《白藜芦醇对UVB照射后的人角质形成细胞的保护机制的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《白藜芦醇对UVB照射后的人角质形成细胞的保护机制的研究（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中南地区皮肤性病学术会议论文集白藜芦醇对U V B 照射后的人角质 形成细胞的保护机制的研究孙磊，谢红付中南大学湘雅医院皮肤科4 1 0 0 0 8阳光中的紫外线尤其是中波紫外线( U V B ) 的过度照射，会产生高度反应的氧自由基，这是引起皮肤光老化的重要因素之一，故寻找天然抗氧化剂一直是当前的研究热点。目前发现白藜芦醇( r e s v e t a t r o l ，R e s ) 具有抗氧化、螯合自由基乜1 等作用，故我们开展试验研究白藜芦醇是否对U V B损伤的人角质形成细胞具有保护作用。一、材料和方法1 细胞培养取人H a c a t 细胞，培养至7 0 一8 0 融合时进行试验。
2、 3 12 M T T 试验。2 1 ，观察不同浓度的白藜芦醇对H A C A T 细胞活性的影响 4 1 试验分为7 组，分别为未加药物组，分别加0 5 m m o l L ，0 1m m o l L ，0 0 5m m o l L ，0 0 1m m o l L ，0 0 0 5m m o l L ，0 0 0 1m m o l L 的白藜芦醇药物组。进行M T r 试验b 】。2 2 比较U V B 照射后药物对H A C A T 细胞活性的影响，试验分为4 组，未损伤组、U V B 损伤对照组、U V B + 0 O l m m o l L 白藜芦醇组、U V B + 0 1 m m
3、o l L 白藜芦醇组。待细胞贴壁并培养8 小时后，照U V B ( 强度为3 0 m j c m 2 t5 1 ，距离为1 5 c m ) 后，按上述分组加药。培养2 4 小时后进行M T r试验。3 测定抗氧化指标试验分组同2 2 ，将H a c a t 细胞接种到9 0c m 2 的培养皿中，按2 2 中的试验方法进行照光和加药。培养2 4 小时后，用细胞刮子刮除细胞，离心，冰上制备细胞匀浆。参照试剂盒说明进行G S H P x ，S O D ，M D A 测试。4 电镜观察试验分为3 组，未损伤组、U V B 损伤对照组、U V B + 0 1 m m o l L 白藜芦醇组。按3 的
4、试验方法进行细胞接种，照光和加药。培养2 4 小时后，将细胞进行固定，包埋，切片，染色并进行拍照。5 统计处理实验数据用X s 表示，组间比较用S P S S l l 3 软件进行检验二、结果 1 M T T 试验未照光时，各加药组O D 值分别如下：0 0 0 1 m m o l L 白藜芦醇组0 3 4 6 0 0 2 2 ，0 0 0 5m m o l L 白藜芦醇组0 3 1 9 0 0 2 0 ，0 O l m m o l L 白藜芦醇组0 3 1 5 0 0 2 5 ，0 0 5 m m o l L 自藜芦醇组0 3 1 8 0 0 1 5 ，0 1 m m o l L 白藜芦醇组
5、0 3 2 6 0 0 11 ，0 5 m m o l L 白藜芦醇组0 3 9 4 0 0 1 l ，未加药组O D 值为0 3 7 0 0 0 4 5 两者相比较，差异无显著性( P 0 0 5 ，n = 6 ) 。照光后，未损伤组O D 值为0 5 0 8 0 0 8 1 ，U V B 对照组的O D 值为0 2 4 5 0 0 2 3 ，U V B + 0 0 1 m m o l L 白藜芦醇组O D 值为0 7 7 8 0 0 2 2 ，U V B + 0 1 m m o l L 白藜芦醇组的O D 值为0 8 7 9 0 0 2 6 未加药组O D 值高于U V B 损伤组相，各加
6、药组O D 值高于u V B 损伤组，差异均有显著性( P o 0 5 ，N = 6 ) 。0 1 m m o l L 白藜芦醇组O D 值高于0 0 1 m m o l L自藜芦醇组，差异亦有显著性( P o 0 1 ，N = 6 ) 。5 1中南地区皮肤性病学术会议论文集2 抗氧化指标未损伤组M D A 为3 6 , 1 6 7 2 0 3 4 ，G S H P x 与S O D 分别为1 1 1 6 2 6 1 6 ，3 0 3 0 3 6 9 4 ，U V B 对照组数值相应分别为5 9 7 7 0 3 2 2 7 ，6 5 7 2 6 6 4 5 7 4 2 2 9 0 ，U V B
