找新药物的宝贵资源，而特
6、境微生物( 如植物内生茵、海洋微生物、昆虫共生菌等) 为了适应其独特的生存环境，而产生了不同于普通微生物的特殊代谢方式，因此从其次生代谢产物中发现结构新颖、功能特殊的活性化合物已成为天然药物研究与开发的热点。免疫抑制剂主要用于器官移植抗排斥反应和自身免疫病如类风湿性关节炎、红斑狼疮和炎性肠病等。然而， - 3 前市场上所用的大多数免疫抑制剂有严重的毒副作用如肝中毒、肾中毒和诱发高血压等，因此迫切需要开发新型毒副作用小的免疫抑制剂。肿瘤是一类严重危害人类健康的常见病和多发病。据世界卫生组织预测恶性肿瘤将取代心血管病成为世界死亡人数最多的人类第一杀手。虽然现在对肿瘤的防治方法种类繁多，但药物治疗更
7、有其独特的优势，因此从天然产物中筛选天然、无害、易为人群接受且效果显著的抗肿瘤化合物( 如细胞毒素) ，是g l 前肿瘤防治研究中关注的一大热点。本论文从寻找新型细胞毒素和免疫抑制药物的角度出发，对在体外活性测试中有较强的细胞毒或免疫抑制活性的四株特殊生境真菌的次生代谢产物和生物活性进行了研究。运用现代色谱技术( 硅胶、O D S 、S e p h a d e xL H 2 0 以及H P L C )共分离得到5 9 个化合物，运用现代波谱方法( U V 、M S 、I R 、C D 、N M R ) 以及X r a y 单晶衍射鉴定了其中4 9 个化合物的结构，其中5 个是首次发现的新化合物
8、。此外，我们从中筛选出了具有细胞毒和免疫抑制活性的化合物。具体分述如下：1 从黄花蒿( A r t e m i s i aa n n u aL ) 内生真菌C h a e t o m i u mg l o b o s u mI F B E 0 4 1的固体发酵物中分离得到1 1 个化合物，鉴定了其中9 个化合物的结构，其中8 个为细胞松弛素类化合物，包括两个未见报道的新化合物( 1 和2 ) 。体外活性测试结果表明：化合物1 8 对K B ( 人鼻咽癌细胞) 癌细胞有弱的细胞毒活性，其I c 5 0 约2 吮M ，而它们对M C F 7 ( 人乳腺癌细胞) 和H e p G 2 ( 人肝癌细胞
9、) 两种癌细胞南京大学博士学位论文：四株特境真菌新活性次生代谢产物的研究无明显细胞毒活性，其I C s o 均大于3 毗M 。另外，化合物3 8 在1 0 。5g m L 浓度下都具有较强的对C o nA ( 刀豆蛋白) 所诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖的抑制作用；在1 0 一g m L 的低浓度下，只有化合物3 仍然显示了较强的抑制作用( 免疫抑制率8 3 2 ) ，强于阳性对照C s A ( 环孢菌素A ，免疫抑制率8 1 4 ) ，但3 对小鼠正常脾淋巴细胞有一定的毒性。2 。从狗牙根( C y n o d o nd a c t y l o n ) 内生真- 菌A s p e r g i l
10、l u sn i g e ，I F B E 0 4 6 的固体培养物提取液中分离得到了2 0 个化合物，鉴定了其中1 7 个化合物的结构，其中1个是未见报道的新化合物( 1 0 ) ，4 个生物碱类化合物( 1 1 1 4 ) ，1 个香豆素的单体( 1 5 ) ，2 个香豆素的二聚体( 1 6 1 7 ) ，2 个萘并吡喃酮的单体( 1 8 1 9 ) ，7 个萘并吡喃酮的二聚体( 2 0 2 6 ) 。其中有3 个香豆素和9 个萘并吡喃酮类化合物( 1 8 2 6 ) ，提示香豆素和萘并吡喃酮类化合物可能是该植物内生真菌的特征次生代谢产物。另外，我们对含量较多的化合物( 1 1 1 2 、
11、1 4 和1 6 2 4 ) 进行了初步的免疫抑制活性研究。结果表明在1 0 。5g m L 浓度下这些化合物都表现出了一定的对C o nA 所诱导的脾淋巴细胞增殖的免疫抑制活性；在1 0 。6g m L 的低浓度下，只有化合物1 8 仍然显示了一定的免疫抑制活性，且对正常脾淋巴细胞没有任何毒性。3 从墨西哥湾海泥中分离得到的一株海洋真菌A s p e r g i l l u sf u m i g a t u sI F B E 0 5 0 的液体发酵物中分离得到1 0 个化合物，鉴定了其中7 个化合物的结构，均为比较常见的真菌次生代谢产物。4 从大刀螳螂肠道中分离得到的一株共生真菌D a l d i n i ae s c h s c h o l z i iI F B T L 0 1 的大规模液体发酵物
