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1、h T E R C 基因、C M Y C 基因检测在宫颈病变筛查中的研究T h eC l i n i c a lSi g n i f i c a n c eo fh T E R CG e n ea n dC - M Y CG e n ei nt h eS c r e e n i n go ft h eC e r v i c a lL e s i o n s研究生：型盟导师：魏左一论文课题起止时间：2Q ! Q 生! Q 旦二2Q ! ! 生! 至旦论文完成时间：至Q 12 生至旦中国医科大学( 辽宁)20 12 年5 月文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机
2、构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：鱼! 丝日期：弘， 9中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外
3、) ，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：壶 塑生指导教师签名：当鱼皇日期：丝! 兰：!目录一、摘要1中文论著摘要1英文论著摘要3二、英文缩略语5三、论文6前言6 月青材料与方法8实验结果1 1讨论1 4结论1 7本研究创新性的自我评价1 8参考文献1 9四、附录2 0文献综述2 0参考文献2 8在学期间科研成绩3 1致谢3 2个人简介3 3中文论著摘要h T E R C 基因、C - M Y C 基因检测在宫颈病变筛查中的研究目的检测h T E R C 基因( 人端粒酶R N A 基因) 、C M Y C 基因在宫颈脱落细胞中的扩增情况并探讨上述两个基因与宫颈病变严重程度的相关
4、性及在宫颈病变筛查中的意义。方法收集2 0 1 0 年1 2 月至2 0 1 1 年1 0 月中国医大四院妇科门诊，体检中心及住院患者的宫颈脱落细胞，应用F I S H ( 荧光原位杂交) 方法检测宫颈脱落细胞中h T E R C基因、C M Y C 基因的扩增情况，统计两基因扩增情况与的高危人乳头瘤病毒感染的相关性，最终进行病理学检查确诊。其中正常宫颈2 0 例，C I N 病例6 3 例( C 玳l为2 3 例，C I N 2 为1 9 例，C I N 3 为2 1 例) ，宫颈癌患者2 2 例，共1 0 5 例。结毋缩禾在正常宫颈中h T E R C 基因、C M Y C 基因未出现异常
5、扩增，上述两个基因在C I N l 中的扩增率分别为2 1 7 4 及1 7 3 9 ，在C I N 2 中分别为5 7 9 0 及5 2 6 3 ，在C 3 中为8 5 7 1 及9 0 4 8 ，而在浸润性宫颈癌中的扩增率则均达到1 0 0 。h T E R C 基因、C M Y C 基因各组间的扩增率均随宫颈病变的严重程度而增加，且C I N l 2 组与C I N 3 C C 组间的数据比较有明显的统计学意义( P 0 0 5 ，两组间无明显差异；C I N l 与C I N 2 组相比卡方值X 2 为5 7 6 ，P 0 0 5 ，无明显差异；将C I N l 、C I N 2 合并
6、成为1 组，与C I N 3 及宫颈癌组合并的组进行卡方检验，卡方值X 2 为2 6 1 3 ，P 0 0 5 ，；两组间无明显差异；C I N l 与C I N 2 组相比卡方值X 2 为5 8 9 ，P 0 0 5 ，无显著统计学差异；将C I N l 、C I N 2 合并成为1 组，与C I N 3 及宫颈癌合并的组进行卡方检验，卡方值X 2 为3 5 3 0 ，P 0 0 0 5 ，有显著的统计学意义。可以认为C M Y C 基因检验在C I N l 、C I N 2 进展为C I N 3 甚至宫颈癌的过程中也起着重要的作用。表2 ，h T E R C 基因、C M Y C 基因的扩
7、增率2 、h T E R C 基因与C M Y C 基因在宫颈脱落细胞中的扩增量：除了两种基因的扩增率会随着病变严重程度而增加以外，h T E R C 基因以及C M Y C 基因的扩增量( 每个病例随机计数1 0 0 个细胞) 也随着病变的严重程度而呈现逐渐递增的趋势，应用S P S S l 7 0 软件对两基因扩增量数据进行组间对u s k a l W a l l i s 秩和检验分析，均有显著的统计学意义( P 0 0 0 1 ) ( 见表3 ) 。每个细胞中基因扩增的程度也与病变的程度相关( 见图1 ，图2 )表3 ，T E R C 基因与C M Y C 基因的扩增量( 每1 0 0
