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1、华中科技人学I , j 济医学院博 万 学位论文缩略词表缩略词英文全称中文全称MP 丁MMP SBYHW DMP TPC y t o cAI FA p a f lBBBECM线粒体通透性转变基质金属蛋白酶补阳还五汤线粒体通透性转变孔细胞色素c凋亡诱导因子凋亡蛋白酶激活因子 1血脑屏障细胞外基质伊文斯蓝急性脑梗塞基质金属蛋白酶抑制剂大脑中动脉闭塞聚A D P 核塘多聚酶半肤氨酸蛋白酚2 , 3 , 5 一 三苯基氯化四氮IIIEBAlTI MPM CAOPARPC a s p a s eTTCTUNELROSTMRMANTVDACm i t o c h o n d r i a l p e n n
2、 e a b l i t y t r a n s i t i o nm a t r i x m e t a l l p r o t e i n a s e sB u y a n g H u a n w u D e c o c t i o nm i t o c h o n d r i a l p e n n e a b l i t y t r a n s i t i o n p o r ec y t o c h r o m e cA p o p t o s i s i n d u c i n g f a c t o rA p o p t o s i s p r o t e a s e a c t
3、 i v a t e d f a c t o r lb l o o d - b r a i n b a rri e re x t r a c e l l u l a r ma t r i xE v a n s B l u ea c u t e i n f a r c t i o nt i s s u e i n h i b i t o r o f m e t a l l o p r o t e i n a s em i d d l e c e r e b r a l a r t e ry o c c l u s i o np o l y ( A D P - r ib o s e ) p o l
4、 y m e r a s ec y s t e i n e - c o n t a i n i n g a s p a r t a t e - s p e c i f i c p r o t e a s e2 , 3 , 5 - T r ip h e n y l t e t r a z o l i u m c h l o r i d et e r m i n a l d e o x y n u c l e o t i d y l t r a n s f e r a s e ( T d T ) - m e d i a t e dd e o x y u i d i n e t r i p h o
5、s p h a t e - b i o t i n n i c k e n d l a b e l l i n gr e a c t i v e o x y g e n s p e c i e st e t r a m e t h y l r h o d a m i n e m e t h y l e s t e ra d e n i n e n u c l e o t i d e t r a n s l o c a t o rv o l t a g e d e p e n d e n t a n i o n c h a n n e l缺口 末端标记技术活性氧四甲基若丹明甲西 旨腺昔酸易位子电
6、压依赖性阴离子通道华中科技人学同济医学院博 学位论文B Y H WD对脑缺血再灌注损伤的保护作用博士研究生:王 新 高博士生导师:童 曹 塘教授孙 圣 刚教授华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科中 文 摘 要第一部分: 补阳还五汤对大鼠脑缺血一 再灌注损伤的作用 户 a 、胃 角方法结果结论恤察 补 阳 还 五 汤 对 大 鼠 脑 缺 血 一 再 灌 注 损 伤 的 作 用 。 5 6只 S D大鼠 随机分为4组: 假手术组甲 ,n = 1 4 ) ; 模型对照组( C ,n = 1 4 ) ; 补阳还五汤1 组( B l , n = 1 4 ) ; 补阳还五汤2 组( B 2 , n
7、= 1 4 ) .线栓法制作大鼠脑缺血一 再灌注模型， 再灌注4 8 小时后观察大鼠神经功能缺损评分情况，T T C染色测量脑梗塞体积，干湿重法测量缺血侧脑含水量，常规H E染色观察病理变化。脑缺血一 再灌注4 8 小时， 补阳还五汤B 1 , B 2 组大鼠 神经功能缺损评分明显高于对照组 ( p 0 .0 5 ) .补阳还五汤对大鼠脑缺血 _一 再灌注损伤具有保护作用。关键词 补阳还五汤:脑缺血一 再灌注损伤;神经功能缺损;大鼠 砂 一华中科技大学同济医学院1.A 学位论文第二部分:补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠皮质神经细胞凋亡的影响/ ， 一 丈目 角 ii f 究 补 阳 还 五 汤 对
8、 脑 缺 血 再 灌 注 大 鼠 皮 质 神 经 细 胞 凋 亡 的 影 响 方法 3 6 只S D大鼠 随机分为3 组:( 1 ) 假手术组( P ,n = 1 2 ) ; ( 2 ) 模型对照组( C ,n = 1 2 ) ; ( 3 ) 补阳还五汤组( B ,n = 1 2 ) 。 线栓法制作大鼠 脑缺血再灌注模型，脑缺血一 再灌注 4 8小时后 T T C染色计算脑梗塞体积，T U N E L染色检测神经细胞凋亡， 免疫组化方法检测缺血侧皮质B c l - 2 / B a x的表达，电镜观察线粒体的变化。结果 脑缺血再灌注后缺血侧皮质神经细胞凋亡增多，同时 B c l - 2表达减少，
