《[硕博论文][免疫学]淋巴结组织和T细胞辐射损伤效应及机理的初步研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《[硕博论文][免疫学]淋巴结组织和T细胞辐射损伤效应及机理的初步研究（75页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、Y9 5 7 5 3 4军事医学科学院研究生学位论文独创性声明秉承军事医 学科学院严谨的学 风和科研作风， 本人声明所呈 交的学 位论文 是本人在导师 指导下独立 进行的 研究工作和取得的 研究成果， 除了文中 特别加以 标注和致谢之处外， 论文中不 包含其 他人已 经发表或撰写过的 研究成 果， 也 不 包 含 为 获得 笙 主鱼 星丑生 鱼或 其它 教育 机 构的 学 位 或证 书 而 使 用 过的材料。与我一同 工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已 在论文中 作了 明确的说明并表示了谢意。论 文 作 者 签 字 : 母 a -J -一 签 字 日 期 : )S P 年 止月 再日军事医
2、学科学院 研究生学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了 解 呈圣鱼a ft *9 p 1% 有关保留 、 使用学 位论文的规 定 。 特 授权 呈扣粗 !* It 可以 将 学 位论 文 的 全 部 或 部分 内 容 编 入有 关 数 据库进行检索，可以 采用影印 、 缩印 或扫描等复制手段保存、汇 编以 供查阅 和借阅。同 意将本学位论文的复印 件和磁盘送交国家有关 部门和 机构。( 保密学位论文在解密后适用本授权书)论文作者签字:指导教师签字:母 。 入签 字 日 期 : ) -0 0 6 年 上月 迎日 有 I % 签 字 日 期 :? “ 4年 上月 、日砚士研出生.抽盛文巴泊纽奴
3、和T 1 r 厄格封扭公故盛几机皿伪白步研九缩 略 词 表英文编写b c l - 2b a xmmhd川P BSTBSFB SF I TCDANMTTF CMDMS Or p mP IDCFH- DARh 1 2 3ROSM M P中文名B细胞琳巴 卿 白 血病一 2b c l 一相关X蛋白分钟小时天徽升礴酸盐缓冲液T r i s 级冲液胎牛血清异硫氛酸荧光素4 , 一 二氛基一苯基叫噪典哇蓝流式细胞仪二甲基亚砚每分钟转数供化丙咤二组荧光素双醋酸盐罗丹明1 2 3活性氧线粒体跨膜电位细胞色素c乙二胺四乙酸苯甲基徽醉氛十二烷基破酸钠牛血清白 蛋白AFcLS，yt川砚Ds弘 CEP公曰B硕士研究么
4、 李拉盛丈件匕抽色奴和Ta越书封扭公故盛几加，均白步研完淋巴结组织和T细胞辐射损伤效应及机理的初步研究( 摘要)目的和意义:本实验以小鼠 淋巴结淋巴细胞和正常人淋巴 母细胞作为研究对象，以6 G y 谢 线照射作为凋亡的诱发因 素，探讨凋亡的发生 及调控机理，以期能为淋巴 细胞凋亡信号转导机制提出一些新的观点和见解，为临床上肿瘤放疗患者和急性核事故病人放射线损伤的防治提供一条新的思路。材料和方法: 本实验从整体和离体两部分进行。 在整体实验中， 用C 5 7 B L 6小鼠 作为 研究对象， 于7线照后不同时间点检测淋巴 结组织和淋巴 细胞损伤效应、淋巴细胞凋亡率和凋亡相关基因及蛋白的变化规律
5、，为B c l - X L 调控机理的进一步 研究 提供依 据。 在体外实验中， 人A H H - 1 T 淋巴 细 胞经6 G y 喊照射后在不同时间点分别进行细胞凋亡率、存活率、细胞内 活性氧和线粒体跨膜电位的检测，然后用转基因细胞模型对B c l - X L 调控凋亡的分子机制进行探讨。结果: ( 1 ) 不同剂量丫 线照射后， 淋巴 结组织严重受损， 淋巴 细胞显著减少， 在6 - 1 2 G y 范围内 ， 淋巴 细胞死亡方 式以 凋 亡为 主， 1 5 - 2 0 G y 范围内以 凋亡和坏 死为 主; ( 2 ) 6 G y y 线照 射后淋巴 结 淋巴 细胞出 现 大量凋 亡，
6、 抗凋 亡基因 及其蛋白B c l - 2 表达下降， 促凋亡基因及其蛋白B a x 表达上升;( 3 ) 6 G y 7线照射后A H H - 1 细胞出现大量凋亡，细胞内活性氧水平升高;( 4 ) 值得注意的是， 用于检测线粒体跨膜电位的R h 1 2 3 荧光强度在凋亡早期没有发生改变; ( 5 )B c l - X L 能 有 效 抑 制 辐 射 诱发的T 淋巴 细 胞活 性 氧 产生 及C a s p a s e 3 的 切割 活 化。结论:( 1 ) 凋亡是中等和中等以上剂量辐射诱导淋巴结淋巴 细胞减少的主要原因; ( 2 ) 辐射诱导淋巴细胞发生凋亡与B c l - 2的表达增加
7、、 B a x 表达减少和活性氧水平的升高有关;( 3 ) 用于检测线粒体跨膜电 位的R h 1 2 3 荧光强度在凋亡早期没 有发生改 变， 有关机制尚需进一步 研究;( 4 ) B c l - X L 过表达能通过抑制活性 氧的 产生以 及凋 亡执行蛋白C as p as e 3 的 切割活 化等 方式有效 抑制细胞凋亡的发生。关 键词:电 离辐射，淋巴 结， 淋巴 细胞凋亡， B c l - X L , R O S , MM P砚士研完生争拉掩丈已抽妞傲和T*厄拓封翻舀改盛几执皿伪初，研允P r e l i mi n a r y s t u d y o n e f f e c t s a
8、 n d me c h a n i s ms o f r a d i a t i o n -i n d u c e d i n j u r y i n l y m p h n o d e a n d T c e l l s( A b s t r a c t )O b j e c t i v e T o e x p l o r e e f f e c t s a n d m e c h a n i s m s o f r a d i a t i o n - i n d u c e d in j u ry i n h o p et o b r i n g f o r w a r d n e w v
