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1、1212 味中药对灵芝菌液体培养的影响味中药对灵芝菌液体培养的影响摘摘 要要 观察中药对灵芝菌液体培养中生物量和胞外多糖的影响。采用将观察中药对灵芝菌液体培养中生物量和胞外多糖的影响。采用将 1212 味中味中药的水提取液药的水提取液分别加入培养基中接种培养分别加入培养基中接种培养, ,培养培养 7d7d 后测定生物量和胞外多糖。结果显示后测定生物量和胞外多糖。结果显示, ,板蓝板蓝根、茵陈、垂盆草根、茵陈、垂盆草 3 3 味中药能增加灵芝生物量和胞外多糖量味中药能增加灵芝生物量和胞外多糖量; ;丹参、半枝莲、苦丹参、半枝莲、苦参对灵芝多糖没有大的影响参对灵芝多糖没有大的影响, ,而对生物量有
2、明显地增加而对生物量有明显地增加; ;虎杖、黄芩、甘草、金银虎杖、黄芩、甘草、金银花、白花蛇舌草和连翘花、白花蛇舌草和连翘 6 6 味中药对生物量的增加有一定程度地抑制作用。味中药对生物量的增加有一定程度地抑制作用。关键词关键词 中药中药, ,灵芝灵芝, ,液体培养液体培养, ,多糖多糖灵芝是一味传统中药灵芝是一味传统中药, ,具有很好地增强具有很好地增强体质体质, ,抵御疾病的作用。现代研究证明抵御疾病的作用。现代研究证明, ,灵芝灵芝中所含的灵芝多糖和灵芝酸类物质能增强机中所含的灵芝多糖和灵芝酸类物质能增强机体的免疫力体的免疫力, ,有抑制肿瘤有抑制肿瘤, ,抗病毒抗病毒, ,保肝和抗保肝
3、和抗衰老作用衰老作用1717。为了定向地强化灵芝的疗。为了定向地强化灵芝的疗效效, ,我们将中药加到灵芝液体培养基中我们将中药加到灵芝液体培养基中, ,观察观察灵芝对中药成分的转化作用和中药成分对灵灵芝对中药成分的转化作用和中药成分对灵芝菌丝体生长及代谢产物的影响。文中初步芝菌丝体生长及代谢产物的影响。文中初步研究了研究了 1212 味中药对灵芝菌液体培养的影响味中药对灵芝菌液体培养的影响, ,观察中药对灵芝菌生长和灵芝多糖产生的促观察中药对灵芝菌生长和灵芝多糖产生的促进或抑制作用。进或抑制作用。1 1 材料与方法材料与方法111111 材材 料料灵芝菌灵芝菌: :江南大学生物工程学院保存的江
4、南大学生物工程学院保存的菌种。菌种。种子培养基种子培养基: :葡萄糖葡萄糖 2020 g/L,g/L,玉米粉玉米粉 1010g/L,g/L,麸皮粉麸皮粉 5g/L5g/L。基础培养基基础培养基: :葡萄糖葡萄糖 40g/L,40g/L,蛋白胨蛋白胨 4g/4g/L,MgSO40175g/L,KH2PO4115g/L,VB110L,MgSO40175g/L,KH2PO4115g/L,VB110mg/Lmg/L。中药材中药材: :购自无锡禾山药业集团。购自无锡禾山药业集团。112112 方方 法法1121111211 药汁煎制药汁煎制称取中药材称取中药材( (已切片已切片),),加适量水浸泡加适量
5、水浸泡 1 1h,h,在电炉中煎熬在电炉中煎熬, ,调整适当的加热速度调整适当的加热速度, ,保持保持温和的沸腾状态。煮沸温和的沸腾状态。煮沸 30min,30min,倒出药汁倒出药汁, ,补补加适量冷水于药渣中加适量冷水于药渣中, ,再煮沸再煮沸 20min,20min,倒出药倒出药汁。合并药汁汁。合并药汁, ,用用 8 8 层纱布过滤层纱布过滤, ,药汁用于灵药汁用于灵芝液体培养。芝液体培养。1121211212 接种培养接种培养将药汁倒入将药汁倒入 250mL250mL 三角瓶中三角瓶中, ,加入基础加入基础培养基培养基, ,溶解。溶解。121e121e 灭菌灭菌 30min30min。
