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1、内蒙古医学院硕士学位论文Mdm2 PARP ToPo在喉癌中的表达及临床意义姓名：郭亚青申请学位级别：硕士专业：耳鼻咽喉科学指导教师：彭诗东;孟秀英20060501中文摘要目的探讨喉癌中M d m 2 、P A R P 、T o P 0 蛋白和T o P o r n R N A 的表达及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化s P 法检测M d n l 2 、P f 、R P 、T O P o 蛋白在5 0 例喉鳞状细胞癌和1 0 例喉正常黏膜中的表达，采用原位杂交方法检测相应标本中T c 正) o m R N A 的表达。结果( 1 ) M d r I l 2 在喉癌和喉正常组织中表达的阳性
2、率分别是8 6 ( 4 3 5 0 ) 和2 0 ( 2 1 0 ) ，M d m 2 与临床分期和淋巴结转移有关，与性别、分化程度、临床分型无关。( 2 ) P A R P 在喉癌和喉正常组织中表达的阳性率分别是7 6 ( 3 8 5 0 ) 和3 0 ( 3 l O ) ，P 触氇与分化程度有关，与性别、淋巴结转移、临床分型和临床分期无关。( 3 )T c n 蛋白和T O P o m R N A 在喉癌表达的阳性率分别是7 0 ( 3 5 5 0 ) 和6 4 ( 3 2 5 0 ) ，在正常组织中表达的阳性率分别是l O ( 1 1 0 ) 和2 0 ( 2 1 0 ) ，T o P
3、o 与淋巴结转移、临床分期和分化程有关，1 b P o 与临床化疗关系密切，与性别、临床分型无关。T c 怖蛋白和T o P o r 1 1 刚A 在喉癌组织的阳性表达呈正相关( P 7 5 。染色强度与百分比的乘积 3 分才算免疫反应阳性。免疫组化和原位杂交阳性结果判定方法相同。1 4 统计学处理结果采用口s s l l 5 统计软件包进行统计学处理，两样本率间比较用x 2 检验，相关性分析用直线相关，以Q = 0 0 5 作为检验水准，P O 0 5 ) ( 见表6 ) 。表1M d r r l 2P p 母在各组织中的表达表3T b P o 蛋白和1 U ) o r r l R N A
4、在正常组和喉癌组的表达表4 ，I I o I ) o 蛋白和1 、o P o m R N A 表达的关系表5 ，I b P o 蛋白和T o P o r 1 1 I 州A 与临床病理参数的关系l o 表6M 出n 2 与鼓螽b 嚣魏盏线稻差 嶷糟美 r = 一0 ，辩63 讨论3 。1M d n 泣在喉癌申的表达及临床意义麓d m 2 是一番痉基藏，位予1 2 1 3 一1 4 ，它豹族癸羧痔烈交2 3 7 2 酾缓残，罴一静遗德保守基因，陇自发地导致肿瘤发生。A 诎n 2 在恶性肿瘤中表现出的成瘤性与抑制P 5 3 基因正常功能密切相关。M d m 2 基因是P 5 3 基因激滔的靶子，通过
5、鼯合和掩饰P s 3 转录活往区瑟对戮3 受程璃节。酝馥迂逶过受瞧溪节鄹3 瓣转录活毙嚣疆錾蜀3 分母黪续篷周期的停滞及凋亡，使纲胞永生化，导数肿瘤发生( 。M d m 2 与P 5 3 构成反馈体系与其他信号转导途径一起形成调控网络，参与细胞各种嫩物进程，并与肿瘤的发嫩发展密切楱关，有鋈竣为基嚣治疗瓣有效靶基鞭。缨貔生锈骚究发瑷，螽莲d 旺还毒逶避辍甄鹭生型P 5 3 诱导的细胞凋亡作用拮抗野生溅P 5 3 功能，其高水平表达_ 舀丁诱导肿瘸耐药现象的产生( 3 制。e h 等53 发现M d r I l 2 过表达与儿童急性淋巴细胞白血瘸患者对阿霉索耐药相关，可毙罴琴耱渣痃失败瓣藤器。冬融
