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1、1广西地方标准草果种子保存技术规程（征求意见稿）编制说明1、工作简况工作简况（一）任务来源与项目编号（一）任务来源与项目编号本标准是广西壮族自治区质量技术监督局下达的 2016 年第六批广西地方标准制定（修订）项目计划（桂质监函2016 324 号文），项目编号为 2016-06002。由广西壮族自治区卫生和计划生育委员会提出，广西卫生标准化技术委员会归口。（二）起草单位（二）起草单位本标准起草单位为广西壮族自治区药用植物园。（三）主要起草人员名单及职务或职称（三）主要起草人员名单及职务或职称本标准由广西药用植物园长期从事药用植物资源和种子学相关的技术人员参加研究和起草工作，人员情况列于表 1
2、。表表1 研究人员情况表研究人员情况表研研 制制人人 员员姓名姓名职务职务/职称职称现从事现从事专专 业业所在单位所在单位项 目负责人潘春柳助理研究员药用植物种子生 物学研究广西壮族自治区药用植物园黄燕芬助理研究员药用植物种子生 物学研究广西壮族自治区药用植物园董青松副主任技师药用植物种子检 验技术研究广西壮族自治区药用植物园朱艳霞助理研究员药用植物种子生 物学研究广西壮族自治区药用植物园柯芳副研究员药用植物保育技 术研究广西壮族自治区药用植物园主要参加人员 韦坤华副研究员药用植物生药学广西壮族自治区药用植物园2二、标准编制意义二、标准编制意义草果（Amomum tsao-ko Crevost
3、 et Lemarie）为广西道地药材草果的基源植物，隶属于姜科豆蔻属，产于云南、广西、贵州等省区。以干燥成熟果实入药，具有燥湿温中，截疟除痰之效，用于寒湿内阻，脘腹胀痛，痞满呕吐，疟疾寒热和瘟疫发热。此外，草果是传统的常用辛香料，是药食两用大宗中药材。在生产上，草果以种子繁殖为主，但直接播种的草果种子发芽缓慢，萌发率低，出苗不整齐；草果种子采收后不能干燥贮藏，种子干燥脱水后容易失去活力。在前期的研究工作当中，发现不同的保存方式会直接影响到草果种子的贮藏寿命和保存质量，进而影响到草果的栽培生产。为规范和统一草果种子保存技术，促进其种质资源的有效利用，广西壮族自治区药用植物园经查阅中华人民共和国
4、国家标准批准发布公告、中华人民共和国行业标准备案公告和中华人民共和国地方标准备案公告，草果种子检验尚无国家标准、行业标准或地方标准，因此提出制定草果种子保存技术规程广西地方标准。三、标准编制起草及研究过程三、标准编制起草及研究过程（一）成立制标小组，制定工作计划2013 年，在广西自然科学基金项目“广西道地药材草果种子休眠与萌发特性及休眠解除机制研究”（项目编号：2013GXNSFBA019169）的支持下，课题组成员开展了草果种子休眠破除方法、种子萌发测试、贮藏实验等研究内容，掌握了草果种子保存的关键技术及指标。按照广西区质监局关于编制标准工作的要求，我们及时成立了以潘春柳为组长，黄燕芬、董
5、青松、朱艳霞、柯芳，韦坤华为参与成员的标准起草小组，按照标准主题及要求进行材料的收集、整理和调研，及时制定了制标工作方案，对调查、研究、起草等工作在时间和进度上进行了部署。按照广西壮族自治区质量技术监督局关于编制标准工作的要求，起草小组成员曾多次进行相关采样及试验，准确统计试验结果，并对数据进行分析，同时了解草果种子种苗生产和销售、使用企业的情况，确保数据及方法的科学性，在编制过程多渠道获取相关资源并咨询行内专家，为标准的编写提供了条件。（二）技术研究在广西自然科学基金项目“广西道地药材草果种子休眠与萌发特性及休眠解除机制研究”的资助下，标准起草小组于项目实施期间，对草果种子开展了3相关的实验
