生化药物生产项目报告书

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1、姓名：姓名： 朱朱 鹏鹏 飞飞学号：学号： 20120409412012040941班级：生物技术班级：生物技术 12111211生化药物生产生化药物生产 项目报告书项目报告书目目 录录项目一：核酸的生产项目一：核酸的生产1.1. 资料查找资料查找2.2. 实验方案制定实验方案制定3.3. PPTPPT 展示展示4.4. 实验报告实验报告5.5. 实验过程与结果图片展示实验过程与结果图片展示项目二：项目二：SODSOD 的生产的生产1.1.资料查找资料查找2.2.实验方案制定实验方案制定3.3.PPTPPT 展示展示4.4.实验报告实验报告5.5.实验过程与结果图片展示实验过程与结果图片展示项

2、目三：卵磷脂的生产项目三：卵磷脂的生产1.1.资料查找资料查找2.2.实验方案制定实验方案制定3.3.PPTPPT 展示展示4.4.实验报告实验报告5.5.实验过程与结果图片展示实验过程与结果图片展示项目四：香菇多糖的生产项目四：香菇多糖的生产1.1.资料查找资料查找2.2.实验方案制定实验方案制定3.3.PPTPPT 展示展示4.4.实验报告实验报告5.5.实验过程与结果图片展示实验过程与结果图片展示1.1.资料查找资料查找1.11.1 核酸相关知识核酸相关知识1.1.11.1.1 核酸简介核酸简介由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动物、植物细胞

3、、微生物内、生物体内核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸，其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。在一定理化因素作用下，核酸双螺旋等空间结构中碱基之间的氢键断裂，变成单链的现象称为变性。引起核酸变性的常见理化因素有加热、酸、碱、尿素和甲酰胺等。变性DNA 在适当条件下，可使两条分开的单链重新形成双螺旋 DNA 的过程称为复性1.1.21.1.2 种类种类核酸同蛋白质一样，也是生物大分子。核酸的相对分子质量很大，一般是几十万至几百万。核酸水解后得到许多核苷酸，实验证明，核苷酸是组成核酸的基本单位，机组成核酸分子的单体。一个核苷酸分子是由一分子含氮的碱基（称碱基） 、一分子五碳糖（即五碳糖）和一分子

4、磷酸组成的。根据五碳糖的不同可以将核苷酸分为脱氧核糖核苷酸（DNA）和核糖核苷酸（RNA） 。DNA 存在多级结构DNA 的一级结构即由核苷酸聚合而成的生物大分子。DNA 二级结构即双螺旋结构（double helix structure） 。DNA 三级结构是指 DNA 链进一步扭曲盘旋形成超螺旋结构。DNA 的四级结构DNA 与蛋白质形成复合物1.1.31.1.3 作用作用核酸在蛋白质的复制和合成中起着储存和传递遗传信息的作用。核酸不仅是基本的遗传物质，而且在蛋白质的生物合成上也占重要位置，因而在生长、遗传、变异等一系列重大生命现象中起决定性的作用。DNA 是储存、复制和传递遗传信息的主要

5、物质基础，RNA 在蛋白质合成过程中起着重要作用，其中转运核糖核酸，简称 tRNA，起着携带和转移活化氨基酸的作用；信使核糖核酸，简称 mRNA，是合成蛋白质的模板；核糖体的核糖核酸，简称 rRNA，是细胞合成蛋白质的主要场所。A.A.积极作用积极作用核酸在实践应用方面有极重要的作用，现已发现近 2000 种遗传性疾病都和 DNA 结构有关。如人类镰刀形红血细胞贫血症是由于患者的血红蛋白分子中一个氨基酸的遗传密码发生了改变，白化病患者则是 DNA 分子上缺乏产生促黑色素生成的酪氨酸酶的基因所致。肿瘤的发生、病毒的感染、射线对机体的作用等都与核酸有关。70 年代以来兴起的遗传工程，使人们可用人工

6、方法改组 DNA，从而有可能创造出新型的生物品种。如应用遗传工程方法已能使大肠杆菌产生胰岛素、干扰素等珍贵的生化药物。核酸氧化分解后变成了磷酸和碱基的嘌呤和嘧啶，目前还没有发现嘧啶有何害处，但嘌呤是导致人类尿酸增高和痛风的主要原因。B.B.消极作用消极作用核酸氧化分解-生成嘌呤-嘌呤在肝脏进一步氧化成为（2，6，8-三氧嘌呤）又称为尿酸，尿酸盐沉积到关节腔等组织引起痛风发作。因此，核酸不是越多越好，同时，这也说明了为什么中老年易患痛风，因为年纪来了，大量的细胞死亡，而细胞内有大量的核酸，生成嘌呤，再生成尿酸，从而导致痛风发作。防治好痛风就是要防止核酸被氧化。1.1.41.1.4 核酸的组成核酸

