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1、第2 4 卷增刊 2 0 0 5 年1 1 月分析测试学报F E N X IC E S H IX U E B A O ( J o u r n a lo fI n s t r u m e n t a lA n a l y s i s )V 0 1 2 4N O V 2 0 0 5用G C M S 测定保健品中多种雌激素方法的研究杨景贤1 ，李波1 ，陈轶青2 ，徐军3 ，赵俊红3( 1 上海出入境检验检疫局，上海2 0 0 1 3 5 ；2 上海交通大学食品科学工程系，上海2 0 0 2 4 0 ；3 上海食品研究所，上海2 0 0 2 3 5 )市场上有许多保健食品，特别是儿童用的一些保健品往
2、往让家长们有一种想买又不敢买的顾忌。产生这种顾忌的最大因素是怕保健食品中含有性激素成分。目前尚未见对保健食品中多种雌激素成分测定方法的报道，本文研究了一种能同时测定多种雌激素的方法，用于测定保健食品中的雌激素成分。1实验部分1 1 试剂与材料所列引证来源的试剂均为适宜，其它来源的试剂如符合要求也可等同适用。除非另有规定，试剂均为A R 级。1 1 1标准物质和标准溶液己烷雌酚；己烯雌酚；双烯雌酚；雌酮；雌二醇；雌三醇标准品由S i g m a 公司( S t L o u i s ，U S A ) 提供。配制成适当的标准储备液、中间标准溶液及标准工作溶液。1 1 2 化学试剂甲醇，超纯水，醋酸铵
3、，乙醚，三氯甲烷，氢氧化钠，B S T F A + T M S 衍生剂，异辛烷等。 1 1 3 溶液0 2m o l L 醋酸铵缓冲液( p H5 2 0 2 ) ；1 0m o l L 氢氧化钠溶液；0 1m o L L 氢氧化钠溶液；洗脱液：叔丁基甲醚一甲醇( 体积比9 ：1 ) 。1 2仪器设备离心机；超声波浴槽；触摸式振荡器；旋转蒸发器；离心瓶；恒温箱；p H 计；O a s i sM A X 固相萃取柱( 6 0m g ，3m L ) 。依次用5 m L 甲醇和5 m L 超纯水活化柱，勿使柱干。气相色谱一质谱仪，H P 5 8 9 0 一H P 5 9 8 9 型。1 3 仪器条件
4、气相色谱：无分流进样方式，0 7 5m i n 打开分流阀；H P 一5 弹性石英毛细管柱( 3 0m 0 2 5m m0 2 5I x m ) 。进样口温度：2 6 0c C 。接口温度：2 8 0 。柱温：1 5 0 以1 5 m i n 升温至1 8 0 ( 保持1 0m i n ) 后以3 。C m i n 升温至2 3 0 ，再以3 0 。C r a i n 升温至3 0 0 ( 保持4m i n ) 。流量：1m L m i n 。质谱：E I 方式：7 0e V ，离子源温度：2 3 0o C ，四极杆温度：1 0 0 。E M 电压：高于调谐电压2 0 0V 。溶剂延迟时间：1
5、 0m i n 。1 4 实验步骤准确称取5 1 0g ( 或5m L ) 样品于离心管中。加入1 0m L0 2m o l L 的醋酸铵缓冲溶液，均质lm i n 。加1 0m L 2 乙醚用力混合lm i n ，于35 0 0r m i n 离心5m i n 。合并二次吸取的上层萃取液于常温下用氮气吹干。用三氯甲烷溶解残余物后加( 5m L 2 ) 1 0m o l L 氢氧化钠水溶液，用力混合1m i n ，于35 0 0r m i n 离心5m i n 。合并二次吸取的上层萃取液以备净化。用5m L 甲醇、水预洗o a s i sM A X 柱，加入样液后分别用5m L1 0m o l
6、 L 和5m L 0 1m o l L 氢氧化钠甲醇液一水( 体积比7 ：3 ) 溶液淋洗M A X 柱，抽于2m i n 后用5m L 叔丁基甲醚一甲醇( 体积比9 ：1 ) 溶液以2m L m i n 速率洗脱。洗脱液蒸发至干，加1 0 0 斗L 衍生剂( B S T F A + 1 T M C S ) 混匀后于7 0 恒温1h ，冷却后吹 千，加2 0 0 曲异辛烷混匀，供G c M S 检测。2 结果与讨论2 1雌激素S l M 方法的确立采用S I M 方法，雌激素的选择离子的确定见表1 。一4 7 塑丝鲞分析测试学报增刊表1 选择离子的确定目标化合物保留时间t r a i n选择离
7、子的质荷比( m z ) 离子碎片。3 9 9 M C H 3 + ，2 0 7 M 2 + c c 键解离所产生的离子，1 9 1 3 9 9 一 己烷雌酚2 6 3 5 +。一。( C H 3 ) 3 S i O C 6 H 4 C H 2 C H 2 C H 3 + ，1 7 9 ( C H 3 ) 3 S i O C 6 H 4 C H 2 +己烯雌酚双烯雌酚雌酮雌二醇2 6 7 22 6 8 93 0 6 83 1 0 34 1 2 M + ，3 9 7 E M C H 3 + ，3 8 3 M - C H 2 c H 3 + ，4 1 3 M 3 + 1 3 C ，2 9 S i
8、同位素贡献值4 1 0 M + ，3 9 5 M C H 3 + ，3 8 l M C H 2 c H 3 + ，4 1 1 ”C ，2 9 S i 同位素贡献值3 4 2 M + ，3 2 7 M c H 3 + ，2 5 7 M C 5 H q O +4 1 6 M + ，4 0 1 M C H 3 + ，3 2 6 M T M S O H + ，2 8 5 M T M S O C 3 H 5 一H +雌三醇3 2 3 75 0 4 M + ，4 8 9 M C H 3 + ，4 1 4 M T M S O H + ，3 8 6 4 1 4 一C O + 仅供参考2 2 线性范围、相关系数