6、冷却后接。冷却后接入灵芝液体种入灵芝液体种, ,接种量接种量 10%10%。摇瓶条件。摇瓶条件: :三三角瓶角瓶 250mL,250mL,装液量装液量 80mL,80mL,温度温度 30e,30e,转速转速150r/min,150r/min,培养时间为培养时间为 7d7d。1121311213 生物量计算生物量计算将培养液离心将培养液离心, ,沉淀用水洗沉淀用水洗 2 2 次次, ,再离再离心心, ,沉淀在沉淀在 105e105e 烘干至恒重烘干至恒重, ,称重得生物称重得生物量。量。1121411214 胞外多糖计算胞外多糖计算将经离心所得的发酵上清液合并将经离心所得的发酵上清液合并, ,减
7、压减压浓缩到发酵液体积的浓缩到发酵液体积的 2/53/5,2/53/5,加加 95%95%乙醇乙醇至乙醇含量为至乙醇含量为 30%,30%,在冰箱中静置在冰箱中静置 2424 h h。离。离心心, ,弃去沉淀弃去沉淀, ,上清液再加上清液再加 95%95%乙醇至乙醇乙醇至乙醇含量达到含量达到 60%,60%,在冰箱中静置在冰箱中静置 2424 h h。离心。离心, ,沉淀用沉淀用 60%60%乙醇水溶液分散乙醇水溶液分散, ,再离心再离心, ,弃去弃去上清液上清液, ,以此法清洗沉淀去除沉淀中夹带的以此法清洗沉淀去除沉淀中夹带的少量单糖和低聚糖。沉淀洗少量单糖和低聚糖。沉淀洗 2 2 次。再次
8、离心次。再次离心后的沉淀用蒸馏水溶解并定容到后的沉淀用蒸馏水溶解并定容到 2525 mL,mL,然然后用苯酚硫酸法测多糖含量。后用苯酚硫酸法测多糖含量。3838食品与发酵工业食品与发酵工业 FoodFood andand FermentationFermentation IndustriesIndustries Vol129Vol129 No132No132 结结 果果211211 中药对生物量的影响中药对生物量的影响2111121111 不同品种中药影响的比较不同品种中药影响的比较培养基中分别加培养基中分别加 1212 味不同的中药味不同的中药, ,接种接种培养后所得生物量如表培养后所得生物
9、量如表 1 1 所示所示, ,其中的对照其中的对照样为在不添加中药的基础培养基培养的结样为在不添加中药的基础培养基培养的结果果, ,其他条件相同。由表其他条件相同。由表 1 1 可见可见, ,加黄芩、虎加黄芩、虎杖、连翘、金银花、甘草的样品生物量比对照杖、连翘、金银花、甘草的样品生物量比对照样低得多样低得多, ,说明这些中药对灵芝菌的生长可说明这些中药对灵芝菌的生长可能存在抑制作用能存在抑制作用; ;板蓝根、丹参、半枝莲、垂盆板蓝根、丹参、半枝莲、垂盆草样品的生物量比对照样高得多草样品的生物量比对照样高得多, ,说明这些说明这些中药对灵芝菌的生长可能有一定的促进作中药对灵芝菌的生长可能有一定的
10、促进作用。用。表表 1 1 中药对灵芝的生物量的影响中药对灵芝的生物量的影响对对 照照R1isatidisH1artenisiaeScopariaeR1salviaeMiltiorrhizaeH1scutellariaeBarR1isatidisH1artenisiaeScopariaeR1salviaeMiltiorrhizaeH1scutellariaeBarbataeR1sophoraeFlavescentisH1sedibataeR1sophoraeFlavescentisH1sedi中药用量中药用量102/g#mL-10102/g#mL-10 12151215 12151215 12
11、151215 12151215 12151215 12151215生物量生物量102/g#mL-11178102/g#mL-11178 31313131 11911191 21552155 21302130 21112111 21512151R1R1scutellariaescutellariaeRhizomaRhizoma polygonipolygoniCuspidatiCuspidatiFructusFructusforsythiaeforsythiaeFlosFlosloniceraeloniceraeH1oldenlandiaH1oldenlandiaDiffusaDiffusaR1
