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1、分类号：密级：学位类别：R 7 3 0 5 4科学学位口专业学位团学校代码：10062 学号：2 0 1 0 6 0 2 2 8 8学科门类：医学 又肄酱科文学硕士学位论文M A S T E R SD I S S E R T A T I O N论文题目：I L 1 5 基因治疗小鼠腹腔转移癌的机制研究TIT L ET h em e c h a n i s mo fI L 一1 5g e n et h e r a p yo fp e r i t o n e a lc a n c e rm e t a s t a s e si nm i c e一级学科：临床医学二级学科：外科学普外论文作者：马瑞鹏
2、指导教师：章志翔教授导师组成员：何向辉教授天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明I MI I I fI l iIIIfI I I f f iHi l l l iI If Y 2 3 9 6 5 8 5本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：考函啤豆马日期弛少年岁月k 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论
3、文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。本论文属于保密口，在年解密后适用本授权书。不保密 才f( 请在相对应的方框内打“”)学位论文作者签名：导师签名：期哆年岁月钿日 期：阳；年霸如天津医科大学硕士学位论文中文摘要研究目的利用小鼠结肠癌腹腔转移模型，应用白细胞介素1 5 ( I n t e r l e u k i n 1 5 ，I L 1 5 )表达质粒p H i 2 s p l L l 5 C M V - T A T ( L 3 ) 对小鼠结肠癌腹
4、腔转移进行基因治疗，观察其在控制肿瘤生长、延长患癌动物生存期、延缓肿瘤转移的作用，分析腹腔免疫细胞变化，探讨I L 1 5 抑制转移瘤生长的可能机制，为I L 15 为基础的肿瘤免疫基因治疗提供实验基础。研究方法本实验首先通过腹腔注射小鼠结肠癌细胞C T 2 6 ，建立小鼠结肠癌腹腔转移癌的模型，然后将表达绿色荧光蛋白载体p H i 2 E G F P C M V - T A T ( L 6 ) 注射于已建模小鼠腹腔，进行体内转染。采用小动物活体成像技术，观察绿色荧光蛋白表达，评估转染情况与目的基因的表达效率。进一步利用小鼠结肠癌腹腔转移癌模型，腹腔注射表达I L 1 5 的质粒p H i 2
5、 一s p l L15 一C M V - T A T ( L 3 ) 为治疗组；腹腔注射空载质粒p H i 2 一C M V - T A T - M C S( M 7 ) 、腹腔注射P B S 、腹腔不注射治疗作为对照组；无肿瘤组作为空白组。评估不同治疗方式下对荷瘤小鼠肿瘤大小、体重、腹水形成、生存期的影响。通过流式细胞术，分析不同治疗组荷瘤小鼠腹水中C D 4 、C D 8 、C D 2 5 、N K G 2 D 、C D l l b的表达。研究结果1 荷瘤小鼠腹腔注射能表达绿色荧光蛋白质粒L 6 ，活体成像显示小鼠腹腔有绿色荧光蛋白表达。2 月中瘤对照组( M 7 组、P B S 组、肿瘤
6、未治疗组) 7 周内荷瘤小鼠大部分死亡，期间体重增加迅速，剖检均可见腹水和腹腔内广泛肿瘤种植；治疗组( L 3 组) 中多数小鼠生存时间延长，体重增加缓慢。3 治疗组( L 3 组) 荷瘤小鼠的生存期延长，与其它各组相比较，差异有统计学意义( 尸 0 0 5 ) 。治疗组( L 3 组) C D l l b + 巨噬细胞绝对值分别在第1 周与第2 周与对照组( M 7组、P B S 组、肿瘤未治疗组) 、空白组( 无肿瘤组) 差异均有统计学差异( P 0 0 5 ) T h ed i f f e r e n c eb e t w e e nt h eC D 8 + C D 4 + c e l
7、l sr a t i oo ft h et r e a t m e n tg r o u p ( L 3g r o u p ) a n dt h a to ft h ec o n t r o lg r o u p s ( M 7g r o u p ，P B Sg r o u p ，t u m o ru n t r e a t e dg r o u p )a n db l a n kg r o u p ( t u m o rg r o u p ) w a sn o ts t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( P 0 0 5 ) i nt h
8、 ef i r s tw e e ka n dt h es e c e n dw e e k I nt h ef i r s tw e e k t h ed i f f e r e n c eb e t w e e nt h en u m b e ro fC D 2 5 + C D 4 + Tc e l l so ft h et r e a t m e n tg r o u p ( L 3g r o u p ) a n dt h a to ft h ec o n t r o lg r o u p s ( M 7g r o u p ，P B Sg r o u p ，t u m o ru n t
