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1、KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 括约肌肌电活动实验模型的建立括约肌肌电活动实验模型的建立Oddi 括约肌肌电活动实验模型的建立作者：李虎城 董家鸿 陈飞 邹一平 李为民 作者单位：400038 重庆，第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所、中国人民解放军西南肝胆外科医院(李虎城、董家鸿、陈飞)； 100091 北京，解放军总医院第二临床部肝胆外科(邹一平、李为民) 【摘要】 目的 建立研究 Oddi 括约肌肌电活动的动物模型和实验方法。方法 将双极金属钩状电极通过浆膜层置入 Oddi 括约肌，记录不同条件干预下家兔的 Oddi 括约肌肌电活动信号，调整电生理实验参数并经放大、滤波及计
2、算机处理后，对其大小、波形、幅度进行分析。结果 不同条件干预下的家兔 Oddi 括约肌的肌电活动在波形、频率、幅度等方面均有明显的不同，具有明显的规律性。重复实验可得到相似的结果。结论 使用双极金属钩状电极配以合理的电生理实验参数调整可以稳定地采集到在体的家兔 Oddi 括约肌肌电活动信号。这为今后广泛、深入地研究 Oddi 括约肌肌电活动搭建了一个技术平台。 【关键词】 Oddi 括约肌； 电生理； 兔Establishment of myoelectricity model of sphincter of Oddi LI Hucheng, DONG Jiahong, CHEN Fei, Z
3、OU Yiping, LI Weimin.Institute of Hepatobiliary Surgery, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, ChinaKKME-专业医学搜索引擎 http:/ author: DONG Jiahong, Email: 【Abstract】 Objective To study the model establishment of myoelectricity of sphincter of Oddi (SO). Methods Double h
4、ook electrode was put into SO through the serous membrance. We recorded the myoelectricity signals of rabbit SO under different circumstances and analysed the size of wave amplitude, frequency and the wave form after adjusting electrophysiological parameters, signal magnification and filtration, com
5、puterized processing. Results The myoelectricity of rabbit SO under different circumstances had different wave amplitude, frequency and wave form, with obvious regularity. The same result could be obtained in repeated test. Conclusions Stable signal of myoelectricity of rabbit SO in vivo can be coll
6、ected by double hook electrode combined with appropriate electrophysiological parameters, which provides a technique platform for further study of myoelectricity of SO.【Key words】 Sphincter of Oddi; Electrophysiology; Rabbits尽管人类发现奥狄括约肌(Sphincter of Oddi，SO)已逾百年，但我们对 SO 的认识仍很肤浅。临床的诊断和治疗大多基于影像学检查和临床经
7、验，尚缺乏一种客观、直接、量化的诊断标准。基础研究明显滞后于临床。为了解 SO 的运动规律，我们经过近 3 年的反复摸索，使用双极金属钩状电极成功地采集到家兔在体的 SO 肌KKME-专业医学搜索引擎 http:/ SO 肌电活动的实验模型和实验方法，从电生理的角度对 SO 肌电活动进行了初步研究。1 材料与方法1.1 实验动物及分组健康成年家兔 32 只，由第三军医大学实验动物中心提供，体质量 2.03.5 kg，雌雄不分，随机分 4 组，每组 8 只。实验前 18 h 禁食但可自由饮水，实验前 4 h 禁水。第 1 组为空腹组，观察空腹状态下 SO 肌电活动的特点；第 2 组为进食组，经胃
8、造瘘管注入 50 ml 牛奶后，观察家兔 SO 肌电活动的特点；第 3 组为药物兴奋组，观察吗啡新斯的明激发实验(Nardi test 激发实验)后家兔 SO 肌电活动的特点；第 4 组为药物抑制组，观察阻断乙酰胆碱能神经元后家兔 SO 肌电活动的特点。实验环境温度维持在 2428 ，肛温维持35 左右。1.2 实验仪器及观察指标双极金属钩状电极采集到的肌电信号，传入 SWF1 高阻抗微电极放大器，信号放大后传入 RM6240 型多通道生理仪，然后进入计算机，经专门用于胃肠肌电信号采集处理的软件系统处理后储存。用肌电簇(myoelectronic activity of SO,MASO)及锋电