7、 + 0 O l m m o l L 白藜芦醇数值分别为3 8 3 5 7 0 8 9 0 ，1 0 4 8 6 1 3 0 2 9 0 6 9 8 7 1 ，u V B + 0 1 m m o l L 白藜芦醇组数值分别为2 7 0 4 0 - I - 1 2 9 6 ，1 5 3 1 7 士6 6 4 1 1 8 8 0 2 5 7 。未加药组跟U V B 损伤组相比较，前者M D A 低于后者，G S H P x 与S O D 高于后者，差异有显著性( P o 0 1 ，n = 6 ) 。各加药组跟U V B 损伤组相比较，前者M D A 低于后者，G S H P x 与S O D 高于
8、后者，差异均有显著性( P 0 0 1 ，n = 6 ) 。0 1 m m o l L 白藜芦醇组与0 O l m m o l L 白藜芦醇组之间比较，前者M D A 低于后者，G S H P x 与S O D 高于后者，差异有显著性( P o 0 1 ，n = 6 ) 。3 电镜未照光组细胞凋亡及核固缩少见，胞浆无水肿，胞浆内细胞器( 线粒体，内质网) 丰富。U V B 照射组细胞成梭形，核固缩多见，胞浆水肿，核周水肿，细胞器稀疏，细胞表面微绒毛减少。U V B + 0 1 m m o l L 白藜芦醇组细胞细胞凋亡较未照光组多见，核固缩亦可见，核周无水肿，细胞圆形多见。线粒体，内质网等细胞
9、器及张力原丝较为丰富。三、讨论我们本次试验采用的U V B 辐照强度为3 0 m j c m 2 ，这与阳光到达地球表面的U V B 强度( 1 8 3 0m j c m 2 ) 相吻合。同时，应用人角质形成细胞来进行试验，能更好的模拟人表皮的光老化模型。研究结果表明，白藜芦醇对U V B 所致的角质形成细胞氧化损伤有明显的拮抗作用，这主要通过三个方面得到体现。首先，M T T 试验发现白藜芦醇能显著提高光损伤后的细胞活性其次，酶法发现白藜芦醇能提高光照后细胞的S O D 和G S H P x 活性，降低M D A 含量，减轻活性氧对细胞的损害。最后，通过电镜的观察我们也证实了白藜芦醇能够减轻
10、U V B 对细胞超微结构如细胞核和线粒体等细胞器的损伤。本实验在建立U V B 氧化损伤人角质形成细胞模型的基础上，从细胞生物学、自由基和电镜学等多种角度论证了白藜芦醇对U V B 照射后的角质形成细胞具有保护作用，从而为寻找抗紫外线氧化损伤的活性物质找到了一个新的途径。参考文献：【1 】YM i y a c h iP h o t o a g i n gf r o ma no x i d a t i v es t a n d p o i n tJD e r m a t o lS c i19 9 5 ( 9 ) ，PP ：7 9 8 6 2 F a n gJG ，L uMC h e nZ He
11、 t a l A n t i o x i d a n te f f e c t so fr e s v e r t r o la n da g a i n s tt h ef r e e r a d i c a li n d u c e dp e r o x i d a t i o no fl i n o l e i ca c i di nm i c ec e l l J 。C h e m i s t r y ，2 0 0 2 ，8 ( 1 8 ) ：4 1 9 1 4 1 9 8 【3 】D L 斯佩克特，R D 戈德曼，L A 莱因万德主编，黄陪堂等译细胞试验指南第一版北京：科学出版社，2
12、 0 0 1【4 】R o x i t h r o m y e i nd e c r e a s e su l t r a v i o l e tBi r r a d i a t i o n i n d u c e dr e a c t i v eo x y g e ni n t e r m e d i a t e sp r o d u c t i o na n da p o p t o s i so fk e r a t i n o c y t e s T a k a h a s h iH ，S u z u k iY ，M i y a u c h iY ，H a s h i m o t oY
13、 ，I s h i d a Y a m a m o t oA ，I i z u k aHJD e r m a t o lS c i 2 0 0 4F e b ；3 4 ( 1 ) ：2 5 3 3 【5 K o n d oS ，K o o s h e s hF ，S a u d e rD NP e n e t r a t i o no fk e r a t i n o c y t ed e r i v e dc y t o k i n e si n t ob a s e m e n tm e m b r a n e 【J 】Jc e l lP h y s i o l ，1 9 9 71 7 1 ( 2 ) ：1 9 0 1 9 55 2