12、glycyrrR1glycyrrhizaehizae中药用量中药用量 102/g#mL-11215102/g#mL-11215 12151215 12151215 12151215 12151215 12151215生物量生物量102/g#mL-10119102/g#mL-10119 01340134 01480148 01580158 11161116 01230123注注:R1isatidis:R1isatidis:板蓝根板蓝根;H1artenisiaeScopariae:;H1artenisiaeScopariae:茵陈茵陈; ;R1salviaeMiltiorrhizae:R1salv
13、iaeMiltiorrhizae:丹参丹参;H1ScutellariaeBarbatae:;H1ScutellariaeBarbatae:半枝莲半枝莲;R1;R1sophoraeFlavescentis:sophoraeFlavescentis:苦参苦参;H1sedi:;H1sedi:垂盆草垂盆草;R1scutellariae:;R1scutellariae:黄芩黄芩;Rhizoma;Rhizoma polygoniCuspidati:polygoniCuspidati:虎杖虎杖;Fructus;Fructus forsythiae:forsythiae:连翘连翘;Flos;Floslonic
14、erae:lonicerae:金银花金银花;H1oldenlandiaDiffusa:;H1oldenlandiaDiffusa:白花蛇舌草白花蛇舌草;R1glycyrrhizae:;R1glycyrrhizae:甘草。甘草。2111221112 中药用量的影响中药用量的影响在基础培养基相同的条件下在基础培养基相同的条件下, ,改变中药改变中药的用量的用量, ,灵芝的生物量也受到影响。结果如灵芝的生物量也受到影响。结果如图图 1(a1(a、b b、c)c)所示。所示。从图从图 1 1 可见可见, ,半枝莲、苦参和垂盆草半枝莲、苦参和垂盆草 3 3 味味中药未表现出对灵芝生物量有抑制作用的现中药
15、未表现出对灵芝生物量有抑制作用的现象象, ,随着中药量的增加生物量也增加。说明随着中药量的增加生物量也增加。说明这这 3 3 味中药的加入有利于灵芝菌的生长。这味中药的加入有利于灵芝菌的生长。这种促进作用种促进作用, ,可能是由于中药提供了额外的可能是由于中药提供了额外的营养营养, ,也可能由于中药中的某些成分对灵芝也可能由于中药中的某些成分对灵芝菌的生长起了刺激作用。对于其他中药菌的生长起了刺激作用。对于其他中药, ,随随着用量的增加生物量均下降着用量的增加生物量均下降, ,表现为一定程表现为一定程度的抑制作用。但是度的抑制作用。但是, ,加茵陈、丹参、板蓝根加茵陈、丹参、板蓝根的样品虽然有
16、随中药量增加生物量下降的趋的样品虽然有随中药量增加生物量下降的趋势势, ,生物量的绝对值却比不加中药的对照样生物量的绝对值却比不加中药的对照样高。因此高。因此, ,这这 3 3 味中药对灵芝菌的生长可能味中药对灵芝菌的生长可能同时存在促进因子和抑制因子同时存在促进因子和抑制因子, ,促进因子使促进因子使生物量比对照样的大生物量比对照样的大, ,而中药用量的增加使而中药用量的增加使抑制因子的作用增强抑制因子的作用增强, ,使得生物量下降。加使得生物量下降。加黄芩、虎杖黄芩、虎杖 2 2 味中药的发酵液生物量比对照味中药的发酵液生物量比对照样小得多样小得多, ,说明抑制作用较强。白花蛇舌草说明抑制作用较强。白花蛇舌草在用量达到在用量达到 121510-2g/mL121510-2g/mL 时有很强的抑时有很强的抑制作用制作用, ,在在 612510-2g/mL612510-2g/mL 以下的用量却以下的用量却)s)s)茵陈茵