9、 i e w s o n a p o p t o t i c p a t h w a y o f l y m p h o c y t e s a n d n e w s t r a t e g i e so f p r e v e n t i o n o r t r e a t m e n t o f t h i s k i n d o f i n j u ry f o r p a t i e n t s d u e t o c l i n i c a l l yr a d i a t i o n t h e r a p y o r a c u t e n u c l e a r a c c
10、i d e n t s .Ma t e r i a l s a n d m e t h o d s T h e s e e x p e r i m e n t s w e r e p e r f o r m e d i n t w o l e v e l si n c l u d i n g a n i m a l s a n d c u l t u r e d c e l l s . A ft e r C 5 7 B L / 6 m i c e w e r e i r r a d i a t e d b yd i ff e r e n t d o s e s o f y - r a y s
11、, w e d e t e c t e d a p o p t o t ic i n d e x a n d c h a n g e s o f a p o p t o s i sa s s o c i a t e d g e n e s a n d t h e i r e x p r e s s e d p r o t e i n s a t d i ff e r e n t t i m e p o i n t s . H u m a nl y m p h o b l a s t o i d A H H - 1 c e l l s w e r e i r r a d i a t e d b
12、y a s i n g l e d o s e o f 6 G y . P a r a ll e ls t u d i e s w e r e c o n d u c t e d t o a s s e s s c e ll v i a b i l i t y , a p o p t o t i c in d e x , R O S a n d M M P T h e nw e u s e d B c l - X L o v e r e x p r e s s e d c e l l s ( A H H I - B C I - X L ) t o o b s e r v e t h e e f
13、f e c t s o f B c l - X Lo n r a d i a t i o n - i n d u c e d a p o p t o s i s .R e s u l t s ( 1 ) L y m p h n o d e t i s s u e w a s s e v e r e l y d a m a g e d a f t e r b e i n g i r r a d i a t e d .A p o p t o s i s w a s t h e m a j o r d e a t h p a t h w a y o f l y m p h o c y t e a t
14、 d o s e s r a n g i n g fr o m 6 - 1 2G y , w h i l e b o t h n e c r o s i s a n d a p o p t o s i s w e r e i m p o r ta n t d e a t h p a t h w a y s a ft e r a b o v e 1 5G y o f r a d i a t i o n . ( 2 ) R a d i a t i o n t r e a t m e n t i n d u c e d a d o s e - a n d t i m e - d e p e n d
15、e n t i n c r e a s eo f a p o p t o s i s i n l y m p h n o d e . B c l - 2 g e n e e x p r e s s i o n d e c r e a s e d a n d B a x g e n ee x p r e s s i o n i n c r e as e d . ( 3 ) R O S p r o d u c t i o n i n c r e as e d i n A H H - 1 c e ll s a ft e r 6 G y o fr a d i a t i o n . ( 4 ) N o
16、 t a b l y , t h e fl u o r e s c e n c e i n t e n s i ty o f R h 1 2 3 f o r m e a s u r i n g t h e M M Pd i d n o t c h a n g e a t a ll d e t e c t e d t i m e p o i n t s i n A H H - 1 a n d A H H l - B c l - X L c e l l s b yp o s t i r r a d i a t i o n . T h i s r e s u l t i s d i ff e r e n t fr o m t h o s e i n t h e p r e v i o u s r e p o rt s . ( 5 )R a d i a t i o n - i n d u c e d i n c r e a s e i n R O S a n d c l e a v a g e o f C a s p as e 3 w e r e p a r t i a l