7、的组成核酸同蛋白质一样，也是生物大分子。核酸的相对分子质量很大，一般是几十万至几百万。核酸由 C、H、O、N、P，5 种元素组成。核苷酸是组成核酸的基本单位，是组成核酸分子的单体，核酸是核苷酸通过 3 ，5磷酸二酯键连接的。单个核苷酸是由含氮有机碱（称碱基） 、戊糖（即五碳糖）和磷酸三部分构成的。碱基：构成核苷酸的碱基分为嘌呤和嘧啶二类。嘌呤主要指腺嘌呤（A）和鸟嘌呤（G） ，DNA 和RNA 中均含有这二种碱基。嘧啶主要指胞嘧啶（C）胸腺嘧啶（T）和尿嘧啶（U） ，胞嘧啶（C）为DNA 和 RNA 共有，而胸腺嘧啶（T）只存在于 DNA 中，尿嘧啶（U）则只存在于 RNA 中。1.1.51.

8、1.5 DNADNA 与与 RNARNA 的区别的区别1.21.2 核酸的制备核酸的制备核酸几乎存在所有生物的细胞中，所以制备的原料多种多样，采用的生物材料不同，制备的方法也会有所不同，但基本原理都是一样的。首先破碎细胞，释放细胞内容物，即释放出核酸，常见的破碎细胞的方法有组织粉碎机、研钵、超声波、酶处理、冻融法；然后除杂，应该清除的杂质主要包括三部分（1）非核酸的大分子污染物：蛋白质、多糖及脂类物质等 （2）非需要的核酸分子：分离某一特定的核酸分子时，其它的核酸分子皆为杂质；（3）加入的有机溶剂和某些金属离子最后分理出核酸，当然分离出核酸后，还可以进一步纯化。沉淀是分离核酸的最常用的方法常用

9、的盐类有醋酸钠、醋酸钾、醋酸铵、氯化钠、氯化钾及氯化镁；常用的有机溶剂则为乙醇、异丙醇和聚乙二醇，我们通常采用乙醇沉淀核酸。核酸沉淀常常含有少量共沉淀的盐，需用70%75%的乙醇洗涤去除核酸DNARNA名称脱氧核糖核酸核糖核酸结构规则的双螺旋结构通常呈单链结构基本单位脱氧核糖核苷酸核糖核苷酸五碳糖脱氧核糖核糖A（腺嘌呤）A（腺嘌呤）G（鸟嘌呤）G（鸟嘌呤）C（胞嘧啶）C（胞嘧啶）含氮碱基T（胸腺嘧啶）U（尿嘧啶）分布主要存在于细胞核，少量存在于线粒体和叶绿体主要存在于细胞质功能绝大多数生物的遗传物质，携带遗传信息，在生物体的遗传、变异和蛋白质的生物合成中具有极其重要的作用作为遗传物质：只在 R

10、NA 病毒中；不作为遗传物质：在 DNA 控制蛋白质合成过程中起作用。mRNA 是蛋白质是合成的直接模板、tRNA 能携带特定氨基酸、rRNA 是核糖体的组成成分；催化作用：酶的一种1.31.3 核酸的检测核酸的检测1.3.11.3.1 定性检测定性检测RNARNA 和和 DNADNA 的显色的显色D核糖核酸浓盐酸地衣酚反应显绿色D2脱氧核糖核酸酸二苯胺反应显蓝紫色1.3.21.3.2 DNADNA 的定量和纯度测定的定量和纯度测定常用的测定方法有常用的测定方法有：紫外分光光度法紫外分光光度法（此法要求核酸纯度很高，1 个吸光度值相当于 50g mL 双螺旋 DNA； 除了定量测定以外还可进行

11、核酸纯度的检测，A260 A280 比值，纯的 DNA 为 18，RNA 为 20，样品中含有蛋白质和苯酚时，A26A280 比值降低。 ）定糖法（定糖法（DNA 糖部分为脱氧核糖，RNA 糖部分为核糖，分别可以进行二苯胺显色法和地衣酚显色法） ；定磷法定磷法（测定核酸的磷酸部分） 。这里着重二苯胺显色紫外分光光度法（1 1） 原理原理DNA 在酸性条件下其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂，生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸，而 2脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成 羟基酮基戊糖，与二苯胺试剂反应生成蓝色物质，在 595nm 波长处有最大吸收。DNA 在 40400g 范围内，光吸收与 DNA

