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1、 EDTA-K2EDTA-K2 致假性血小板减少分析致假性血小板减少分析【关键词关键词】 EDTA；假性；血小板计数摘要 目的：探讨 EDTA-K2 抗凝血时导致血小板计数假性减少现象及避免 措施。方法：对采用全自动血球计数仪检测，血小板计数值异常偏低的 561 例 标本，进行再次血涂片，观察血小板分布情况，对其中发现的涂片与计数明显 不符的 5 例患者再次抽血进行手工血小板计数、末梢血涂片观察血小板分布情 况、抽取肝素抗凝血进行血细胞计数等方法复检。结果：上述 5 例在后三种方 法复检时血小板计数在正常范围，与初次乙二胺四乙酸二钾(EDTA)抗凝血血细 胞分析仪所测血小板计数结果明显不符。结
2、论： EDTA 抗凝剂偶尔可导致血小 板发生聚集，引起血球计数仪计数血小板结果的假性减少，临床工作中应引起 同行们的高度重视。关键词 EDTA；假性；血小板计数在临床检验工作中，常发现有少数病人经全自动血细胞分析仪进行血细胞 分析时，血小板计数值异常偏低，临床反馈与临床症状严重不符，经手工计数 或其他方法复检血小板数又正常，为探讨其发生原因，本文对血常规检验中遇 到的 5 病例进行分析报道如下。1 1 资料和方法资料和方法1.1 资料来源对 2003 年 1 月2006 年 7 月间用全自动血球计数仪进行 血液分析时，血小板计数值异常偏低的 561 例(50109/L)，取同份血进行血 涂片观
3、察血小板分布情况，对其中发现的涂片血小板分布情况与计数值明显不 符的 5 例，初步考虑存在血细胞分析仪血小板计数结果与真值不符的现象，依 此做为符合研究条件的病例进行进一步研究。1.2 方法1.2.1. 对 2003 年 1 月2006 年 7 月间用我科门诊检验室全自动血球计 数仪进行血液分析时，血小板计数值低于 50109/L 的 561 例患者的标本，均 经二种仪器同时进行初检或复检，并取同份血进行血涂片观察血小板分布情况， 对其中发现的涂片血小板分布情况与计数值明显不符的 5 例，一方面与临床了 解临床症状表现，确定 5 例均无皮肤粘膜出血点、紫癜等明显出血征象、肝脾 淋巴结不大，另一
4、方面与患者协义：再次抽血进行 EDTA 抗凝血血球计数仪血液 分析、手工血小板计数、末梢血涂片观察血小板分布情况、抽取肝素抗凝血进 行血细胞计数等方法复检。同时进行了部分其它化验检查如凝血功能、纤维蛋 白溶解试验、肝功能、肾功能、血脂、血糖、血流变、血液免疫球蛋白、补体 含量、红细胞沉降率等，结果发现 EDTA 抗凝血在血球计数仪分析时再次出现血小板计数值明显降低，用其它方法复检血小板却在正常范围内，其余的检验项 目结果均未见明显异常。1.2.2 血细胞分析仪为美国贝克曼-库尔特 MAXM 五分类血细胞分析仪和 日本 SYSMEX XT-1800 五分类血细胞分析仪，试剂（溶血剂、稀释液、清洗
5、液） 为仪器配套试剂，全血校准液及全血质控物由四川迈克科技有限公司提供。1.2.3 血细胞计数严格按有关操作规程进行。2 2 结果结果 该组病例用全自动血球计数仪分析见血小板计数明显减少，仅 79/L33109/L，但临床表现均无明显出血征象，与血小板计数值明显 不符，肝脾淋巴结不大，在进一步检查过程中，均进行骨髓检查显示骨髓象无 明显异常表现，血涂片血小板分布不少。其他化验检查如凝血功能、纤维蛋白 溶解系列、肝肾功能、血脂、血糖、血流变、血清免疫球蛋白及补体含量、红 细胞沉降率等结果均属正常范围。经显微镜下手工血小板计数 PLT 结果均大致 正常、用肝素抗凝血做血小板计数结果也大致正常，末梢
6、血液直接血涂片显示 血小板数量不少，分布无明显异常，取 EDTA 抗凝血进行血涂片显示血小板明显 聚集成簇(每簇中血小板数大于 15 个)甚至成片(血小板数约 50 个100 个)， 极少见血小板单独存在。正是由于大量血小板聚集在一起，导致血小板计数的 假性减少。经显微镜下手工血小板计数 PLT 结果为 175109/L288109/L； 用肝素抗凝血做血小板计数结果为 11910/L188109/L；而直接末梢血 涂片见血小板分布大致正常，见表 1。表 1 5 例患者检验结果（略）3 3 讨论讨论3.1 由于 EDTA 抗凝剂对血液中细胞形态和血小板聚集性几乎均无影响， 用 EDTA 作为血
