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1、重庆医科大学硕士学位论文T淋巴细胞CD40L在川崎病发病机制中的作用研究姓名：王敏申请学位级别：硕士专业：儿科学（儿童临床免疫）指导教师：蒋利萍2003.5.1重庆医科大学硕士研究生论文英文缩写K DC D 4 0 Ls C D 4 0 LI GA S PP B M CP B SP M AF C ME s c l e e t i nI C A M 1V C A M 1s E s c l e c t i ns I C A M 1 删P sM M P 9T I M 田E L I S AI LT N FM c P 1英文缩写一览表英文全称K a w a s a k id i s e a s eC D
2、 4 0l i g a n dS o l u b l eC D 4 0l i g a n dI n t r a v e n o u si m m u n o g l o b u l i nA s p i r i nP e r i p h e r a lb l o o dm o n o n u c l e a rc e i l sP h o s p h a t eb u f f e rs o l u t i o nP h o r b o l1 2 一m y r i s t a t e1 3 - a c e t a t el o n o m y c i nF l o wc y t o m e t
3、r yI n t e r c e U u l a ra d h e s i o nm o l e c u l eV a s c u l a rc e l la d h e s i o nm o l e c u l eS o l u b l eE s e l e c t i nS o l u b l eI C A M 1M a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e sM a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e9T i s s u ei n h i b i t o ro f m e t a l l o p r
4、 o t e i n a s eE n z y m el i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a yI n t e r l e u k i nT u m o rn e c r o s i sf a c t o rM o n o c y t ec h e m o t a c t i cp r o t e i n - 1中文译名川崎病C D 4 0 配体可溶性C D 4 0 配体静脉注射免疫球蛋白阿司匹林外周血单个核细胞磷酸盐缓冲液佛波酯离子酶素流式细胞仪E 选择素细胞间粘附分子1血管细胞粘附分子1可溶性E 选择素可溶性细胞闻粘附分子1基质金属蛋白酶基质
5、金属蛋白酶9组织金属蛋白酶抑制因子酶联免疫吸附实验白细胞介素肿瘤坏死因子单核细胞趋化蛋白1重庆医科大学硕士研究生论文G M C S F1 1 1 1T h 2R A N T E SS P ET S S T _ 1T M BG r a n u l o c y t e - m a c r o p h a g ec o l o n y - s t i m u l a t i n gf a c t o rT h e l p e rc e l l1T h e l p e rc e l l2R e g u l a t e do na c t i v a t i o nn o r m a lT - c e
6、l le x p r e s s e da n ds e c r e t e dS t r e p t o c o c c a lp y r o g e n i ce x o t o x i nT o x i cs h o c ks y n d r o m et o x i n1T e t r a m e t h y l b e n z i d i n e2粒细胞巨噬细胞集落刺激因子I 型辅助性T 细胞I I 型辅助性T 细胞调节活化正常T 细胞表达和分泌因子链球菌致热外毒素毒性休克综合征毒素1四甲基联苯胺T 淋巴细胞C I ) 4 0 L 在川崎病发病机制中的作用研究摘要I 背景：川崎病(
7、1 ) ，是一种儿童较常见的血管炎综合征，由于| 在病程中、后期可发生冠状动脉损害( C A L ) ，使其成为儿童后天性心脏病最常见的原因。本病的病因和发病机制尚不完全清楚。国内外普遍认为，T 淋巴细胞异常活化是川崎病免疫激活导致血管免疫损伤的始动环节和关键步骤。在急性期( 病程1 0 天内) 使用静脉注射免疫球蛋白( I V I G ) 能有效预防C A L 发生，也提示急性期免疫紊乱在川崎病C A L 发生中起重要作用。新近研究表明，儿童川崎病是成人冠状动脉粥样硬化的新型危险因素。基础和临床研究发现，T 淋巴细胞C D 4 0配体( C D 4 0 L ) 通过与多种靶细胞上C D 4
8、0 交联，在炎症反应中发挥重要作用，也在成人冠状动脉粥样硬化的发生发展中起核心作用。因此，本文研究T 淋巴细胞C D 4 0 L 在川崎病急性期血管炎的发病及冠状 、 动脉病变中的作用。y目的：1 观察急性期( I v I G 治疗前) 川崎病患儿T 淋巴细胞表面C D 4 0 L 表达水平，及W I G 治疗后C D 4 0 L 的变化，探讨T 淋巴细胞C D 4 0 L 在急性期川崎病血管炎及冠状动脉病变发生中的可能作用。2 观察可溶性E 选择素( s E s e l e c t i n ) 、可溶性细胞间粘附分子1( s l C A M - 1 ) 、基质金属蛋白酶9 ( M M P 9
