北京信科奥达科技有限公司技术服务

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1、北京信科奥达科技有限公司技术服务北京信科奥达科技有限公司技术服务北京信科奥达科技有限公司简称“信科奥达” ，主营生物技术服务及其配套试剂、耗材、仪器的研发、生产和销售，秉承“专业、求实、开拓、创优”的服务理念，为客户提供专业化的技术服务及解决方案。 信科奥达的产品及服务有：耗材:Fisher 耗材、美国 Crystalgen 产品、SinoAmerican Proteomics 毛细管色谱柱、corning 产品仪器：北京四环仪器厂的冷冻干燥机、美国 BIORAD 公司电泳槽、Fisher 仪器抗体：abcam、Abnova、RD、santa cruz、genetax、cell signali

2、ng试剂 ：自产试剂、荧光定量 PCR 试剂盒、常规生化试剂技术服务包括：荧光定量技术服务 双荧光素酶报告基因检测服务 质谱鉴定技术服务 一、 荧光定量技术服务（一） 项目简介Real Time PCR 法是实时监测解析 PCR 扩增量的方法。因其无需电泳，大大减低了实验污染的机率，且具有快速、可对检测靶基因定量而倍受青睐。实时荧光定量 PCR 避免了传统 PCR 以终产物检测定量产生的偏差，提高实验的重复性。该技术已被广泛用于检测细胞、细菌等 mRNA 表达量的变化；比较不同组织的 mRNA 表达差异；验证基因芯片，siRNA 干扰的实验结果。我们为您提供全套实时荧光定量 PCR 技术及解析

3、服务：您只需提供组织或细胞标本，我们为您完成 RNA 抽提，cDNA 制备，实时定量 PCR，标准曲线制备及数据分析的所有步骤。1、TaqMan 探针方法该技术以美国 ABI 公司为代表。 PCR 扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸片断，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，在TaqMan 探针法的定量 PCR 反应体系中，包括一对 PCR 引物和一条探针。探针只与模板特异性地结合，其结合位点在两条引物之间。探针的 5端标记有报告基团(Reporter, R)，如 FAM、VIC 等，3端标记有荧光淬灭基团(Quencher, Q)，如

4、TAMRA 等。当探针完整的时候，报告基团所发射的荧光能量被淬灭基团吸收，仪器检测不到信号。随着 PCR 的进行，Taq 酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针，其 35外切核酸酶活性就会将探针切断，报告基团远离淬灭基团，其能量不能被吸收，即产生荧光信号（图 4） 。所以，每经过一个 PCR 循环，荧光信号也和目的片段一样，有一个同步指数增长的过程。信号的强度就代表了模板 DNA 的拷贝数。 2、SYBR Green I 嵌合荧光法SYBR Green I 荧光染料技术原理：SYBR Green I 是一种只与 DNA 双链结合的荧光染料（图 2） 。当它与 DNA 双链结合时，发出荧光；从DN

5、A 双链上释放出来时，荧光信号急剧减弱。因此，在一个体系内，其信号强度代表了双链 DNA 分子的数量。SYBR Green 荧光染料法定量 PCR 的基本过程是：1、开始反应，当 SYBR Green 染料与 DNA 双链结合时发出荧光。2、DNA 变性时，SYBR Green 染料释放出来，荧光急剧减少。3、在聚合延伸过程中，引物退火并形成 PCR 产物。4、聚合完成后，SYBR Green 染料与双链产物结合，定量 PCR 系统检测到荧光的净增量加大。 SYBR Green I 荧光染料能与所有的 DNA 双链相结合，对 DNA模板没有选择性，所以特异性不如 TaqMan 探针。要想用荧光

6、染料法得到比较好的定量结果，对 PCR 引物设计的特异性和 PCR 反应的质量要求就比较高。在此前提下，本法是一种成本低廉的选择。 （二） 服务项目1、定性分析PCR 反应结束后的 PCR 产物无需电泳检测，可以通过 Real Time PCR方法，简单快速地对目的基因进行高特异性、高灵敏度的检测，同时闭管操作的实时检测可以有效防止反应产物的污染。本技术可以广泛应用于病毒、病原菌等致病微生物的检测以及各种生物品种的鉴定等。2、绝对定量绝对定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品。使用已知浓度的标准品制作 5 个点以上的标准曲线后，可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量（起

7、始拷贝数）分析。3、相对定量（mRNA 表达量分析）基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因内标同时分别进行定量，然后求出对于参比基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的 mRNA 进行表达量分析。参比基因通常选用 -actin。通过同时对参比基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或 RNA 提取效率的不同等造成的 RNA 量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的 mRNA 表达量进行分析之目的。（三） 服务流程1、客户以电话或邮件形式告知公司要进行的实验基因名称和标本数目；2、公司派专业技术人员与

8、您洽谈实验费用和荧光定量探针设计方案（序列和设计有公司负责） ；3、签订实验技术服务合同，交费用的 50%作为订金（若实验没有结果或结果未达到客户要求，订金不退） ；4、公司合成荧光定量探针、派相关人员取回实验标本；5、进行 RNA 抽提、鉴定、cDNA 合成实验；6、进行实时荧光定量 PCR 实验（每个标本的每个基因均进行 3 倍平行孔实验，保证获得准确、无误差、客观的样品基因扩增数据） ；7、通过统计分析软件计算目的基因的 mRNA 表达数据；8、提供完整的实验报告（实时荧光扩增曲线图、分析数据、实验步骤、试剂仪器） ；9、客户交齐全额费用。（四） 服务要求1、请认真填写 Real Tim

