《酶和血红蛋白的提取和分离学案 2》由会员分享，可在线阅读，更多相关《酶和血红蛋白的提取和分离学案 2（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1选修一选修一 专题专题 4 酶的研究与应用酶的研究与应用一、关于酶活性一、关于酶活性1. 什么是酶活性？酶活性是指 。2. 酶活性的指标：酶活性的高低可以用在一定条件下，酶所催化的某一化学反应的 来表示。3. 酶的反应速度：酶的反应速度用单位时间内、单位体积中 或来表示。4. 影响酶活性的因素： 。 5. 影响酶促反应的因素： 。2 2、果胶与果胶酶果胶与果胶酶1. 果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分之一，它是由 聚合而成的一种高分子化合物， 溶于水。2. 果胶酶并不特指某一种酶，而是分解果胶的一类酶的总称。包括 酶、酶和 酶等。3 3、固定化酶和固定化细胞固定化酶和固定化细胞1. 固
2、定化酶和固定化细胞技术是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术。固定化酶技术的优点是： 。2. 固定化酶和固定化细胞的比较：（1）一般来说，更适合采用化学结合和物理吸附法固定化的是： （2）一般来说，更适合采用包埋法固定化的是： （3）从操作角度来考虑，哪种方法更容易： （4）哪种方法对酶活性影响更小： （5）固定化细胞固定的是一种酶还是一系列酶： （6）若将微生物的发酵过程变成连续的酶反应，应选用哪种方法： （7）如果反应物是大分子物质，采用哪种方法： (见练习 1)2四、制备固定化酵母细胞的实验操作四、制备固定化酵母细胞的实验操作酵母细胞的活化配置 CaCl2溶液配制 溶液海藻
3、酸钠溶液与酵母细胞混合固定化酵母细胞 选修一选修一 专题专题 5 课题课题 3 血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离蛋白质的各种特性的差异，如 、 、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等，可以用来分离不同种类的蛋白质。一、凝胶色谱法一、凝胶色谱法1、概念：也称_，是根据_分离蛋白质的有效方法。2、原理：相对分子质量较 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较 ，移动速度_；相对分子质量较_的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外移动，路程_，移动速度_。(见练习 2)二、电泳二、电泳1、概念：_在电场作用下发生_的过程。2、原理：利用待分离样品中各种分子_以及分子本身的_、_不同，使带
4、电分子产生不同的_。3、常用的电泳方法：_和_。在测定蛋白质分子量时通常使用_；测定 DNA 时通常使用_。(见练习 3、9/11)三、血红蛋白的提取和分离实验三、血红蛋白的提取和分离实验1、样品处理和粗分离： 红细胞洗涤。目的：_。洗涤用的试剂是_ _释放：在_和 作用下，红细胞破裂释放血红蛋白。 分离血红蛋白溶液：离心后溶液分 4 层，从上往下数，第_层是血红蛋白水溶液；用_分出该层。 _：血红蛋白溶液装入_，将其放入 20mmol/L_中透析 12h，除去血红蛋白溶液中相对分子质量_的杂质。32、纯化：用_法分离相对分子质量不同的蛋白质。步骤如下：凝胶色谱柱的制作凝胶色谱柱的装填样品的加
5、入和洗脱3、纯度鉴定 (见练习 48)归纳总结一：高中生物提到的分离提纯物质的几种方法：归纳总结一：高中生物提到的分离提纯物质的几种方法： 方法名称原理应用所在章节离心获得细胞膜 获得各种细胞器 分离外壳蛋白和大肠杆菌 血红蛋白粗提取必修一第三章第一节 必修一第三章第三节 必修二第三章第一节 选修一第五章课题三层析法 （纸层析）必修一第五章第三节透析法根据相对分子质量分离物质血液透析 猪血红蛋白的粗分离必修一第三章 P50 选修一第五章课题三凝胶色谱法根据相对分子质量分离物质哺乳动物血红蛋白的提取选修一第五章课题三电泳蛋白质分离、核酸等的分 离选修一第五章课题三DNA 粗提取选修一第五章课题一
6、归纳总结二：高中实验中用到血的几个实验归纳总结二：高中实验中用到血的几个实验 实验用到哪种动物血用这种动物血的原因所在章节细胞膜的制备必修一第三章第一节DNA 粗提取选修一第五章课题一血红蛋白的提取 和分离选修一第五章课题三归纳总结三：高中实验中几种破碎细胞的方法归纳总结三：高中实验中几种破碎细胞的方法 实验用哪种试剂破碎细胞原因动物细胞的破碎：细 胞膜的制备动物细胞的破碎：血 红蛋白的提取和分离植物细胞的破碎：绿 叶中色素的提取和分 离归纳总结四：高中实验需要用到归纳总结四：高中实验需要用到 HClHCl 或酒精的实验及其作用或酒精的实验及其作用 实验需要 HCl？需要酒精？浓度？作用注意事
7、项：样品加到色谱柱的 。加入 到适当高度，并连接缓冲液洗脱瓶。待 时，用试管收集流出液。4花生中脂肪的分布不需要50%酒精 观察 DNA 和 RNA 在 细胞中的分布8%HCl不需要绿叶中色素的提取 和分离不需要提取色素观察有丝分裂15%HCl95%酒精两者 1:1 的体积比混合成解离液，目 的是：DNA 粗提取95%冷酒精 归纳总结五：高中阶段与颜色有关的实验归纳总结五：高中阶段与颜色有关的实验 实验所用试剂颜色备注还原糖斐林试剂砖红色沉淀蔗糖不是还原糖。A、B 液混合加入， 需要 60水浴加热蛋白质双缩脲试剂紫色双缩脲与肽键反应，先加 A 再加 B脂肪苏丹 III 苏丹 IV橘黄色 红色观