9、及最低检出量6 种雌激素的线性范围，相关系数及最低检出量见表2 ，样品的加标回收率结果见表3 。表2 线性范围和最低检出量名称线性范围P ( 娜m L “)相关系数最低检出量m r i g己烷雌酚己烯雌酚双烯雌酚雄酮雌二醇O 0 2 2 O0 9 9 93O 0 2 2 O0 9 9 850 0 2 2 00 9 9 89O 2 2 OO 2 2 O0 9 9 900 9 9 870 0 20 0 20 0 2O 20 2雌三醇0 2 2 00 9 9 9l0 2表3 样品加标回收率测定结果2 3 讨论雌激素的骨架特征是：环为芳香环，没有c 。的角甲基。同时3 一位上均有一个酚性羟基，在1 7
10、 一位上有含氧功能基。由于其化学结构的类似性，使其在色谱柱上的保留时间很接近，不易分离。本方法对用G C M S S I M 同时测定二类结构类似的6 种雌激素的方法进行了探讨。图1 为6 种雌激素的总离子流色谱图；图2 为6 种雌激素在保健食品中添加回收的总离子流色谱图。添加水平为1 0n g g ，回收率分别为：己烷雌酚9 2 2 雌二醇8 0 3 ；雌三醇7 8 6 。见表3 。1 0o瓷52 5 7 53 1 7 t l m i n己烯雌酚8 5 6 ；双烯雌酚8 7 4 ；雌酮9 0 O I O弋瓷52 5 8 53 1 鹋“m i a图16 种雌激素标准的总离子流色谱图图26 种雌
11、激素在保健品中添加回收的总离子流色谱图参考文献： 1 李薇，张娟 2 林奕芝，张世英，4 1 1 - 4 8 - - 高效液相色谱法测定儿童保健食品中己烯雌酚的方法 J 江苏预防医学，2 0 0 1 ，等H P L C 法同时测定肉与肉制品中五种雌激素残留量 J 中国卫生检验杂志，1 2 ( 1 ) ：6 5 2 0 0 2 ，1 2 4 ：第6 期分析测试学报增刊T h eS t u d yo fM e t h o df o rt h eD e t e r m i n a t i o no ft h eE s t r o g e n si nt h eF e e d sb yG C M SY
12、 A N GJ i n g - x i a n l ，L IB e l ，C H E N GY i q i n 9 2 ，X UJ u n 3 ，Z H A OJ u n h o n 9 3( 1 S h a n g h a iE n t r y E x i tI n s p e c t i o nA n dQ u a r a n t i n eB u r e a u ，S h a n g h a i2 0 0 1 3 5 ，C h i n a ；2 S h a n g h a iJ i a o t o n gU n i v e r s i t y ，C o l l e g eo fA g r
13、 i c u l t u r ea n dB i o l o g y ，m a j o ri nF o o dS c j e n c ea n dE n g i n e e r i n g ，S h a n g h a i2 0 0 2 4 0 ，C h i n a ；3 S h a n g h a iF o o dR e s e a r c hI n s t i t u t e ，S h a n g h a i2 0 0 2 3 5 ，C h i n a )A b s t r a c t ：T os t u d yam e t h o df o rt h ed e t e r m i n a
14、 t i o no fh e x e s t r o l ，d i e t h y l s t i l b e s t r o l ，d i e n e s t r o l ，e s t r o n ，e s t r a d i e l ，e s t r i o lr e s i d u ei nf e e db yG C M S H e x e s t r o l ，d i e t h y l s t i l b e s t r o l ，d i e n e s t r o l ，e s t r o n ，e s t r a d i o l ，e s t r i o lw e r ee x
15、t r a c t e df r o mf e e ds a m p l ew i t he t h e r ，t h e nc e n t r i f u g a la n daG C M Sm e t h o dw a su s e dt oa n a l y z ea f t e rt h ee x t r a c tc l e a n e db yO a s i sM A X ，a n dr a m i f i c a t i o n sw a sa p p e a r a n c e G o o ds e p a r a t i o nw a sa c h i e v e di nt h e6k i n d so fe s t r o g e na n dt h es t a n d a r dcurves h o w i n gad i r e c tr a t i ob e t w e e nt h ec o n c e n t r a t i o na n dt h ep e a ka r e aw e r eo b t a i n e dw i t hS I M ，