6、娆瘗基因除农入类凑瘿、黢凄瘗骞扩矮秘蓬表达外，在其它些肿瘤，如膀胱癌和输尿管肿瘤，白m 病，肺母细胞瘸和肺腺癌等( 6 】中也发现有M d m | 2 瑷白的异常液达。本缓蜜验结果表赘，7 7 。8 ( 1 毒圭8 ) 静王+ 囊麓骥鳞癌表达羚缎畦蛋自，鞭+ 嚣麓嚷鳞癌4 3 8 ( 1 4 3 2 ) 表达M d r n 2 蛋白，黼组比较有照著性差异( p O 0 5 ) ，提承早期( I+ 期) 喉鳞癌M d 叱鬣白表达比晚期( + 期) 高，这与在栩关的研究结果一致【7 j 。赫瘗缍织免疫维纯结暴撬暴，磊秘戏戆交舅表达霹麓每孚麓恶羧耱癯戆发生耱耱癌缨蘧9 也鐾直匡兰堕堡巫窒生堂丝堡塞f
7、 ；塑i 生2的生长相关 引。本组研究显示，M d m 2 与淋巴结转移有关，在喉癌组织中无淋巴结转移组中M d m 2 阳性率8 1 8 ( 2 7 3 3 ) ，淋巴结转移组中M d r n 2 阳性率4 7 1 ( 8 1 7 ) ，两者比较有显著性差异( P O 0 5 ) ，提示M d m 2 癌基因产物的过表达与喉癌的预后有关。临 床分期低的喉癌( I + 期) 呲蛋白表达比分期高的喉癌( + 期) 高，无淋巴结转移组较淋巴结转移组M d m 2 蛋白表达高，这都说明M d n 也蛋白表达状况与喉癌的生物学行为有关，可作为喉癌的病理分级和预后评估的参考指标之一。3 2P d 强在喉
8、癌中的表达及临床意义P A R P 是存在于多数真核细胞中的一个能选择性识别并结合D N A 缺口的m 姨结合蛋白酶，在结构上可分为三个区域：N 端可特异性识别并结合D N A 的单链或双链断裂，中部为核定位信号序列和酶蛋白自身修饰区，c 端为催化活性区，含有底物十的结合位点。研究表明：P A R P 是D N A 损伤所致细胞早期应激反应的重要分子。当细胞聊峨出现损伤时，它通过N 端的锌指识别，结合D N A 损伤，激活C 端的聚A D P 核糖基活性，修饰受体蛋白，感受与传递D N A 损伤信息( 州。P 蛆冲作为细胞内自测损伤的分子感受器，感受D I 她的损伤程度，使细胞根据受损的程度作
9、出相应的反应：损伤不严重时，诱导细胞进入生长休止状态，修复损伤，以利于细胞功能的恢复；损伤严重时，则放弃修复，使细胞进入死亡程序。( 因为对严重受损的细胞修复不仅要消耗细胞的大量能量，而且由于修复的出错率较大，很有可能形成突变细胞，成为肿瘤的潜在细胞) 。这种信号转导体系和分子调节网络的存在，使细胞损伤修复和程序性死亡成为一个问题的两个方面，其协调性丧失则可导致肿瘤的发生【1 0 1 1 j 。研究发现1 23 在恶性程度较高的白血病细胞中，P A R P 活性远高于正常人外周血淋巴细胞的P 6 吐啦活性。B u r l 【l e 等( 1 3 ：对人、猩猩、 大象等1 3 种不同寿命动物的研
10、究表明，它们的单个核细胞中咖活性显著不同。P u 心活性与动物寿命成极显著的正相关关系。我们知道，恶性肿瘤细胞增殖能力很强，较之正常细胞是难于进入衰老的，在本研究中喉癌组P A R P 活性高于正常组，其差异有极显著性( P 0 0 1 ) 。本次实验还显示，P m 强与喉癌的分化程度有关，恶性程度越高，P m 啦的表达越强，本结果与相关文献报道一致 14 1 。细胞内研峨损伤检测及修复系统调控出现异常，P ：J 虹狙活性将增加，使细胞逃离衰老调控机制，成为增殖活性很强的恶性细胞。P 气R P 在细胞损伤、缺血及细胞衰老等方面研究较多，而在恶性肿瘤中相关研究较少，尤其在头颈肿瘤中有关P A R
11、 P 报道罕见，因此，其与喉癌的生物学行为的关系有待于进一步探讨。内蒙古医学院硕士研究生学位论文( 2 0 0 6 年)3 3T o P o 在喉癌中的表达及临床意义T ( ) P o 是将D I 蛆由一种拓扑异构体转变为另一种拓扑异构体的酶，在细胞核中T c I P 。通过在D N A 链上形成一个移过性的双链断裂，使遗传物质中负的或正的超螺旋解旋，在r P 、M 孑+ 等的参与下，产生构型转换从而改变D l 蛆的拓扑结构。其作用涉及D N A 复制、转录、重组、染色体的分离、浓缩等许多方面。由于许多抗肿瘤药物正是通过干扰肿瘤细胞D N A 复制、重组及基因的表达而发挥抗肿瘤作用的。所以，珊
