第一章 动物实验概述,,,动物实验基本要素： 处理因素 受试对象 实验效应 （研究因素） （生物学特征改变） （受试因素） (受试动物 ),,,,,对照组 阴性(正常)对照组 阳性(有效)对照组 溶剂(实验)对照组 处理组 ---剂量水平1 ---剂量水平2 ---剂量水平3…,实验组设计,对照组的意义,对照目的： 消除或减少非处理因素对实验效应的影响，使动物实验的结果真实、客观、可信 对照类型： 同体对照（有3种） 组间对照： 对照要求： “同时、同地、同条件、同操作”,,同体处理前后对照 （施加处理因素前后） 同体不同部位对照 （对称部位施加或不施加处理） 同体交叉处理对照 （对称部位交叉处理）,同体对照,,组间对照,实例1,用动物（犬）试验研究针刺“人中穴”对血压的影响的实验组设计： 问题： 1.实验三个基本要素？ 2.实验组如何设置？,实例2,用动物（犬）试验研究针刺“人中穴”对血压的影响的实验组设计： 不同处理水平 （针刺频率与强度）,实例2,无针刺（正常）-阴性对照组,针刺（非人中穴）-试验对照,针刺人中穴-处理组,,用动物实验研究“沙棘油对汞诱导大鼠肝肾氧化损伤的影响”的实验组设计：,实例评述（实例摘自《毒理学杂志》第20卷第4期，2006）,阴性对照组（生理盐水）,汞处理组（皮下注射2.5mg/kg）,沙棘油（灌胃5.0mg/kg）+汞处理组（皮下注射2.5mg/kg）,实验效应指标： 谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px） 超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）,用动物实验研究“沙棘油对汞诱导大鼠肝肾氧化损伤的影响”的实验组结果：,实验设计问题分析：,阴性对照组（生理盐水）,汞处理组（皮下注射2.5mg/kg）,沙棘油（灌胃5.0mg/kg）+汞处理组（皮下注射2.5mg/kg）,实验设计问题： ①沙棘油对实验效应的单独作用？ ②沙棘油对汞诱导的氧化损伤作用有无剂量影响？,与汞处理组比较：肝脏GSH-Px↑,与对照组比较有氧化损伤： 肝脏GSH↓、 SOD↓、GSH-Px↓、MDA↑,第一节 受试因素（物）,一、剂量（Dose） 剂量含义 1.动物接触受试物的量 “外剂量” –大 2.施加给动物的受试物量 3.进入血液中的受试物量 “内剂量” –小 4.产生实验效应的受试物量 表示方法 1.mg/kg ---经消化道、皮肤、注射途径 2.mg/m3 (ppm)---经呼吸道 A(mg/m3)×22.4 B(ppm) = M,,,,,,首过效应(First pass effect)： 是指受试动物机体在受试物的接触部位对受试物的阻隔作用或生物转化作用，从而使受试物进入血液的量小于接触量。
吸收系数(Absorption coefficient)： 是指受试物被受试动物吸收入血的量与接触量之比二、受试物溶液配制 溶剂和助溶剂要求 1.不与受试物发生化学反应； 2.不对实验效应产生影响； 3.在使用中不发生降解； 4.不影响受试物的稳定性 常用溶剂与助溶剂： 1.溶剂： 水（生理盐水、蒸馏水等） 植物油（玉米油、橄榄油等） 2.助溶剂： 吐温-80或吐温85 羧甲基纤维素、月桂醇硫酸钠等 受试物配制方法,灌胃量要求： 常规灌胃量 小鼠 0.1ml-0.2ml/10g体重 大鼠 0.5ml-1.0ml/100g体重 兔 ＜100ml/2kg体重 狗 ＜500ml/10kg体重 最大灌胃量（见表） 灌胃方式： 1. “等体积不等浓度”灌胃 2. “等浓度不等体积”灌胃,灌胃给药染毒的药液配制,,,,A.等体积不等浓度药液配制 例1：按1ml/100g体重灌胃量,如何配制受试物药液？ 剂量组：1000mg/kg 100mg/kg 10mg/kg 100mg/100g 受试物浓度：100mg/1ml 10mg/1ml 1mg/1ml 200g大鼠 2ml 2ml 2ml,,,,,,,,,,,,,B.等浓度不等体积药液配制 例2：按1ml/100g体重灌胃量,如何配制受试物药液？ 剂量组：1000mg/kg 100mg/kg 10mg/kg 100mg/100g 受试物浓度：100mg/1ml 100mg/1ml 100mg/1ml 200g大鼠 2ml 0.2ml 0.02ml,,,,,,,,(2) 喂饲法 要求： ① 动物需单笼喂养； ② 每日需计算进食量或饮水量； ③ 受试物应无异味，不挥发； ④ 受试物应不与食物发生化学反应； ⑤ 受试物在饲料中含量≯5%。