9、r e a t e dg r o u p ) a n db l a n kc o n t r o lg r o u p ( n ot u m o rg r o u p ) w a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t 0 0 5 ) T h ed i f f e r e n c eb e t w e e nt h en u m b e ro fC D1lb + m a c r o p h a g e so ft h et r e a t m e n tg r o u p ( L 3g r o u p ) a n dt h a to ft
10、 h ec o n t r o lg r o u p s ( M 7g r o u p ，P B Sg r o u p ，t h et u m o ru n t r e a t e dg r o u p ) a n db l a n kc o n t r o lg r o u p ( n ot u m o rg r o u p ) w a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( P 0 0 5 ) i nt h ef i r s tw e e ka n dt h es e c o n dw e e k T h ed i f f e r
11、 e n c eb e t w e e nt h et o t a ln u m b e ro fp e r i t o n e a lc e l l so ft h et r e a t m e n tg r o u p ( L 3g r o u p ) a n dt h a to ft h ec o n t r o lg r o u p s ( M 7g r o u p ，P B Sg r o u p ，t u m o ru n t r e a t e dg r o u p ) a n dt h eb l a n kc o n t r o lg r o u p ( n ot u m o r
12、g r o u p ) w a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( P 0 0 5 ) b e t w e e nt h ef i r s tw e e ka n dt h es e c o n dw e e k C o n e l u s i o n ：1 I n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o no fp l a s m i dv e c t o rC a nr e s u l ti nv i v og e n et r a n s f e c t i o na n de x
13、p r e s st h eg e n e 2 T h ep h i 2 一s p l L l5 一C M V - T A T ( L 3 ) g e n et h e r a p yf o rt h et r e a t m e n to ft h ep e r i t o n e a lc a n c e rm e t a s t a s e si nm i c ec o u l ds i g n i f i c a n t l yd e l a yt h et u m o rg r o w t hr a t ea n de x t e n dt h es u r v i v a lo f
14、t u m o r - b e a r i n gm i c e 3 T h ep H i 2 。s p I L15 一C M V T A T ( L 3 ) g e n et h e r a p yc o u l ds t r e n g t h e nt h ea b i l i t yo ft h et u m o r - b e a r i n gm i c et ok i l lt u m o rc e l l s T h em e c h a n i s mi n c l u d ei n h i b i t i n gt h ei n f i l t r a t i o no f
15、C D 4 + C D 2 5 + Tc e l l sa n dp r o m o t i n gt h ei n f i l t r a t i o no fC D1lb +m a c r o p h a g e s ，t h eC D 4 + h e l p e rTc e l l sa n dC D 8 + c y t o t o x i cTc e l l si nt h ea b d o m i n a lV I天津医科大学硕士学位论文c a v i t y 4 T h ep H i 2 s p i Ll5 一C M V - T A T ( L 3 ) g e n et h e r
16、 a p yd o n ti n c r e a s et h ei n f i l t r a t i o no ft h eN K G 2 D + N Kc e l l s ，w h i c hs u g g e s tt h a ti n t h i sm o d e l ，I L 15d on o te n h a n c et u m o rr e s i s t a n c eb yi n c r e a s i n gt h en u m b e ro fN K G 2 D + N Kc e l l s T h i se x p e r i m e n tp r o v i d e st h eb a s i st oi n v e s t i g a t et h em e c h a n i s mo fI L 一15t u m o ri m m u n o g e n et h e r a p y ，a n dl a yas o l i df o u n d