6、研究。在广西草果主产区，选择那坡县和靖西县进行种子采集，并开展相关的室内实验研究，内容包括种子净度分析、千粒重测定、水分测定、萌发测定、种子贮藏实验等，为本标准的制定提供基本的实验参数及测定技术。（三）标准编制在标准研究和编制过程中，标准起草小组及时咨询中国医学科学院药用植物研究所、浙江大学、南京农业大学、中国科学院广西植物研究所和广西相关行业的专家，为标准的起草、编写打下了坚实基础。按照 GB/T 1.12009 的规定，标准起草小组根据标准的格式和编写方法，于 2016 年 5 月完成了标准的编制工作，并经小组内反复讨论修改，形成了草果种子保存技术规程广西地方标准“征求意见稿”。四、标准编
7、制原则、依据四、标准编制原则、依据1本标准制定的目的是规范和统一草果种子保存技术规程，指导草果种质资源有效保存，促进草果种质资源在广西的利用与可持续发展。2遵循中华人民共和国种子法、中华人民共和国标准化法、国际种子检验规程及农作物种子检验规程等法规和标准。3本标准的格式和编写方法执行 GB/T 1.1-2009 的规定。4本标准的编写以室内检验的数据为基本依据，同时结合了调研结果和生产实际。五、标准主要技术内容五、标准主要技术内容（一）范围本标准规定了草果种子保存的保存条件、种子入库、贮藏管理及贮藏期限的技术要求。（二）规范性引用文件本标准建立于草果种子保存技术要求的基础上，因此把以下文件作为
8、规范性引用文件：GB 4285 农药安全使用标准GB/T 3543.2 农作物种子检验规程 扦样GB/T 3543.3 农作物种子检验规程 净度分析GB/T 3543.4 农作物种子检验规程 发芽试验4GB/T 3543.6 农作物种子检验规程 水分测定GB/T 7414 主要农作物种子包装GB/T 7415 农作物种子贮藏GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则（三）主要技术内容及其说明20132015 年，标准起草小组连续 3 年收集了不同产地的草果成熟鲜果，将鲜果在透气的塑料编织袋中堆放 23 天后，剥取种子，用清水搓洗，去除假种皮、杂质及瘪粒。根据种子保存所需的环节，结果草果的
9、生物学特性，从种子质量检测（生活力和活力的测定）、种子贮藏水分、贮藏温度、贮藏湿度、贮藏方式、贮藏期限等，进行以下实验。1发芽技术确定 种子生活力检测采用氯化三苯基四唑染色法测定所采收的草果种子生活力。将种子置于25恒温箱内吸涨 12h 后，用解剖刀将胚小心取出，浸在盛有 1.0%TTC 溶液的培养皿中，于 35黑暗条件下染色，24h 后统计染色情况，确定种子有无生活力。结果表明所采收的草果种子生活力达 93.01.7%，新采收种子具有高的萌发潜力。 萌发测试设置 20、25、30恒温和 15/25、20/30变温共 5 个温度条件，并在每个温度下设置交替光照（12h 光/12h 暗）和连续黑
10、暗两种光照条件。以珍珠岩为萌发基质，将种子置于不同的温度及光照条件下培养，30d 后统计萌发率，以胚根突破种皮记为萌发。结果表明，新鲜草果种子仅在 25、15/25和20/30下萌发，且在 25、15/25下的萌发率极低，在 20/30变温条件下萌发率较高，为 31.0%（图 1）。交替光照条件下草果的种子萌发率虽高于全暗条件下的种子萌发率，但方差分析结果表明两者之间差异不显著，说明草果种子为光不敏感型种子。草果种子生活力显著高于萌发率，说明其种子具有显著的休眠现象。5图 1 不同温度和光照条件下草果种子的萌发率 萌发基质对比实验在最适萌发温度下，分别用珍珠岩、蛭石、细河沙三种不同的基质对新采
11、收的草果种子进行萌发测试，30d 后统计到的种子萌发率为：31%（珍珠岩）、20%（蛭石）、4%（细河沙）。说明草果种子萌发需要较好的透气性，以珍珠岩为较好的萌发基质。 激素处理利用植物外源激素 GA3对草果种子进行处理，发现其对草果种子休眠解除具有一定的促进作用（表 1）。在不同温度下，随着 GA3浓度增加，草果种子萌发率呈现先上升后下降的趋势。25恒温条件下，1.5mmol/L 和 2.0mmol/L GA3 处理的草果种子萌发率最高，分别为 23.0%和 23.5%；20/30变温条件下，1.5mmol/L 和 2.0mmol/L GA3处理的草果种子萌发率达 60%以上。表 1 不同
