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1、超净台内应否有酒精灯？大家都来说说看（多图） 转贴 我所在的实验室有用于培养细胞的超净台，内置酒精灯一个。老师传授授说在打开培养瓶或培养液之前要用酒精灯的火焰快速的烧一下，目的是消毒，减少污染。自己很怀疑这样做的有效程度，因为瞬间的火焰不可能将瓶口的温度升高很多，又如何达到消毒的目的呢？在网上搜索后找到一些资料，认为不应在超净台内使用火焰。现将其放到丁香园上供大家参考，希望有经验的同学给个说法，超净台内到底应不应该有酒精灯。Open flames are not required in the near microbe-free environment of a biological safe
2、ty cabinet. On an open bench, flaming the neck of a culture vessel will create an upward air current which prevents microorganisms from falling into the tube or flask. An open flame in a BSC, however, creates turbulence which disrupts the pattern of HEPA-filtered air supplied to the work surface. Wh
3、en deemed absolutely necessary, touch-plate microburners equipped with a pilot light to provide a flame on demand may be used. Internal cabinet air disturbance and heat buildup will be minimized. The burner must be turned off when work is completed. Small electric “furnaces“ are available for decont
4、aminating bacteriological loops and needles and are preferable to an open flame inside the BSC. Disposable sterile loops can also be used. 摘自： http:/www.cdc.gov/od/ohs/biosfty/bsc/BSC2000sec5.htm事实上使用酒精灯会造成空气对流，从而带起超净台面上的灰尘，反而增加污染的机会。更何况还增加了火灾的隐患。摘自： http:/ flaming of lips of tubes and flasks must A
5、LWAYS be done whenever culture liquid is to be poured from a container (e.g., pouring plates). Flaming should be routinely done when caps are removed from tubes during transfer of cultures. The purpose of flaming is not to sterilize, but to warm the tube and create warm air convection currents up an
6、d away from the opening. This “umbrella“ of warm, rising air will help to prevent the entrance of dust particles upon which contaminating bacteria reside. 摘自： http:/structbio.vanderbilt.edu/chazin/wisdom/labpro/sterile.html受到加分的鼓励，把CDC这段生物安全柜的文章翻译了。错误之处，万望指正，谢谢。译文如下：在生物安全柜几乎没有微生物的环境中，明火是不需要的。在开放的操作台
7、上（BSC之外 ) ， 通过灼烧培养瓶口，可以创造一个向上的气流，预防携带微生物的尘埃坠落入试管或培养瓶。而在一个生物安全柜中，明火产生扰动气流，破坏了供向操作台面的洁净空气的流向。如果真的确实需要明火，可以使用装备控制火焰大小的微型灯具。这样，柜内空气扰动和加热效应会减少到最低。需要火焰的操作结束后，必须关闭灯具。另外，相对于在生物安全柜内使用明火，更好的选择是使用电气化的“熔炉”来消毒接种环和接种针。一次性的无菌环也是一个选择。1、快速过火是不可能杀灭细菌的，过火的目的是为了固定住细菌防止扩散，火焰的温度能够使气流形成负压，在酒精灯周围10cm处形成一个无菌区，操作在此范围内进行为好。2、
8、一些器械，包括镊子，剪刀，接种环，滴管尖端都可以采取火焰灼烤的灭菌方法。但是要烧烤足够长的时间，并且接触组织时要充分冷却。3、在正常情况下，快速操作比在酒精灯附近磨蹭无菌效率更高 我认为超净工作台内应该放酒精灯。首先， 超净台内的净化空气是从上面往下吹，它的热量可以形成对流，可以在局部形成无菌区预防微生物感染。其次，酒精灯的消毒作用也是不能忽视的：做实验时将培养瓶内的培养液或其它液体倒掉时，瓶口难免会有一些细胞，可以在酒精灯外焰上过几下，产生的高温可以消灭细胞，避免细胞交叉污染；装培养液和各种液体的瓶子口受污染的几率也是很大的，在火焰上消一下毒也能预防污染啊； 超净台内的用过的吸管进行消毒也是
