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1、KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 作者单位：1.解放军第 260 医院口腔科 河北 石家庄 050041； 2.第四军医大学口腔医院检验科 陕西 西安 710032【摘要】 目的 探讨抗菌磷酸锌黏固剂的加工工艺及其抗菌性能。方法 采用研磨法将载银无机抗菌剂添加在磷酸锌黏固剂粉体中合成载银抗菌磷酸锌黏固剂。以普通磷酸锌黏固剂作为对照，进行大体观察和扫描电镜观察。然后通过细菌（变异链球菌、白假丝酵母菌、牙龈卟啉单胞菌）接种于抗菌磷酸锌黏固剂上，计算出样品的抗细菌率。结果 大体观察显示，抗菌磷酸锌黏固剂与普通磷酸锌黏固剂无明显差异。扫描电镜观察显示，抗菌磷酸锌黏固剂表面均匀散布 Conval
2、 PAg-40 颗粒。抗菌磷酸锌黏固剂对变异链球菌、白假丝酵母菌、牙龈卟啉单胞菌均有抗菌效果，且抗菌能力区别明显。结论 添加载银抗菌剂对磷酸锌黏固剂的表面结构无明显影响且具有一定的抗菌性。【关键词】 载银无机抗菌剂； 磷酸锌黏固剂； 加工工艺； 抗菌活性APreparation and determination of antibacterial activity of dental antibacterial zinc phosphate cement ZHANG Lin-qi1, LIANG Lan-ping1,LIU Shuang-yun1, YANG Ju-cai2.KKME-专业医学
3、搜索引擎 http:/ Dept. of Stomatology, No. 260 Hospital of PLA, Shijiazhuang 050041, China； 2. Dept. of Detection, Hospital of Stomatology, The Fourth Military Medical University, Xian 710032, China）Abstract Objective To prepare and explore the antibacterial activity of dental antibacterial zinc phosphat
4、e cement（ZPC） Methods Silver base inorganic antibacterial agent（Conval PAg-40） was mixed into ZPC powder with mortar. To verify the process technique, the structure of antibacterial ZPC was observed grossly and scanned by electronic microscopy, and was compared with the common ZPC. Then inoculate qu
5、antitative oral pathogens（Streptococcus mutants, Saccharomyces albicans, Porphyromonas gingivalis） on zinc phosphate cement. Viable count in the samples was detected after cultured for a certain time and the antibacterial rate was figured out. Results There was little difference between the antibact
6、erial ZPC and the common ZPC. When observed by a scanning electronic microscope, Conval PAg-40 were well dispersed in ZPC and there were few air bubbles and crannies in the structure. Antibacterial ZPC had antibacterial effect to the pathogens and the antibacterial effects had significant difference
7、. Conclusion There is little influence on surface structure of the ZPC. The ZPC which added silver based inorganic antibacterial agents has determinate antibacterial KKME-专业医学搜索引擎 http:/ words silver base inorganic antibacterial agents； zinc phosphate cement； process techniques； antibacterial activi
8、ty牙科磷酸锌黏固剂，常用于冠、桥粘接修复。但临床上发现牙科磷酸锌黏固剂易形成继发龋而导致修复失败，其形成的原因主要是由于其粘接后形成较大微渗漏，致龋细菌在其表面滞留所致1。载银抗菌剂是近年来研发的新型抗菌剂，既往研究表明其对多种口腔病原菌有较好的抗菌效果2，可添加在树脂等材料中抑制口腔病原菌的定植3-4。本研究将载银无机抗菌剂添加在磷酸锌黏固剂中制成抗菌磷酸锌黏固剂，并探讨其加工工艺的可行性，同时对其抗菌性能进行检测。1 材料和方法1.1 实验材料和仪器1.1.1 实验材料 载银无机抗菌剂 Conval PAg-40（西安康旺抗菌科技股份有限公司） ，载体为磷酸锆。普通磷酸锌黏固剂（上海齿科