9、B a x 表达增多，B c l - 2 / B a x比值下降，线粒体肿胀且大多破裂。补阳还五汤干预后，细胞凋亡减少，脑梗塞体积减小，B c l - 2 / B a x比值上升，线粒体肿胀减轻。结论 补阳还五汤可能通过抑制神经细胞凋亡而减小脑梗塞体积，其机制可能是通过上调B c l - 2 / B a x比值， 保护线粒体， 防止发生线粒体通透性转变。关键词 脑缺血再灌注损伤;补阳还五汤;细胞凋亡; B c l - 2 / B a x ;线粒体 通 透 性 ” 变 M PT ) 扮一丫第三部分:脑缺血再灌注大鼠 缺血脑组织MMP - 9 的表达一百的 研究大鼠 脑缺血再灌注不同时期缺血脑组织
10、M M P - 9 的表达情况。/ 、 ( 方 法6 0 只大鼠 随机分为2 大组:( 1 ) 假手术组( n = 1 2 ) ; ( 2 ) 实验组( n = 4 8 ) .实验组再进一步分为以下 4组:脑缺血 9 0 m i n再灌注 G h;脑华中科技人学同济rF学院博 卜 学位论文缺血9 0 m i n 再灌注1 2 h ; 脑缺血9 0 m i n 再灌注2 4 h ; 脑缺血9 0 m i n再灌注4 8 h ， 每组1 2 只大鼠。线栓法制作大鼠 脑缺血再灌注模型，分别于脑缺血一 再灌注后不同时期取缺血脑组织测E v a n s B lu e 含量以反映血脑屏障的破坏情况，免疫组
11、化染色观察MMP - 9 的表达部位，W e s t e rn B l o t 检测缺血 脑组织M M P - 9 的蛋 .白 表达 情况， R T - P C R 检测缺血脑组织MMP - 9 m R N A的基因转录情况。结果 脑缺血9 0 m i n 再灌注后， 随灌注时间的延长缺血侧脑组织E B含量逐渐增高; MMP - 9 主要分布于血管内皮细胞，胶质细胞。随再灌注时间的延长， MM P - 9 的基因转录水平及蛋白表达水平均逐渐升高，至4 8 小日 寸 达高峰。结论 脑缺血 9 0 m i n再灌注后， 随灌注时间的延长血脑屏障的破坏逐渐加重，其机制可能与MMP - 9 的转录与表
12、达升高有关。关键词 脑缺血再灌注损伤 :血脑屏障;基质金属蛋白酶一 9 ;大鼠 fi 一第四部分:补阳还五汤对脑缺血一 再灌注大鼠血脑屏障保护作用的实验研究脚 观 察 补 阳 还 五 汤 对 脑 缺 血 一 再 灌 注 大 鼠 血 脑 屏 障 的 作 用 并 探 讨 其 作 用机制。方法 4 8只S D大鼠 随 机分为3组: 假手术组( P ,n = 1 6 ) ; 模型对照组( C ,n = 1 6 ) ; 补阳 还五 汤组 ( B , n = 1 6 ) 。 线栓法 制作大鼠 脑 缺血一 再 灌注模型，再灌注4 8 小时后干湿重法测定缺血脑组织含水量，经股静脉注射伊文思蓝( E B ) 观
13、察血脑屏障的通透性，取缺血脑组织提取总R N A和蛋白质分别应用 R T - P C R和We s t e rn B l o t 技术检测基质金属了JI，、华中科技人学同济医学院博 学位论文蛋白酶- 9 ( MM P - 9 )的转录及表达情况，同时电镜观察血脑屏障的变化。结果 脑缺血一 再灌注 4 8小时，模型对照组缺血侧脑含水量明显升高，E B含量也明显增加，电镜所示B B B破坏严重， MMP - 9的转录与表达也较假手术组显著增加;补阳还五汤能显著减轻脑含水量，缺血侧E B 含量较对照组也明 显降低 ( p 0 .0 5 ) .T a b l e 1 E f f e c t s o f
14、 B Y H WD o n n e u r o l o g i c a l s c o r e o f c e r e b r a l i s c h e m i a a n dr e p e r f u s i o n r a t s 浅 m e a n t s t a n d a r d d e v i a t i o n )n e u r o l o g i c a l s c o r e 一 一 退 里 理 一 生 一P r e o p e r a t i o n p o s t o p e r a ti o nP 1 4 1 7 . 9 0 士0 . 3 5 1 7 . 1 8 士0
15、 . 6 3C 1 4 1 7 . 8 3 士0 . 2 2 1 0 . 3 3 士1 . 0 5B1 1 4 1 7 . 8 5 士0 . 2 7 1 2 . 7 5 士1 . 6 1#B 2 1 4 1 7 . 9 0 士0 . 3 4 1 3 . 1 0 士2 . 0 2# *华中科技人 学同 济医学院博 一 学位论文肢体瘫痪，即五分之阳丧失。服用本方后患侧肢体功能恢复， 使丧失的五分元阳得以补还，故本方得名补阳还五汤。该方剂组成是生黄茂四两，当归尾二钱，赤芍药一钱半，地龙、川芍、桃仁、红花个一钱，水煎服。方中重用黄芭，大补脾胃 之元气，令气旺血行，癖去络通，为君药。当归尾长于活血，具有
16、化7)YA 而不伤血之妙，是为臣药。川芍、赤芍、桃仁、红花助当 归尾活血去1s t ， 地龙通经活络， 均为佐药。 本方的配伍特点是大量补气与少量活血药相配，使气旺则血行，活血而不伤正，共奏补气活血通络之功。本方是体现王清任所创气虚血癖理论的代表方剂，常用于中风后的治疗，以半身不遂，口眼歪斜，苔白脉缓或脉细弱无力为证治要点。现代医家根据中药药理研究的成果加大了方中活血药物的剂量， 或联用其它活血药如水蛙I月 一参等，应用于脑梗塞急性期，也取得了确切的效果。复习文献， B Y H WD治疗脑梗塞的药理基础包括，( I )降低血液乳度( 血液流变学) ， 抑制血栓形成， 促进血栓溶解 ( 血小板活化因 子P A F 、纤维蛋白 原、 D 一 二聚体) ; ( 2 ) 扩张脑血管( E T I C G R P ) , 增加脑血流量，改善微循环红细胞钠泵) ;( 3 ) 减轻0 2 一 和脂质过氧化物 ( L P O ) 对血管内皮细胞的 损伤，