9、必要的，因为紫外线不能100% 的消灭微生物。 再一个，我们老师在加拿大读博士后一直都是这样做的，应该没问题吧！这只是我的个人想法，不一定对！也请高手发表一下意见，大家讨论一下吗！一般来说这种固定可能通过这样两种途径：1、气流封闭，火焰产生热负压，使外界气流无法进入冷的容器内。2、火焰的瞬时高温能使灰尘（上面附着细菌）粘附在瓶口处，而不会进入容器内，这有点类似作细菌染色时的烤片。一般瓶口处很容易积留灰尘，在打开盖子的瞬间会导致灰尘飞出。超净台内的洁净气流是单向流动的，以此来保护操作对象不被超净台外面的空气污染。而酒精灯产生的火焰却干扰了正常的气流，有可能使含有灰尘颗粒的空气掺入超净台内。我们试
10、验室采用美国势管理，在美国CELL CULTURE 是看不到酒精灯的，我们实验室也禁止使用，被发现使用是永远不许进来做试验的。他们这样管理是有他们道理的，实验室到现在为止没有一例细胞培养有污染的。各位也谈论了很多酒精灯的利弊，但归根揭底弊是要远远大于利的，所以应该禁止酒精灯的使用！我相信随着我们国家的实验室条件的增强，酒精灯会绝迹的。转而更强调无菌操作，这才是细胞培养的根本。我觉得不能单纯的看国外用不用酒精灯，就机械的去学习。因为国外细胞室是很干净的，洁净度很高，尘粒很少，净化台质量又好，有独立的通风系统而且细胞室内是正压，空气是只能从细胞室往外跑，而外面的空气进不来，他们污染的几率很低，用不
11、着使用酒精灯，而国内，我们自问真正符合标准的细胞室有几个，我们的空气里的灰尘也比国外多得多，同意ryochan 的观点，酒精灯还是有很多好处的，总之，还是不要去掉酒精灯得好。用或不用酒精灯？我们学校2 种科研平台都有，一边是美式标准的实验室，禁止使用酒精灯，不用穿隔离衣不用带口罩帽子；一边是“正统”的无菌室，酒精灯必备还有进入前穿好隔离衣并戴好口罩帽子，强烈的反差，呵呵不过两边的细胞都养得好好得，所以个人觉得没有必要去争论这个东西，看个人习惯和具体地方情况了，反正都能养好细胞我们公司在美国总部的实验室都是用酒精灯的。所以，所谓的美国式实验室不用酒精灯显然是片面的。关于超净台要不要用酒精灯应该具
12、体问题具体分析。比如说，培养的时候需要炙烤，那显然需要酒精灯。如果不需要炙烤，那点酒精灯显然就是多余了。看了大家的讨论，想再说几句：1、美国的细胞培养实验室一般都设在普通的屋子里，我在美国差不多呆过5、6 个实验室，也见过不少其他的实验室，还没有见过细胞培养室单独特殊建造的。相反我发现国内的不少细胞培养室单独按照无尘车间的要求建造。究其原因，可能是因为国内的空气中粉尘比较多，污染的可能大些，所以对培养室的建造上反而下工夫。另外可能是因为国内无尘车间的施工便宜。在无尘车间中培养细胞，毫无疑问会减少污染的机会。但其施工成本，以及维护成本（无尘车间的过滤系统是要定时清洗和更换的，我担心不少的实验室以
13、为造好车间就万事大吉了），还有进出的不便利，是不是值得，有待探讨。2、就我在国外细胞培养实验室和我们公司的细胞培养实验室工作的经验，细胞培养室不需要一个异常洁净的环境。一般来说，地板如果是光滑容易清洗的（地坪漆、大理石、瓷砖均可），墙面使用不会剥落粉尘的油漆，窗户一般不要打开。这样的房间，只要定期（1-2 天）拖地，就足够达到需要的洁净度了，因为真正的洁净环境是在超净台内。3、回到要不要使用酒精灯的问题。首先在超净台内使用酒精灯的目的显然不应该是产生一个无菌的气相， 因为超净台内的气相本来就是无菌的，所以使用酒精灯的目的，就是把有可能在瓶口的细菌杀死。那么只要在瓶口有合适的保护，就不需要了。我
14、们实验室一般使用的培养液瓶在灭菌的时候，都会在盖上包上锡泊纸，使用过程中拿下，用完后又包上。所以我们是不使用酒精灯的。在我看来，使用酒精仍然是从以前超净台技术比较差，或者是从普通场合中的无菌操作（比如普通实验室中一些分子克隆的操作）延袭而来的。在细胞培养的超净台内并不需要。有人提到美国的实验室中也有人使用酒精灯的，我的观察是在美国实验室中使用酒精灯的人往往是年纪比较大的人，或者一些照搬他们技术的人。问题的关键在于火焰消毒的方法和原理。细菌培养中使用的接种环或接种针需要使用火焰以加热到很高的温度，在这个温度下金属的接种环/针会变红，估计在1000 摄氏度左右。多数实验室是使用本生灯来完成这种火焰
15、消毒的。然而鉴于火焰消毒的不利因素，如干扰层流设备（laminar flow hood，即超净台）中的气流，并可能引起火灾，人们设计了无需火焰的电加热设备，开关在地面通过脚踏控制，消毒完后即可关闭。而在哺乳动物细胞培养中，显然没有像接种环/ 针那样需要加热到很高温度的情况。多数常规的操作只是将培养瓶口或镊子在火焰上晃动一两下，难以想象这样的消毒能达到足够高的温度以杀灭微生物。并且这种“任何东西都要烧一烧“的简单思想容易造成一些塑料制品的损害，比如一次性培养瓶/ 皿、移液器等。最近集中在做细胞转染的试验，养了多种细胞，污染也时有发生，在追究其原因的过程中有幸拜读了此topic ，受益非浅，小弟的
16、意见是：1. 在开启培养瓶、皿等lids时用酒精灯烧一下主要目的肯定不是消毒灭菌，因为一时间不够长，二温度不够高，小弟认为烧一下的目的主要还是使容器口的particls黏附在局部，不至于在细胞操作过程中误入容器内；2. 国外实验室大多不用酒精灯，个人认为国外实验室的整体enviroment要比国内好的多，比如空气中尘粒少，人员走动少，入细胞培养室有固定的工作服，hood 的档次和质量也很高，所以基本上可以不用酒精灯；国情不同，做事的方式也应该有所差异，个人意见在国内做试验还是保留酒精灯比较妥当！我们点不点灯都无所谓了，实验楼外墙搞装修，天天台面上跟刚刮过沙尘暴似的，一层土，晕. 细胞室的无菌环境才是关键，其次是操作要熟练迅速，做好防护（口罩，手套）。呆过两个实验室，我们还是在用酒精灯的。从一开始接触的时候就被传授要利用酒精灯制造的小范围无菌环境进行细胞培养操作。一个实验室进细胞室很严格！而另一个就没