9、 ) 在I V I G 治疗前、后川崎病患儿血浆中的变化，探明血浆中s E s e l e c t i n 、s I C A M 1 、M M P 9 是否可作为反映川崎病血管炎和预测冠状动脉病变的指标。重壁堕型查兰堡主! 鎏竺丝兰 3 分析急性期川崎病患儿T 淋巴细胞C D 4 0 L 与血浆中s E s e l c c t i n 、s l C A M - 1 、M M P 9 的关系，初步探寻T 淋巴细胞C D 4 0 L在急性期川崎病血管炎发病机制中的作用。方法：1 用流式细胞术双标法，检测2 0 例急性期及I V I G 治疗 I 后H 崎病患儿，1 9 例正常儿童T 淋巴细胞C D
10、 4 0 L 表达的阳性细胞率及平均荧光强度。2 用E L I S A 法，检测2 5 例( 其中2 0 例同1 ) 急性期及I V I G 治疗后川崎病患儿，1 9 例正常儿童血浆s E s d e c t i n 、s I C A M - 1 、M M P 9的水平。3 将急性期川崎病T 淋巴细胞C D 4 0 L 表达水平与血浆中s E s c l c c t i n 、s l C A M 1 、M M P 9 的水平作相关分析。结果：1 急性期川崎病组T 淋巴细胞表达C D 4 0 L 阳性细胞率( 2 7 9 1 1 6 8 8 ) 及平均荧光强度( 1 1 7 4 8 3 5 )
11、明显高于I V I G 治疗后组( 分别为2 3 0 9 1 6 2 2 ，P 0 0 5 ) C o n e l u s i o n s ：1T h ee x p r e s s i o no fC D 4 0 Lo nTc e l li si n c r e a s e da n dp r o l o n g e di nt h ea c u t ep h a s eo fK D ，i tm a yp r o b a b l yp l a yar o l ei nt h ep a t h o g e n e s i so f v a s c u l i t i sa n dc o r o
12、n a r ya r t e r yl e s i o n so f K D 2T h ep l a s m al e v e l so fs E - s e l e c t i n ，s l C A M - 1a n dM M P 9m a yb eu s e dt or e f l e c tt h ed e g r e eo fv a s c u l i t i so f K D K E YW O R D S ：K a w a s a k id i s e a s e ，Tc e l l ，C D 4 0 L ，s E s e l e c t i n ，9重庆医科大学硕士研究生论文第一部
13、分川崎病T 淋巴细胞C D 4 0 L 表达水平1 前言川崎病( I ( D ) 又名皮肤粘膜淋巴结综合征，是一种儿童较常见的血管炎综合征，病因未明，发病率逐年增高，其主要病理改变为急性全身性中、小动脉炎，最严重的危害是中、后期发生的冠状动脉损害，以冠状动脉瘤常见。据统计，病程l O 天内未经及时治疗，冠状动脉病变发生率约2 0 “。目前，川崎病已取代风湿热成为儿童后天性心脏病最常见的原因“1 。川崎病发病机制尚不完全清楚，国内外普遍认为其可能与细菌或病毒毒素以超抗原介导引发免疫系统的异常激活，或细菌的热休克蛋白H S P 6 5 模拟宿主自身抗原H S P 6 3 活化自身免疫有关。1 。本
14、实验室也曾证明川崎病患儿血清I L 一1 、T N F a 、I L _ 6 等水平明显升高，外周血单个核细胞体外产生I L - 6 等水平升高及凋亡延迟吨“。以上学说均表明T 淋巴细胞异常活化是川崎病免疫激活导致血管免疫损伤的始动环节和关键步骤。静脉注射免疫球蛋白( I V I G ) 联合阿司匹林( A S P ) 是现今治疗川崎病的标准疗法，病程1 0 天以内( 急性期内) 使用I V I G 才能有效预防冠状动脉病变的发生4 ”( 发生率约3 8 。”) ，由此可见急性期免疫紊乱是川崎病冠状动脉病变发生的关键。免疫组化发现急性期川崎病患儿皮下小血管炎处以T 淋巴细胞和巨噬细胞浸润为主o
15、 ，且冠状动脉瘤内壁以T 淋巴细胞浸润为主，提示T 淋巴细胞在川崎病血管炎，尤其是冠状动脉病交中可能起重要作用“。C D 4 0 L 是T 淋巴细胞上重要的表面分子，它与多种血细胞、组织中结构细胞上表达的相应受体C D 4 0 交联，在免疫系统活化及炎症反应中起重要作用“”。新近研究表明，C D 4 0 L C D 4 0 相互作用在冠状动脉粥样硬化的发生发展中起核心作用“，儿童川崎病可能是成人期发生冠状动脉粥样硬1 0重庆医科大学硕士研究生论文化的危险因素之一“4 。“：。因此，本研究拟通过观察川崎病患儿急性期T 淋巴细胞C D 4 0 L 表达及I V I G + A S P 治疗后C D
16、 4 0 L 的变化，探讨T 淋巴细胞C D 4 0 L 在急性期川崎病血管炎及冠状动脉病变发生中的可能机制。2 材料和方法2 1 研究对象I V I G 治疗前川崎病组( 急性期川崎病组) ：急性期K D 患儿2 0 例，男1 I 例，女9 例，男：女= 1 2 ：l ，年龄1 0 月一5 岁，平均年龄2 岁8 月，病程4 一1 0 天，平均病程6 天，均符合第三次国际川崎病研讨会( 1 9 8 8 年1 2 月修订) 提出的诊断标准。采血前2 周内未使用I V I G 及糖皮质激素。I V I G 治疗后川崎病组：研究对象同 【D 治疗前组，给予l g k g I V I G 联合阿司匹林5 0 r a g ( k g d ) 治疗，I V I G 输注后2 4 7 2 小时采血。正常对照组：我院门诊体检的健康同龄儿童1 9 例，男1 1 例，女8 例，男：女= 1 3 8 ：l ，年龄1 1 月一5 岁，平均年龄2 岁1 月。2 2 实验器材及试剂