12、的浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应灵敏度。（2 2）DNADNA 吸光度的测定吸光度的测定A260 测定：以 H2O 作为空白，取上清测 A260 值后确定稀释倍数，使 A260 值在 20 左右（DNA 此时的浓度约为 100g mL。 （由于二苯胺法的测定范围是 40400g mL DNA，所以 DNA 浓度如果太小会影响测定结果） 。A280 测定：A260 A280 比值计算。纯的 DNA 为 18，RNA 为 20。如果样品中混有 RNA，则比值大于 18；如果样品中混有蛋白质，则比值小于 18。所用的 DNA 溶液为前面提取后溶解的 DNA 样品。（3 3） DNA

13、DNA 标准曲线的制作和样品测定标准曲线的制作和样品测定加完各试剂后， 充分混匀。于 60水浴中保温 1h，冷却后于 595nm 波长处以 0 管为空白调零，测定各管光密度（OD595） 。以 DNA 的含量为横坐标，光密度（吸收值）为纵坐标，绘制标准曲线。 （注：待测溶液中的 DNA 含量应调整至标准曲线的可读范围内。样品 1 和样品 2 为不同稀释倍数的 DNA 溶液。 ）（4 4） DNADNA 含量计算含量计算以样品的光密度，根据标准曲线计算出相对应 DNA 含量，并同紫外法测定的值进行比较。 （注：二苯胺试剂具有腐蚀性， 且二苯胺反应产生的蓝色不易褪色，操作中应防止洒出；比色时，比色

14、杯外面一定要擦干净。 ）2.2.方案制定方案制定2.12.1 核酸的制备核酸的制备（1 1）实验原理）实验原理在溶解细胞，核蛋白释放后，根据 DNA 不溶于 0.14mol/L NaCl 溶液而 RNA 可溶的特性将 DNA 核蛋白与 RNA 核蛋白分离，得到粗品。粗品中主要成分为 DNA 和蛋白质，用氯仿、异戊醇进行抽提，可除去其中的蛋白质。再加入一定量的异丙醇或乙醇，较长的基因组 DNA 分子将形成纤维状絮团漂浮其中，而质粒或细胞器中的小分子 DNA 则只能形成颗粒状沉淀物附着在容器壁或底部，用玻棒挑出纤维状絮团即可达到比较满意的分离效果，得到纯度较高的基因组 DNA。上清液中的 RNA

15、同样也可以采用相同的方法提取，先用氯仿、异戊醇除去其中的蛋白质，再加入异戊醇或乙醇离心得到RNA 沉淀。（2 2）实验原料、试剂、器材与仪器）实验原料、试剂、器材与仪器实验原料：新鲜猪肝实验试剂：95%乙醇、氯仿、异戊醇，固体氯化钠等器材与仪器：可见光光度计、紫外分光光度计、冷冻离心机、水浴锅、烧杯、量筒、玻璃棒、三角瓶、离心管等。（3 3）操作步骤）操作步骤 取新鲜猪肝少许，剪碎后洗去血水，加入 2 倍组织重的 0.14mol/LNaCl-0.5mol/L 柠檬酸混合液，用组织粉碎机粉碎，制得匀浆 取 10ml 匀浆装入离心管，平衡后于 3500r/min 离心 15min，保留上层 RNA

16、 提取液留着备用； 在沉淀加入 1mol/LNaCl，再次于 3500r/min 离心 10min； 取上清液，加入氯仿和少许异戊醇 3500r/min 离心 10min，得到蛋白质沉淀，除去蛋白质 取上清液加 1 到 2 倍体积的 95%乙醇搅拌，得到 DNA 沉淀 在保留的上层 RNA 提取液中，加入氯仿和少量异戊醇，充分振荡，然后 3500r/min 离心 10min,得到蛋白质沉淀 取上清液，加入 1 到 2 倍体积 95%乙醇，离心，可得到 RNA 沉淀2.22.2 核酸的检测核酸的检测（1 1）RNARNA 的鉴定，地衣酚显色法的鉴定，地衣酚显色法 RNA 与地衣酚会发生显色反应，溶液变为绿色，且颜色越深，说明 RNA 含量越多。将 RNA 沉淀用 2mL 蒸馏水溶解，然后转移至 2 只试管中，每只 1mL。其中一只试管中加入 3mL 地衣酚试剂，然后置沸水中 20min