7、细胞分析仪进行细胞分析的抗凝剂已被 ICSH (Intemational Council for Standardization in Haematology，国际血液学标准委员会) 认 定，并得到广泛使用，但 EDTA 偶尔可导致血小板发生聚集，引起血小板假性减 少，Onder 等于 1980 年报道了 EDTA 可引起血小板聚集，出现假性血小板减少， 以后引起了人们的注意。3.2 EDTA 致血细胞分析仪血小板计数假性减少的病理机制，到目前为止 并不是特别清楚，可以确定的原因之一是：EDTA 致血小板假性减少的发生，是 在 EDTA 盐作为抗凝剂的前提下出现的免疫介导的血液中冷抗血小板自身
8、抗体， 究其原因，可能与血小板表面存在某种隐匿性抗原有关。Bragnani G 等 认为，EDTA 可导致血小板活化，因而改变血小板膜表面某种隐匿性抗原构象， 与存在于血浆中的自身抗体结合，激活 PLA、PLC、AA、ADP、5-TH 等活性物质。 这些活性物质又能活化血小板纤维蛋白原受体，促使血小板与纤维蛋白原聚集 成团，出现使血小板互相凝集现象，这种 EDTA 依赖的冷抗血小板自身抗体直接 作用于血小板膜糖蛋白 IIb/IIIa 上，同时，这种与血小板结合的自身抗体 Fc端可与单核细胞或淋巴细胞膜上 Fc 受体结合，出现卫星现象。另外，动脉粥样 硬化、血栓形成和炎症性血管疾病的发生、发展与
9、血小板在体内的激活程度、 单核细胞凋亡的状况相关。3.3 为了保证血小板计数的准确性，对结果有疑问的标本，可以采用不 同的方法复检。3.3.1 对于血小板计数值有疑问的标本，直接用 EDTA 抗凝血标本进行血 涂片经瑞氏染色后，显微镜下观察血小板分布情况，如见血小板大量聚集或血 小板分布并不减少(当然，这个工作需有一定的实践经验为基础)者，可视为可 疑病例并进一步复检确诊。3.3.2 Kunicka 等提出，可增加一项血涂片间接计数血小板的方法作为 补充。即为患者做末梢血涂片，经瑞氏染色后在厚薄适中处计数 1 000 个红细 胞并同时计数所见到的血小板，求得血小板/红细胞之比值。再将此比值红细
10、 胞数（红细胞数通过一般血液分析仪所得），求得血小板数。此法虽不十分精 确，但可以从另一侧面“间接”计数血小板，还可观察血小板的大小、形态、 有无聚集及聚集体大小等，本组研究中主要是采用此方法来初步确定血 小板计数是否有误差，是一种简单易行的方法。3.3.3 我们在研究中，换用非 EDTA 抗凝剂（本组用肝素）进行血小板计 数复检，尽管计数结果与手工结果仍存在明显差异，不能做为最后结果向临床 发放报告，但因排除了 EDTA 致血小板聚集的因素，对证实本症的诊断是一种非 常可取的方法。3.3.4 目前用于评价血小板计数准确性的“参考方法”是手工法血小板 计数，但手工法本身不但精密度较差，而且在镜
11、下也往往难以准确辨别血小板 与某些非特异性颗粒，准确性也不够高，但对于异常结果的复检，仍不失为一 种方便有效的方法。EDTA 致血小板假性减少发生率极低，约为 0.07%1%，但一旦发生，会导致临床进行大量的进一步检查，甚至可能 引起临床误诊、误治。因此，这种 EDTA 依赖性血小板减少症应该受到广泛重视。参考文献参考文献 Yamaguchi M, Mayumi M, Kasuya T. A Patient with EDTAdependent pseudo thrombocytopenia who underwent clipping surgery for a ruptured aneur
12、ysm. Excerpta Med Section 25.Hematol,1998，68(2):93. Nicola MD，Maurizia BD.EDTA-dependent Pseudo thrombocytopenia association with Antiplateletand Antiphospholipid Antibodies.Am J Clin Pathol，2002，103:10. 朱忠勇.准确计数血小板方法学研究进展.国外医学临床生 物化学与检验分册，2002，23(3)：132 Bragnani G,Bianconcini G,Brogna R,et al.Pseudo thrombocytopenia. Clinical Comment on 37 Cases.Minerva Med,2001，92(1):1317
