考马斯亮蓝染色详细步骤

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1、考马斯亮蓝染色详细实验步骤考马斯亮蓝染色详细实验步骤考马斯亮蓝染色液考马斯亮蓝染色液 R250 配方（配方（100ml）:考马斯亮蓝考马斯亮蓝 R250 0.25g甲醇甲醇 45ml冰醋酸冰醋酸 10mlddH2O 45ml考马斯亮蓝脱色液配方：考马斯亮蓝脱色液配方：甲醇甲醇 250ml冰醋酸冰醋酸 80mlddH2O 定容至定容至 1000ml。具体操作步骤：具体操作步骤：1 电泳结束后，切取少量含有电泳结束后，切取少量含有 MARK 蛋白以及少许样品的小部分蛋白以及少许样品的小部分凝胶进行染色，其余部分用保鲜膜包好，放在凝胶进行染色，其余部分用保鲜膜包好，放在 4冰箱保存。冰箱保存。取凝胶

2、放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色胶。置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色 1 小时或更长小时或更长时间。时间。注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚，注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染

3、色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色 2-4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。2 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少 2-3 次。次。3 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色 4-24 小时。期间更小时。期间更换脱色液换脱色液 2-4 次，直至蓝色背景基本上全

4、部被脱去，并且蛋白条带次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色 1-2 小时后即可出现。小时后即可出现。注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附在吸水纸上，加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色附在吸水纸上，加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。变浅。4 完成脱色后，用完成脱色后，用 ddH2O 浸泡，至于未染色凝胶长度相等时，参浸泡，至于未染色凝胶长度相等时，参照照 MARK 蛋白，与未染色凝胶对比，切下所需蛋白成分的凝胶，蛋白，与未染色凝胶对比，切下所需蛋白成分的凝胶，收集起来。然后把所要提纯的蛋白从凝胶中分离出来。收集起来。然后把所要提纯的蛋白从凝胶中分离出来。