12、o 是抗肿瘤药物作用的共同靶点。这些药物通过稳定T C 正b 和D I q A 产生的易解离复合物，可促进酶介导的D N A 切割，这些不可重新连接D N A 缺口的积累可引起细胞凋亡或死亡。研究表明，恶性肿瘤化疗失败的主要原因是多药耐药( M D R ) ，国内外学者对M D R的研究已进入临床阶段，目前大约已有数十种化合物进入I 一期临床实验，具有代表性药物有：( 1 ) 如z 。s a n e ( I C R F 一1 5 9 ) ，属双哌嗪二酮丙烷，研究显示其具有抗肿瘤新生血管作用，是一个不可切割D N A T ( ) P 0 复合物的T o P o 抑制剂，初期的临床I 、期试验显示
13、其对进行性直肠癌、头颈部肿瘤、淋巴瘤、急性白血病具有中等程度的抑制作用【15 】。( 2 ) 沙尔威辛( s a l v i c i n e ，S A L ) 是中国科学院上海药物研究所提取分离得到的一个全新结构二萜醌类化合物【1 刮，体内实验显示& 也对人肺癌和胃癌移植瘤的抑制性最强【“ ，但有关喉癌细胞R 的研究报道尚少。本实验结果显示：T c I f b 与淋巴结转移有关，有淋巴结转移组中T o P o 阳性率8 8 2 ( 1 5 1 7 ) ，无淋巴结转移组中T o P 0 阳性率4 2 4 ( 1 4 3 3 ) ，两者比较有显性差异( P 0 0 5 ) 。本组结果显示T ( )
14、 P o 与临床分期有关，一期喉鳞癌表达T o P o 蛋白的阳性率明显高于I 一期，两组比较有显著性差异( P O 0 5 ) 。T c ) P o 还与分化程度有关，分化程度低组较中高分化组表达强，其差异有显著性( P 0 0 5 ) 。本试验表明，在喉磷癌临床分期越高和有淋巴结转移的病例中，其T ( ，P 0 的阳性表达高。因此，我们可以在临床治疗中，对那些临床分期高和有淋巴结转移的患者实行手术后化疗或对于失去手术机会的病例直接化疗或放疗。化学治疗对许多肿瘤细胞，特别是头颈部恶性肿瘤的效果较差，主要原因是肿瘤对化疗药物产生了耐药性。T ( ) P o 的含量可做为化疗的一个敏感性参数u
15、引。肿瘤细胞表达T o P o 含量越高，抗肿瘤药物的作用靶点越多，化疗效果好，肿瘤细胞表达T ( ) P 0 含量下降，抗肿瘤药物的作用靶点少，化疗效果差。如T o P b 高水平者可予T o P o 抑制剂化疗，而珊o呈低水平则宜改用其它类化疗药物以确保疗效。本实验通过对T ( ，P o 的检测，并研究其与喉癌生物学特性的关系，以指导临床预测肿瘤的生物学行为，为制定合理的、个体由鐾直匡兰堕亟堡窒生堂焦迨塞f ! 唑! 生2化的治疗方案，为喉癌耐药逆转及肿瘤的化学药物基因治疗提供理论依据。3 4M d m 2 、P A R P 、，I b P o 的相关性恶性肿瘤的发生、发展、是多因素多环节
16、共同作用的结果，相关文献报道：在血液系恶性肿瘤中M d H l 2 过度表达，且与肿瘤的转移、化疗敏感性差和预后不良有关【1 9 ，2 0 。T o P o 与D N A 的复制有密切关系，在增殖的恶性肿瘤细胞中T 。P 。含量和活性将发生明显变化。国内外研究发现，M d r n 2 、P 、R P 、T o P o 均与细胞增殖有关，与恶性肿瘤关系密切。本实验显示，在喉癌组织中M d r n 2 与T 。P o 的表达有相关性，两者成负相关。M d n l 2 在喉癌的早期表达强，但T 。P o 在喉癌晚期及有淋巴结转移组表达较早期强。T c ) P o 是抗肿瘤药物( T o P o 抑制剂) 的靶酶，通过检测T c ，P 0 的活性可以指导临床选择化疗药物。通过本实验结果可
