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1、浙江大学实验报告浙江大学实验报告课程名称：生理学实验实验项目：实验三 蛙类坐骨神经动作电位传导速度和不应期的测定实验日期：2016 年 10 月 日（周 ）姓名 学号 班级： 第 组，同组者：实验地点：紫金港生物实验中心 311 目的目的 1、测定蛙类坐骨神经的绝对不应期和相对不应期，并了解其测定原理。 2、测定蛙类坐骨神经兴奋的传导速度并了解其原理。原理原理 1、神经在一次兴奋的过程中，其兴奋性也发生一个周期性的变化，而后才恢复正常。 兴奋性的周期变化，依次包括绝对不应期、相对不应期、超常期和低常期 4 个时期。为了 测定坐骨神经在次兴奋后兴奋性的周期变化，首先要给神经施加一个条件刺激(S1
2、)引起 神经兴奋，然后再用一个测试性刺激(S2)，在前一兴奋过程的不同时相给以刺激，用以检 查神经的兴奋阈值以及所引起的动作电位的幅值，以判定神经兴奋性的变化。当刺激间隔 时间长于 25 ms 时，S1 和 S2 分别所引起动作电位的幅值大小基本相同。随着 S2 距离 S1 逐渐接近，发现 S2 所引起的第二个动作电位幅值开始减小时即为落入相对不应期。再逐 渐使 S2 向 S1 靠近，第二个动作电位的幅值则继续减小。最后可因 S2 落在第一个动作电 位的绝对不应期内而完全消失。 2、神经干受到有效刺激兴奋以后，产生的动作电位以脉冲的形式按一定的速度向远处 扩布传导。不同类型的神经纤维其传导兴奋
3、的速度是各不相同的。总体说来，直径粗的纤 维传导速度快，直径相同的纤维有髓纤维比无髓纤维传导快。蛙类的坐骨神经干属于混合 性神经，其中包含有粗细不等的各种纤维，其直径一般为 3-29um，其中直径最粗的有髓 纤维为 A 类纤维，传导速度在正常室温下大约为 35-40 m/s。测定神经纤维上兴奋的传导速度(v)时，在远离刺激点的不同距离处分别引导其动作 电位，两引导点之间的距离为 s，在两引导点分别引导出的动作电位的时相差为 t。再按照 下面的公式来计算其传导速度：v=s/t。 实验材料实验材料 蛙 常用手术器械 蛙板 任氏液 培养皿 烧杯 神经屏蔽盒 Medlab 生物信号采 集系统 实验流程
4、实验流程剥制神经干标本 调试仪器设置实验参数 神经干动作电位传导速度的测定 神 经干兴奋不应期的测定 实验步骤实验步骤 一、蛙坐骨神经干标本制备 1毁蛙脑脊髓，去躯干上部及内脏和皮肤。沿脊柱正中线至耻骨联合中央将标本分为 两半，并将其放入盛有任氏液的培养皿中。 2游离坐骨神经。坐骨神经下行至帼窝处分为两支：内侧为胫神经，走行表浅；外侧 为腓神经。沿胫、腓神经走向分离至踝部，尽量将神经干标本剥离长一些，要求上自脊神 经发出部位，下沿腓神经与胫神经一直分离到踝关节附近，剪断侧支。尽量将神经干周围的组织剔除干净(剥离时切勿损伤神经干)，结扎坐骨神经干的脊柱端及胫、腓神经的足端， 游离神经干。然后将坐
5、骨神经干标本置于盛有任氏液的培养皿中，稳定兴奋性 5min 二、仪器联接和调试 应用 Q9 三通将刺激输出分成两路，一路用于刺激标本，一路输入 4 通道。打开 Medlab 生物信号采集系统软件，选择通道 1 和通道 2 作为记录信号的通道，通道 3 用于刺 激信号的监视通道。用高阻抗导线将通道输入口与神经屏蔽盒的引导电极相连，用刺激导 线将 Medlab 的刺激信号输出口与神经屏蔽盒的刺激电极相连。将神经屏蔽盒内所有电极 用浸有任氏液的棉球擦净。用镊子夹住已制备好的神经标本的一端,将其放置于电极上（脊 椎端位于刺激电极方向） ，用滤纸片吸去标本上过多的任氏液。 三、不应期测定 1测定参数采样
6、参数刺激器参数显示方式示波器刺激模式自动间隔调节采样间隔20s主周期1s 通道通道 1通道 2波宽0.1msDC/ACACDC幅度顶强度放大器放大器 1放大器 4首间隔20ms 处理名称神经干 AP刺激标记间隔增量-0.1ms 放大倍数200-10005-50截止间隔0.2ms 时间常数0.2s直流延时5-10ms 2坐骨神经绝对不应期的测定：用“自动间隔调节”方式刺激标本。用鼠标点击“开始” “刺激” ，最初可见到相距 20 ms（首间隔）的两个动作电位图形，而且两个图形的幅值是 同样大小的。此后每刺激一次，第二个刺激即按照“间隔”所设定的时间向第一个刺激靠 近一次，从而使第二个动作电位图形
7、向第一个动作电位相应靠近。当发现第二个动作电位 的图形幅值刚开始比第一个减小时，说明第二个刺激落入到第一次兴奋后的相对不应期。 第二个刺激越是靠近第一个刺激，其动作电位的幅值就越小。当第二个动作电位完全消失 时，表明第二个刺激落入到第一次兴奋后的绝对不应期。 3重复以上实验，在相对不应期内增大测试刺激的强度时，缩小的第二个动作电位幅度 可接近第一个的水平。但如果是在绝对不应期内，虽然增大刺激强度，却不能引起神经的第二次兴奋。 四、动作电位的传导速度测定1测定参数采样参数刺激器参数显示方式记忆示波刺激模式主周期刺激采样间隔20s主周期1s 通道通道 1通道 2通道 3波宽0.1ms 放大器放大器
8、 1放大器 2放大器 4幅度大于阈强度DC/ACACACDC间隔10ms 处理名称神经干 APAP 传导速度刺激标记脉冲数1 放大倍数200-1000200-10005-100延时5-10ms 时间常数0.2s0.2s直流周期数连续2用主周期刺激刺激神经干。实时调节刺激器的延迟，使动作电位波形正好出现在显示 屏的适中位置。 3传导速度测定 测出通道 1、通道 2 采样窗之间的时间差：以刺激伪迹到第一个 AP 的时间为 t1 以刺激伪迹到第二个 AP 的时间为 t2，t=t2-t1；两对引导电极之间的距离为 2cm。 V = s/t 注意事项注意事项 1、 免污染、压挤、损伤和用力牵拉神经，不可
9、用金属器械触碰神经干。 2、 在手术操作过程中，应给神经干滴上任氏液，防止表面干燥，以免影响标本的兴奋性。3、 将神经干搭在引导电极上时，应拉直神经干。 4、 尽量减小动作电位的刺激伪迹，以便确定动作电位离开基线的起始点。 实验结果实验结果 1.1. 不应期的测定 （附图及结果） （只要附上刚好出现相对不应期和刚好出现绝对不应期时的图即可）2.2. 动作电位的传导速度 （附图及结果） 分析讨论及心得分析讨论及心得 思考题思考题 1、 什么是绝对不应期和相对不应期？不应期长短有何生理意义？2 2、神经干不应期与单根神经纤维不应期有何不同？ 3、 测定神经干动作电位传导速度时，为何要求两对引导电极的距离越远越好？