9、位(spike potentials of SO,SPSO)作为观察指标，分别记录其发生的频率和波幅，每次给药前均在示波状态下做出明显标记。每只动物连续记录120150 min。1.3 实验方法与步骤KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 麻醉与显露：家兔按 3.54.0 ml/kg 自耳缘静脉缓慢推注 25%乌拉坦，麻醉成功后取腹部正中旁切口约 5 cm，逐层进腹，肝下填塞纱布使肝脏上移，十二指肠变浅，将十二指肠上提至切口处并沿肠腔纵轴方向顺时针旋转 90120，将对系膜缘缝至腹壁固定，使十二指肠乳头充分显露。此时在幽门下方 1.5 cm 处浆膜下可清晰观察到凸出的乳白色乳头部，质地较硬，
10、大小约 0.3 cm0.3 cm。1.3.2 胃造瘘：第 2 组动物于胃体部行胃造瘘术，置入细导管约 3 cm，以灌注食物。1.3.3 双极钩状金属电极的制作：把 2 块有机玻璃打磨成6 cm0.8 cm0.5 cm 条块，沿纵轴打磨出两条平行凹槽，将 2 根长 12 cm、直径 0.35 mm 的不锈钢毫针分别放进两条平行凹槽，2 块有机玻璃间用黏合剂粘连；前端暴露金属电极约 5 cm，用于插入机体内测量肌电，无需绝缘；后端暴露约 1 cm，用于连接导联。在有机玻璃条块中段拦腰打磨出一凹槽，以备使用丝线悬吊。于毫针尖端 0.5 mm 弯曲 90呈钩状，有利于电极的固定。1.3.4 测试电极的
11、安置和肌电记录：将实验动物移入PBG1 型生理实验屏蔽柜，下肢及屏蔽柜接地以排除外界干扰。直视下将双极钩状金属电极通过浆膜层刺入十二指肠乳头，但不可刺入太深，防止刺透十二指肠肠壁。调整不锈钢万能支架使之保持一定张力和适当的角度；同样方法在十二指肠乳头下方 1.0、2.0 cm处分别放置双极钩状金属电极于十二指肠肠壁，用于记录十二指肠KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 1 h 浆膜表面喷洒少量生理盐水，防止表面干燥；调整电极的方向使之与地平面成 4560，并与膈肌运动方向一致。实验参数为：速度 500 ms/div、灵敏度 1.00 mv、时间参数 1 s、滤波频率 10 Hz，同时再次叠
12、加 10 Hz 高通滤波。2 结果2.1 胃肠道及呼吸肌肌电活动背景下 SO 肌电活动规律在没有滤波的情况下，双极钩状金属电极可以记录到 3 种肌电活动，即波幅较大、频率较慢的胃肠道肌电活动，约 68 次/min；波幅较小、频率较快的呼吸肌肌电活动，约 2535 次/min；规律、单发性的 SPSO 或 MASO，约 1620 次/min。将滤波频率降至 10 Hz 并叠加高通 10 Hz 数字滤波，再将扫描速度提高到 500 ms/div，前 2 种波形即可被滤过，同时基线变平，仅仅保留清晰的SPSO 或 MASO(图 1，2)。2.2 空腹状态下家兔 SO 肌电活动规律空腹状态下家兔 SO
13、 肌电活动表现为规律的、单发性的SPSO，频率 0.20.4 Hz，最大电位 250375 V，见图 3。2.3 进食后家兔 SO 肌电活动规律禁食 18 h 后，通过胃造瘘管注入 50 ml 牛奶，2 min 后家兔SO 肌电活动表现为规律的、间断的 MASO，频率 0.20.3 Hz，最大电位 350475 V，持续约 30 min 后，逐渐恢复为空腹状态下的SPSO，见图 4。2.4 药物激发后的家兔 SO 肌电活动规律KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 1 mg 吗啡和 1 mg 新斯的明后，数秒内 SO 肌电活动表现为数个长时间、不间断的 SPSO 组成的肌电串，频率 34次/
14、 min，最大电位 350625 V，持续约 3035 min，随后120150 min 内完全抑制，肌电活动基本消失；抑制期过后逐渐出现单个的 SPSO，频率 0.20.4 Hz，最大电位 150300 V。表现出兴奋-抑制-恢复的规律，见图 5。2.5 抑制胆碱能神经元后 SO 肌电活动规律空腹组家兔在观察记录 30 min 后，静脉给予山莨菪碱 1 mg，SPSO 随即消失，120 min 后，SPSO 逐渐恢复到空腹状态；胃造瘘管内注入牛奶和 Nardi test 激发实验前，静脉给予山莨菪碱 1 mg，上述肌电活动均不再出现，MASO 消失持续 120150 min 后，逐渐恢复到空
15、腹状态下 SPSO，见图 6。3 讨论有关 SO 相关疾病的诊治是目前临床面对的难题之一，对SO 的生理调控和疾病发生机制尚缺乏认识。目前国内对于 SO 的基础研究开展较少，基本是利用胆道测压的方法1 。由于胆道压力变化是 SO 肌电活动的一种表现，且影响因素较多，易造成系统误差。直接检测 SO 肌电活动较胆道测压更能直接、客观地反映其运动状态。由于 SO 肌电活动的研究在技术层面上存在很多困难，国内外的基础研究开展均较少且进展缓慢2-3 。国外有关 SO 肌电活动的研究基本上采用 SO 离体实验的方法，电极需要埋进 SO 内，研究方向亦局限于某一种药物或递质对 SO 肌电的影响。因此，建立KKME-专业医学搜索引擎 http:/ SO 肌电活动的在体动物模型和稳定的实验方法对开展SO 基础研究具有重要意义。3.1 实验动物的选择我们之所以选择家兔进行在体实验，主要基于以下考虑：(1)在体实验较离体实验更加接近生理状态，采集到的数据更加接近实际情况，具有较强的科学性。(2)实验需在屏蔽柜内进行，小动物较大动物更易于操作。(3)家兔的十二指肠完全游离，SO 容易暴露，避免了游离和切开十二指肠壁造成的十二指肠和 SO 血供的减少及生理状态的改变。(4)由于家兔肠壁较薄，在幽门