8、察花生中脂肪分布实验步骤：切花 生片染色50%酒精洗去浮色观 察淀粉I2液蓝色观察叶绿体不需要染色叶绿体本来显 绿色不同的物种叶绿体形状不同。如黑藻： 球状或椭球状；水绵：带状观察线粒体健那绿蓝绿色形状：短棒状、圆球状、线形、哑铃 形观察 DNA 和 RNA 的分布甲基绿 吡罗红绿色 红色操作步骤：制片8%HCl 水解冲洗 涂片染色观察质壁分离与复 原不需要染色洋葱鳞片叶外 表皮紫色绿叶色素的提 取和分离提取：无水乙醇、 无水丙酮等 分离：层析液四种色素的颜 色滤纸条从上到下：胡萝卜素（橙黄色） 、 叶黄素（黄色） 、叶绿素 a（蓝绿色） 、 叶绿素 b（黄绿色）观察染色体龙胆紫 醋酸洋红 改
9、良苯酚品红紫色 红色 红色观察有丝分裂实验的步骤： 固定（卡诺氏液）解离（解离液） 漂洗（水）染色制片CO2澄清石灰水 溴麝香草酚蓝水溶液变浑浊 蓝绿黄酒精重铬酸钾浓酸溶液橙色灰绿色DNA 鉴定二苯胺蓝色二苯胺现配现用，需要设置对照组。 沸水浴加热 5min，冷却后观察颜色变 化亚硝酸盐对氨基苯磺酸 N-1-乙二胺盐酸盐玫瑰红色亚硝酸盐先与对氨基苯磺酸发生重氮 化反应，再与 N-1-乙二胺盐酸盐结合测定大肠杆菌 数目伊红-美蓝培养基菌落呈现黑色根据培养基上黑色菌落数目，计算出 样品中大肠杆菌的数量（选修一 P26）鉴定分解尿素 的细菌培养基中加入酚红指 示剂指示剂变红分解尿素的细菌含的脲酶能将
10、尿素分 解为碱性的氨，pH 上升，指示剂变红5纤维素分解菌 的筛选含刚果红的培养基出现透明圈刚果红与纤维素结合形成红色。通过 是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。总结归纳六：观察实验中细胞的死活问题总结归纳六：观察实验中细胞的死活问题 实验细胞死活观察花生中脂肪分布死细胞观察 DNA、RNA 在细胞中的分布 观察叶绿体和线粒体 观察植物细胞的质壁分离和复原 观察细胞的有丝分裂、观察低温诱导染色体加倍实验 观察细胞的减数分裂（蝗虫精母细胞减数分裂固定装片） 探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化 练习：练习： 1. 下列说法不正确的是 A固定化酶和固定化细胞的方法包括包埋法、化学结合法和物理吸附法B
11、固定化酶更适合采用化学结合法和物理吸附法C由于细胞个体大，而酶分子很小，因此细胞多采用物理吸附法固定D反应物是大分子物质应采用固定化酶 2. （2007.潍坊模拟）用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质 A. 路程较长，移动速度较慢 B. 路程较长，移动速度较快 C. 路程较短，移动速度较慢 D. 路程较短，移动速度较快3. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法加入 SDS 的作用是A. 增大蛋白质的相对分子质量 B. 改变蛋白质的形状C. 掩盖不同种类蛋白质间的电荷差别 D. 减少蛋白质的相对分子质量4. （2011.广东高考）以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是A洗涤红细胞时，使用生理盐水
12、可防止红细胞破裂B猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少C血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测D在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较少的杂蛋白移动慢 5. 下列试剂可用于血红蛋白释放的是 0.9%的生理盐水 甲苯 磷酸缓冲液 蒸馏水 柠檬酸钠A. B. C. D. 6. 在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误的是A. 洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐B. 洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果C. 洗涤过程选用 0.1%的生理盐水D. 透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质 7. 关于红细胞的洗涤过程的叙述正确的是A. 低速长时间离心，如 500r/min 离心 2min，以保证达到很好的分离效果B. 离心后用胶头吸管吸出下层透明的红色血浆C. 将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的蒸馏水D. 直至上清夜中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净 8. 在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是6A. 防止血红蛋白被氧化 B. 血红蛋白是一种两性物质，需要酸中和 C. 磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程D. 让血红蛋白处在稳定的 pH 范围内，维持其结构和功能 D9. 限制酶能识别特定的 DNA 序列并进行剪切，不同的限制酶可以对 不同的核