9、e PCR 检侧技术服务委托单；2、请您提供新鲜的且尽量多的材料（各种材料的 RNA 提取量请参照“总 RNA 的提取” ） ，或直接提供纯化好的总 RNA（大于 5g/样品） ；（各种材料的 DNA 提取量请参照“ D NA 的提取” ） ，或直接提供纯化好的 DNA（大于 5g/样品) ；3、如果提供的材料为细胞或组织，应保证材料新鲜：细胞样品：细胞培养至少达 105 以上，培养后细胞请勿做任何处理。组织样品：离体后 30 分钟内入液氮保存，动物组织为 5mg 以上。血液样品：分离白细胞后，-70保存。4、请通过 E-mail 提供已知的全长基因序列；5、请提供尽可能详细的背景资料： DN

10、A/ RNA 来源、丰度等。 （五） 配套服务项目1、引物（探针）设计和筛选： 根据您提供的基因序列，我们为您提供引物（探针）的设计和筛选服务。2、基因组 DNA 提取组织：新鲜样品或-70保存样品，避免反复冻融提供样品量 500mg 以上，剩下归还（无致病性，除脂肪组织、粘液状组织以外） 。 细胞：新鲜样品或-70保存样品，避免反复冻融提供样品量 105 以上。 植物： 提供样品量 500mg 以上（新鲜叶片，或 4保存一周内的叶片） ，剩下归还（新鲜组织，植物干粉得率较低） 。 原核生物：提供样品量 108CFU 或者 0.5 个麦氏单位以上（非致病性，提供菌株和培养基信息；致病性，提供灭

11、活菌液等） 。3、基因组 RNA 提取组织：新鲜样品或-70保存样品，避免反复冻融提供样品量 500mg以上，剩下归还（无致病性，除脂肪组织、粘液状组织以外） 。细胞：新鲜样品或-70保存样品，避免反复冻融提供样品量 105 以上。植物：提供样品量 500mg 以上（要新鲜叶片，或 4保存一周内的叶片） ，剩下归还。原核生物：提供样品量 108CFU 或者 0.5 个麦氏单位以上。 4、质粒构建：试验包括：PCR 产物回收、连接转化、克隆鉴定和质粒提取。5、RT-PCR 反应请您按要求提供试验样本（详见基因组 DNA 提取、基因组 RNA 提取和反转录样品要求） ；或提供纯化好的 DNA 样品

12、 5g。二、 双荧光素酶报告基因检测服务 双荧光素酶报告基因法（luciferase Assay）是检测转录因子与目的基因启动子区 DNA 相互作用转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异顺序结合，这些特异性的序列被称为顺式因子，转录因子的DNA 结合域和顺式因子实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase Assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段，其原理简述如下：（1） 构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如

13、 pGL3-basic 等。（2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染 293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。 （3） 加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光素，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。 实验步骤：（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2） 设计引物用 PCR 法从基因组 DNA 中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3） 筛选阳性克

14、隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。（4） 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。（5） 培养 293（或其它目的细胞） ，并接种于 24 孔板中，生长10-24 小时（80%汇合度） 。（6） 将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。（7） 提取蛋白并用于荧光素酶检测。（8） 加入底物，测定荧光素酶的活性。（9） 计算相对荧光强度，并与空载对照比较。三、 质谱鉴定技术服务 1、 简介 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 MALDI-TOF-MS 可测定生物大分子的分子量高达 600KDa。通过肽质量指纹谱（PMF）和肽序列标签（PST）技术可高灵敏度、高通量、快速

15、鉴定蛋白质，是蛋白质组学研究必不可少的生物质谱，也是临床蛋白质组学首选的技术。还可分析寡核苷酸序列、多糖结构、聚合物分子量分布、特殊合成化学品等。公司拥有 Bruker Ultraflex MALDI/TOF-TOF 质谱，为广大客户提供质谱鉴定相关技术服务。2、收费标准项目参考价格 说明胶内酶切 150 元肽质量指纹图分析450 元/样品 考染多肽和蛋白质分子量测定180 元/样品串联质谱测序600 元/肽段多肽和蛋白质的纯度测定350 元/样品数据库查询与结果分析 200 元/个数据3、培训及送样须知送样品可为冻干粉、溶液或胶内蛋白质（最好为考染） ，冻干粉、溶液应无盐。样品如有毒性或腐蚀

16、性或需特殊保存的样品，请事先说明。四、 合作企业上海辉睿生物科技有限公司它是 2010 年 6 月成立的高科技生物技术公司，有多名海内外博士及国内资深专业人士创办。公司拥有自主知识产权的 SQ 探针标记技术。目前公司设有合成部、技术服务部和诊断产部。合成部的目标是大招最专业。质量最稳定的修饰 DNA、荧光标记探针合成中心，同时提供专业的引物、弹筝（TaqMan、AllGlo、MGB、DQ）设计及测试服务。技术服务部提供 HRM、AllGloT 探针、DQ 探针、MGB 探针的荧光丁莲估计 SMP 检测服务。公司拥有高通量、领先的 Roche480(384 孔)、ABl7900（384 孔）等荧光定量 PCR 仪，能够提供最专业最领先的RealTine PCR 服务。诊断产品部的目标是打造国内种类最齐全、质量最稳定的诊断产品，为市场提供高性价比的各类荧光 PCR 试剂盒，目前我们已经研制成功上百种病原微生物荧光 PCR 检测试剂盒。 我们的宗旨是：技术带动产品，诚信服务用户，睿智创造辉煌！主要业务（一）