缺点： ① 动物笼具需要量多; ② 工作量很大； ③ 受试物剂量很难控制在所需水平;,喂饲法染毒含药饲料配制,,,,例3：按100g体重动物每日摄食量10g计算,如何配制饲料？ 剂量组： 4000mg/kg 400mg/kg 40mg/kg 400mg/100g 饲料中 受试物含量：400mg/10g饲料 40mg/10g 4mg/10g （4%） (0.4%) (0.04%) 200g大鼠 20g饲料 20g饲料 20g饲料,,,,,三、受试物施加途径 1. 经口(胃肠道) (1) 灌胃法 (2) 喂饲法 (3) 吞咽胶囊法 2. 经呼吸道 (1) 自然吸入---“静式”与“动式” (2) 气管注入 3. 经皮肤--涂药 4. 注射途径 ---静脉、肌肉、皮下、腹腔注射等,第二节 实验动物,一、实验动物分类 (一) 按基因遗传学分类 1.近交系(inbred strain) 2.封闭群(closed colony) 3.突变系(mutant strain) 4.杂交群(hybrid stock) (二) 按携带微生物分类 1.普通动物(CV) ---一级动物 2.清洁动物(CL) ---二级动物 3.SPF级动物(SPF)---三级动物 4.无菌动物(GF) ---四级动物,(一) 按基因遗传学分类 1．近交系(inbred strain) 是指连续20代以上兄妹交配(BXS，brother-sister mating)或亲子交配(PXO，Parent-offspring mating)培育而成的动物品系。
常见的近交系动物： ① 普通近交系 ② 重组近交系 ③ 同源突变近交系 ④ 同源导入近交系,近交系动物的特点： ① 基因型相同，表现型一致，近交系数大于99％； ② 对受试物反应一致，实验结果重复性好，可比性强； ③ 遗传学背景明确； ④ 抵抗力差，对营养及饲养管理条件要求高； ⑤ 不同品系具有各自明显的特性2．封闭群(closed colony) 它是指一个不从外界引入新的血缘，采用非近亲交配方式进行繁殖一定代次的实验动物种群又称远交系(outbred stock) 常见的封闭群有两类： (1)近交系封闭群：由近交系种群采用非同胞交配至少连续繁殖在4代以上的群体称近交系封闭群 (2)非近交系封闭群：以非近亲交配方式在一定群体内连续随机繁殖15代以上的群体称非近交系封闭群封闭群动物具有以下特点： ① 群体遗传特异性保持相对稳定； ② 个体间具有杂合性，存在一定的差异； ③ 与人类群体遗传异质性相似； ④ 繁殖能力较强； ⑤ 生产成本低，生产量大，供应充足。
3．突变系(mutant strain) 突变系(mutant strain)是指由于遗传基因发生突变而表现出某种遗传缺陷的品系动物 突变系动物的共同特点是： ① 突变系动物因其突变多为病态； ② 其生活能力较弱； ③ 饲养管理要求严格，繁殖保种较为困难； ④ 适用于某一疾病机制研究4．杂交群(hybrid stock) 杂交群(hybrid stock)又称异系杂交，它是由两个不同的近交品系杂交而繁殖的第一代动物，又称为杂交一代（简称F1杂交动物） 杂交群动物的特点： ① 它不具有育种功能； ② 杂交F1代动物遗传和表现均一性好； ③ 生活适应能力较近交系动物强； ④ 具备亲代双亲的特点，应用范围大二) 按携带微生物分类 1.普通动物（conventional animals，CVA） 又称一级动物 特点： ① 不带有动物烈性传染病和人兽共患病病原体; ② 对实验的反应性较差，实验结果不可靠，仅可供 教学示范及作为预备试验之用。
饲养要求： ① 饲养于普通环境； ② 全价饲料饲养； ③ 饮水水质应符合国家规定的生活饮水卫生标准； ④ 饲料与垫料要消毒，室内温度与湿度能人工控制； ⑤ 能防止蚊蝇等昆虫及野鼠进入; ⑥ 饲养环境应定期清洁消毒 物种来源于清洁动物或SPF动物。