8、个细胞随机计数)正常宫颈h T E R C 基因表达C I N 2h T E R C 基因表达宫颈癌h T E R C 基因表达图1 ，h T E R C 扩增的情况( D A P I 染色，x 1 0 0 )1 2、正常宫颈C - M Y C 基因表达C 1 N 2C - M Y C 基因表达宫颈癌C - M Y C 基因表达图2 ，C M Y C 扩增的情况( D A P I 染色，x 1 0 0 )3 、高危人乳头瘤病毒( H P H P V ) 在正常宫颈及各级宫颈病变中的感染情况及与h T E R C 基因、C M Y C 基因的相关性分析tH R - H P V 在各级宫颈病变中的
9、感染率，见表4 。利用S P S S l 9 0 分别计算h T E R C基因、C M Y C 基因扩增与H R - H P V 感染的相关性，P e a r s o n 相关系数分别为O 7 6 0 、0 7 1 8 ( P o 0 1 ) 。可见，h T E R C 基因和C M Y C 基因的表达与H R - H P V 均存在正相关的关系，证明上述两基因的扩增与H R - H P V 感染有关。表4 ，H P H P V 在正常宫颈及各级宫颈病变中的感染率1 3随着宫颈病变筛查方法的逐步完善及宫颈病变筛查人群的逐步普及，宫颈癌的发病率及病死率已经明显下降，但是全世界每年仍有大约4 9
10、 3 万的新发病例和2 7 4 万的死亡病例，因此，如何进一步扩大筛查面，提高早期诊断的质量及特异性、敏感性与预测性，简化筛查诊断流程与方案，避免不必要的重复检查与伤害是很有必要的。目前，临床上对宫颈癌前病变及宫颈癌筛查的常用方法包括宫颈液基薄层细胞学检查( T C T ) 、高危人乳头瘤病毒检测( H R H P V 检测) 、阴道镜下取活检及宫颈锥切后病理组织学检查等。目前这些检查都存在这相应的局限性和暂时性。宫颈T C T 与活组织检查只能判断目前宫颈病变的情况，宫颈T C T 检查虽然特异度较高5 1 ，且假阴性也较高，敏感性较低6 1 ，而人乳头瘤病毒的检测只能检测出是否感染了H R
11、 - I - I P V ，但不能判定以后宫颈病变的转向，在非持续性的船V 感染病例中并无过多意义，而持续性的H P V 感染患者最后也只有一部分人进展为C I N 3 或浸润性宫颈癌。利用F I S H 检测h T E R C 基因、C M Y C 基因的方法以宫颈脱落细胞为标本，经过离心洗脱制片等过程后，加入带有荧光的探针与目标染色体进行杂交，最终观察荧光杂交后信号的个数及比例来显示该个体细胞中是否存在扩增的h T E R C基因及C - M Y C 基因 7 1 0 该方法对患者无创、安全，而且因为采取较精确的染色体杂交技术，结果稳定而准确，已经成为检测h T E R C 基因的最重要方
12、法，但是国内尚未出现利用F I S H 方法检测C M Y C 基因的报道。宫颈浸润癌一般都是由不典型增生即宫颈上皮内瘤变( C 矾) 发展而来。有些C I N 最终会进展为宫颈癌，而有些则会自然转归，它们的这种区别引起了大家普遍的关注。H e s e l m e y e r - H a d d a d 等2 0 0 5 年采用F I S H 方法对5 9 例曾经进行过巴氏染色的病例进行h T E R C 基因扩增的研究硌1 ，7 0 的C I N 3 及宫颈浸润癌患者或者后来短时间内进展为浸润性宫颈癌的患者都伴有3 q 的扩增，但是在自然转归的患者人群中没有一个伴有3 q 的扩增，说明了3
13、q 的扩增，即定位于3 q 的h T E R C基因与C I N 进展为浸润性宫颈癌有着极其密切的关系。本实验除了对各小组两两比较之外还把C I N l 和C I N 2 合并成一组，与C I N 3 和宫颈癌合并的一组进行比较，1 4而且差异显著( P o 0 0 5 ) ，可认为h T E R C 基因的表达在C I N l 2 进展为C 烈3 甚至宫颈癌的过程中表达活跃，意义关键。人端粒酶基因h T E R C 基因的扩增与宫颈病变的关系已基本明确，中国2 0 1 0年末的多中心临床实验中表明1 9 1 , h T E R C 基因的测定在对比细胞学检测( T C T ) ，H R -
14、H P V 检测三种对宫颈病变的检测方法中，敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为8 0 7 ，8 3 8 ，8 2 8 ，8 1 9 ，均为8 0 以上，本次试验中也证实h T E R C 基因在正常宫颈，C I N l ，C I N 2 ，C I N 3 及宫颈癌中的阳性扩增率逐级升高，C I N l 、C 烈2 、C I N 3 及宫颈癌各组间均存在统计学意义( P o 0 5 ) ，且C 玳1 2与C 玳3 富颈癌两组之间存在显著的差异( P 0 0 0 5 ) 。在子宫颈癌及癌前病变中，H R - H P V 是最主要的病因之一，其致癌基因E 6 、E 7编码的原癌蛋白可上调端粒酶活性，在H R - H P V 激活端粒酶的过程中，h T E R C 亚单位表达上调可能是端粒酶的激活的主要途径。本次研究中检测h T E R C 基因与H R - H P V感染的相关性，P e a r s o n 相关系数为0 7 6 0 ，P 0 0 1 ，呈正相关，考虑H R - H P V 的感染促使基因整合扩增最终导致宫颈癌的形成。早在上个世纪9 0
