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1、KKME-专业医学搜索引擎 http:/ IIA 对肝癌细胞血管内皮生长因子表达的影响对肝癌细胞血管内皮生长因子表达的影响作者：符寒，和水祥，徐俊丽，赵 刚，王艳丽，任牡丹 作者单位：西安交通大学医学院第一附属医院消化内科，陕西西安 710061【摘要】 目的 观察丹参酮 IIA 对人肝癌 SMMC7721 细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用，及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响，探讨其可能的抗肿瘤作用机制。方法 体外培养人肝癌SMMC7721 细胞株，MTT 比色法观察细胞增殖抑制情况;荧光显微镜检测细胞凋亡;免疫细胞化学法和 ELISA 法分别检测细胞及细胞培养液中 VEGF 的表达情况。
2、结果 丹参酮 IIA 对肝癌细胞的生长有明显的抑制作用，并呈剂量依赖性，以 0.5mg/L 终质量浓度的抑制作用最明显，其 48h 的抑制率为 72.5%，与未加药对照组相比差异具有统计学意义(P55%为();染色阴性计 0 分，淡黄色计 1 分，棕黄色计 2 分，棕褐色计 3 分。两种积分相加，积分 01 分表示阴性(-)，积分 23 表示阳性(+)，积分 45 表示阳性()，积分 67表示阳性()。+视为低表达，和视为高表达，计算阳性细胞百KKME-专业医学搜索引擎 http:/ ELISA 法检测培养液中 VEGF 的浓度 实验与分组同上。48h 后留取培养悬液，1000r/min 离心
3、，取上清液分装入数个Eppendorf 管备用，同时对相应各组细胞进行计数。严格按照试剂盒说明进行操作。用酶标仪在 450nm 波长处检测吸光度(A)值，Curve Expert 专用软件分析并制定标准曲线，从而计算出样品中 VEGF 的浓度。1.7 统计学处理 实验数据均输入 SPSS11.5 软件进行统计学处理。计量资料以均值标准差(s)表示，两组间比较采用 t 检验，多组间比较采用单因素方差分析;计数资料采用秩和检验。以=0.05 为显著性检验水准。2 结 果2.1 丹参酮 IIA 对肝癌细胞增殖的影响 肝癌细胞经梯度浓度丹参酮 IIA 作用后，细胞生长受到不同程度的抑制，且这一抑制作用
4、表现出一定的浓度和时间依赖性(图 1)。2.2 细胞形态学的变化 荧光显微镜下可见，未加药对照组细胞膜完整，胞质丰富而饱满。0.5mg/L 丹参酮 IIA 作用组肝癌细胞体积缩小，细胞器出现肿胀，细胞核固缩，染色质可见边集于核膜下，有的细胞内还可见凋亡小体形成，核膜消失或突起呈小泡样，核质浓缩、碎裂。300mol/L 尼美舒利作用组中，可见细胞内出现凋亡小体，即细胞膜皱缩，细胞核浓聚甚至破裂呈大小不等、形态各异的细胞碎片，呈现出典型的凋亡细胞形态特征。除此之外，有KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 1 不同浓度、不同时间丹参酮 IIA 作用后 SMMC7721细胞的抑制率Fig.1 Th
5、e inhibition rate of SMMC7721 cell after treated with Tanshinone IIA for different concentrations and different time2.3 肝癌细胞中 VEGF 的表达 VEGF 蛋白主要定位于 SMMC7721 肝癌细胞质中，胞质显示棕黄色颗粒为阳性。未加药对照组中，阳性细胞数量多，染色深，可见深棕黄色颗粒(图 2A)。0.5mg/L 丹参酮IIA 作用组及 300mol/L 尼美舒利作用组中可见 VEGF 染色阳性细胞数明显减少，染色程度轻，呈浅黄色颗粒(图 2B、2C)。间质细胞的染色差异
6、性较大，不计入阳性细胞数。在未加药对照组的 VEGF高表达率为 80%，尼美舒利作用组中为 41.2%，0.5mg/L 丹参酮 IIA组中为 68.3%。经统计学检验，差异具有统计学意义(P0.05)。因此，我们推测丹参酮IIA 也有可能通过 COX2 途径间接下调 VEGF 的表达从而实现抗肿瘤作用。但有关 COX2 与 VEGF 在丹参酮 IIA 抗肿瘤过程中的确切作用及其相互关系仍有待进一步的实验研究。【参考文献】KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 丹参酮A 对人胃腺癌细胞SGC7901 增殖、凋亡的影响 J. 西安交通大学学报(医学版), 2007, 28(4):511525.2
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