12、GA3浓度对草果种子萌发的影响不同温度下的种子萌发率（%）GA3浓度（mmol/L）2520/3000.013.0d 5.0c31.0d39.0cd0.18.0bc53.5ab1.09.0bc59.5ab1.523.0a64.0a2.023.5a65.5a62.511.5b48.5bc据此，将草果种子发芽技术规定如下（表 2）。表 2 草果种子发芽技术规定发芽基质温度 （）初次计数时间 （d）末次计数时间 （d）附加说明珍珠岩20/30 变温2130破除休眠： 1.52.0mM GA3浸种处理 24h2种子保存安全水分含量的确定采用低恒温烘干法对新鲜草果种子进行水分测定，得到草果种子水分为34
13、.0%。利用硅胶干燥法获取不同水分的草果种子，并将脱水后的草果种子置于15恒温培养箱中层积 90d 后取出，进行萌发测试，以判断草果种子水分对种子萌发的影响。结果表明草果种子萌发率随着脱水时间的增加呈现下降的趋势（表 3）。当草果种子含水量降至 10.2%时，草果种子萌发率仅 62.0%，显著低于对照。当脱水至含水量为 5.8%时，草果种子萌发受到进一步的抑制，萌发率仅 40.5%。因此，将草果种子保存的安全水分含量确定为 15%以上。表 3 脱水后层积对草果种子萌发的影响种子萌发率（%）脱水时间（h）含水量（%）20253015/2520/300（CK）34.00a10.5a0a3.0a82
14、.0a620.600.5b0a3.0a74.5a1218.700b0a0.5a79.5a1815.300.5b0a2.5a79.0a2410.200b0a0.5a62.0b485.800b0a0.5a40.5c3贮藏方式的确定 干藏将新鲜采集的草果种子放入牛皮纸袋中，室温下干藏 60d 后将种子取出，置于 20、25、30恒温和 15/25、20/30变温下进行萌发测试。结果发现草果7种子萌发率为 0，说明干藏方式会导致种子含水量迅速降低，从而影响种子活力。 层积生产上常利用常温沙藏方式对草果种子进行贮藏。但实验观察发现，常温沙藏 2 个月后，草果种子出现萌发现象，不利于种子的保存，易导致种子
15、损失。考虑到种子贮藏的便利性和生产实用性，选择以珍珠岩为基质来研究不同贮藏时间及贮藏方式对种子萌发的影响。将新鲜种子与湿珍珠岩以 1:3（体积比）混匀后，分别进行恒温层积和变温层积。结果发现低温层积和暖温层积均能打破草果种子休眠。在 20/30变温条件下，草果种子萌发率随低温层积或暖温层积时间的延长，呈现出先上升后下降的趋势。其中以暖温层积（15层积）90d 的处理效果较好，萌发率高达82.0%，显著大于其他层积处理（表 4）。变温层积对草果种子休眠的解除虽然也起到一定的促进作用（表 5），但考虑到生产上的便利性，选择 15来保存草果种子。表 4 恒温层积对草果种子萌发的影响种子萌发率（%）层
16、积方式层积时间（d）20253015/2520/30CK00a3.0b0a1.0a31.0d300a1.5b0a1.5a40.5c600a3.0b0a3.0a52.0c901.5a4.5ab1.5a6.0a64.0b低温层积（5）1200a1.0b0a2.0a45.5c300a3.0b0a1.0a42.5c600a3.0b1.5a3.0a71.0b900a10.5a0a3.0a82.0a暖温层积（15）1200a0b0a1.0a70.0b注：同列不同字母表示差异显著（P0.05），下同。8表 5 变温层积对草果种子萌发的影响种子萌发率（%）层积方式20253015/2520/30CK03.0b01.0b31.0d530d+1530d015.0a014.0a54.0c1530d+530d00b011.0a53.5c530d+1560d00b010.0a76.0a1530d+560d00b0