9、材料厂） ，其粉液比例为 1.0 g/0.5 mL。1.1.2 实验菌株 本实验检测菌株分别是变异链球菌（ATCC 25175） 、白假丝酵母菌（ATCC 25261） 、牙龈卟啉单胞菌（ATCC 33277） ，均为国际标准菌株，来自第四军医大学口腔医院检验科。1.1.3 实验器材 BP-190S 电子天平（德国赛多利斯公司） ，5 000 L 微量取药器（上海大龙医疗器械设备有限公司） ，玛瑙乳KKME-专业医学搜索引擎 http:/ ，Quanta200 扫描电镜（FEI 公司，美国） 。超净工作台（上海净化设备厂） ，DY1 型培养箱（浙江义乌冷冻机械厂） ，微量加样器（Nichiky
10、o 公司，日本） ，Vitek 细菌比浊仪（法国生物梅里埃公司） ，96 孔微量板（Nunc 公司，丹麦） ，胰酪胨大豆肉汤（trypticase soya broth，TSB；上海美季生物技术有限公司） ，细菌胰酶解大豆酪蛋白胨琼脂（trypticase soya agar，TSA）平板（Genmed 公司，美国） 。1.2 方法1.2.1 载银抗菌磷酸锌黏固剂加工工艺 将载银无机抗菌剂 Conval PAg-40 按一定质量比添加在磷酸锌黏固剂中，置于乳钵中研磨 10 min 制成抗菌粉体。然后按粉液比例 1.0 g/0.5 mL 调拌混匀，置于特制模具中制成实验所需的试件。试件为正方形，
11、边长 10 mm，厚度 2 mm。1.2.2 载银抗菌磷酸锌黏固剂观察 按 Conval PAg-40 在黏固剂中的含量不同制作实验组试件4 组，每组 4 块试件，即 4 组实验组试件分别含0.5%CV、1.0%CV、1.5%CV 和 2.0%CV 抗菌剂。用普通磷酸锌黏固剂制作对照组试件 2 组，即空白对照组和阳性对照组，每组各 4 块试件，其尺寸同实验组试件。空白组试件中不含抗菌剂。阳性对照组试件为普通磷酸锌黏固剂中加入 0.12%氯己定溶液使氯己定的含量达到 2.0%CV。实验组和空白组从大体上观察其色、形、质的差异，并以扫描电镜观察其表面结构的差异。KKME-专业医学搜索引擎 http
12、:/ 抗菌实验 1）实验菌液的配制：将实验菌株置 TSA平板上传代培养 18 h 后，挑取琼脂表面单个菌落混悬于 TSB 培养液中。用 Vitek 细菌比浊仪配置成浓度为 1105 cfu/mL 的菌液。2）制备聚乙烯薄膜，为正方形，其边长为 10 mm，厚度为 0.10 mm。将聚乙烯薄膜用 70%乙醇溶液浸泡 1 min，再用无菌水冲洗，自然干燥。3）抗细菌率的测定：取菌液 50 L 铺在薄膜表面，保证薄膜菌浓度不变。用灭菌镊子夹起带菌薄膜分别覆盖在实验试件和空白对照试件上，一定要铺平，使菌均匀接触样品，置于灭菌平皿中，在（371） 、相对湿度大于 90的条件下培养 24 h。取出培养 2
13、4 h 的样品，分别加入 20 mL 洗脱液（含 0.80% NaCl 的生理盐水） ，反复冲洗薄膜，充分摇匀后，取一定量接种于营养琼脂培养基NA（nutrient agar）中，在（371） 下培养 2448 h 后活菌计数，测定活菌数，计算抗细菌率，抗细菌率计算公式为：抗细菌率=（每片空白对照样品平均回收细菌数每片抗菌材料样品平均回收细菌数）/每片抗菌材料样品平均回收细菌数100%。以上实验重复两次。 2 结果2.1 大体观察结果 所有试件常温下调拌完全固化后，实验组试件色泽均匀、表面光泽细致，与空白组相比，除颜色略偏白外无明显差异。2.2 扫描电镜观察结果 KKME-专业医学搜索引擎 h
14、ttp:/ 3 000 时可观察到：空白组表面结构均匀，颗粒相对较少；实验组颗粒相对较多，表面见有约 1.5 m 的 Conval PAg-40 颗粒均匀散布。放大倍数为 500 时观察到：空白组表面结构相对松散，有小气泡；实验组表面结构更为致密均匀，散布细小抗菌剂颗粒，有小气泡。气泡的出现与加工方法有关。2.3 抗菌实验结果 抗菌实验结果见表 1。采用 SPSS 10.0 统计软件对实验组与阳性对照组以及实验组之间进行方差分析和 t 检验，发现对于变异链球菌和牙龈卟啉单胞菌来说，除了实验组 0.5%CV 和阳性对照组之间差别无统计学意义外，含有不同比例抗菌剂的磷酸锌黏固剂抗菌性能的差异具有统
15、计学意义（P0.05） ；而对于白假丝酵母菌来说，除了实验组2.0%CV 与阳性对照组结果之间的差异无统计学意义外，含有不同比例抗菌剂的磷酸锌黏固剂抗菌性能的差异具有统计学意义（P0.05） 。随着抗菌剂比例的不断增加，抗菌磷酸锌黏固剂的抗细菌率也不断提高。因此，抗菌磷酸锌黏固剂具有一定的抗菌性能。3 讨论抗菌材料是近年来国际上新兴的与人类健康发展、环境保护等密切相关的生态环境材料。最先研究的有机抗菌材料具有短期高效杀菌效果，但安全性和化学稳定性差，易产生微生物耐药性，尤其耐热性差（小于 200 ）是其最大的弱点，导致它在应用中不KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 世纪 80 年代研究出的无机抗菌材料无毒、广谱抗菌、抗菌时效长、不产生耐药性，特别是有突出的耐热性（6001 000 ） ，大大拓宽了抗菌材料的应用领域5-6。经过学者们多年来不懈努力，已经证实载银抗菌剂对常见的口腔致病菌有高效的抑菌效果。佘文珺等7-8通过比较 6 种载银抗菌剂对口腔常见致病菌的抗菌活性，证实载银抗菌剂对变异链球菌、黏性放线菌、乳酸杆菌、白假丝酵母菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌等都有明显的杀菌效果。张林祺
