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1、猪白细胞介素猪白细胞介素 6（IL-6）酶联免疫检测酶联免疫检测试剂盒使用说明书试剂盒使用说明书使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测猪白细使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测猪白细 胞介素胞介素6（IL-6） ，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。用途：用途： 用于猪血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素 6（IL-6）的测定。工作原理工作原理本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中猪白细胞介素 6（IL-6）的水平。向预先包被了猪白细胞介素 6（IL-6）单克隆
2、抗体的酶标孔中加入白细 胞介素 6（IL-6） ，温育；洗涤后，加入 HRP 标记过的白细胞介素 6（IL-6）抗体。再经 过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物 A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化 成最终的黄色。颜色的深浅与样品中猪白细胞介素 6（IL-6）的浓度呈正相关。试剂盒组成试剂盒组成 1标准品（160ng/L）0.5ml7显色剂 A 液6ml2标准品稀释液3ml8显色剂 B 液6ml3酶标包被板12 孔8 条9终止液6ml4酶标试剂6ml10说明书1 份530倍浓缩洗涤液20ml11封板膜2 张6样品稀释液6ml12密封袋1 个需要而未提供的试剂和器材需要而未提供的试剂和器材
3、1 37恒温箱。 2 标准规格酶标仪。 3 精密移液器及一次性吸头 4 蒸馏水， 5 一次性试管 6 吸水纸注意事项注意事项1 从 2-8取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少 30 分钟。酶标包被板开 封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差 3 建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释 液稀释一定倍数（n 倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数 （n5） 。 4 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.5 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板
4、膜。 6 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 7 底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。洗板方法洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几 次；将稀释后的洗涤液至少 0.35ml 注入孔内，浸泡 1-2 分钟。根据需要，重复此过程数 次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求标本要求 1不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 2标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不 能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但
5、应避免反复冻融操作程序操作程序1 标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍 比稀释比稀释）：2 分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准品孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品 50l；在酶标包被板上 待测样品孔中先加样品稀释液 40l，然后再加待测样品 10l（样品最终稀释度为 5 倍） 。轻轻晃动混匀，37温育 30 分钟。 3 弃去液体，甩干，每孔加满 30 倍稀释后洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸 拍干。如此重复 5 次，拍干。
6、4 每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37温育 30 分钟。 5 弃去液体，甩干，每孔加满 30 倍稀释后洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸 拍干。如此重复 5 次，拍干。 6 每孔先加入显色剂 A50l，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色 10 分 钟. 7 取出酶标板，每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。 8 测定：以空白孔调零，在 450nm 波长下测量各孔的吸光度值（OD 值） 。 测定应在加 终止液后 15 分钟以内进行。 9 根据标准品的浓度及对应的 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的 OD 值在回归方程
7、上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由 于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。操作程序总结操作程序总结：准备试剂，样品和标准品准备试剂，样品和标准品 80ng/L（5 号标准品）120l 的原倍标准品加入 120l 的标准品稀释液 40 ng/L（4 号标准品）120l 的 5 号标准品加入 120l 的标准品稀释液 20ng/L（3 号标准品）120l 的 4 号标准品加入 120l 的标准品稀释液 10 ng/L（2 号标准品）120l 的 3 号标准品加入 120l 的标准品稀释液 5ng/L（1 号标准品）120l 的 2 号标准品加入 120l 的标准品稀释液加入准备好的样品和标准品，加入准备好的样品和标准品，3737反应反应 3030 分钟分钟洗板洗板 5 5 次，加入酶标试剂，次，加入酶标试剂，3737反应反应 3030 分钟分钟洗板洗板 5 5 次，加入显色液次，加入显色液 A A、B B，3737显色显色 1010 分钟分钟加入终止液加入终止液1515 分钟之内读分钟之内读 ODOD 值值计算计算检测范围：检测范围：2.5ng/L100ng/L。 规格：规格： 96 人/盒 保存：保存： 2-8 有效期：有效期： 6 个月（2-8） 。
