《P21 ras、骨桥蛋白及CD44v6与肺鳞癌和腺癌关系的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《P21 ras、骨桥蛋白及CD44v6与肺鳞癌和腺癌关系的研究（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1P21 ras、骨桥蛋白及 CD44v6 与肺鳞癌 和腺癌关系的研究【摘要】 目的 研究 P21 ras、CD44v6、骨桥蛋白(OPN)在肺鳞癌和腺癌中的表达及其与肺鳞癌和腺癌预后的相互关系。方法 应用免疫组化方法对 96 例非小细胞肺癌患者分别检测 P21ras 蛋白、CD44v6、OPN 的表达，分析 P21ras 蛋白、CD44v6、OPN 与肺癌组织学类型、分化程度、TNM 分期等的关系，并通过 34 例随访病例了解以上指标与肺癌预后的关系。结果 中 OPN 及 CD44v6 在鳞癌中表达率高于腺癌，而 P21ras 蛋白则在鳞癌及腺癌间表达差异无统计学意义，但P21ras 蛋白、
2、CD44v6、OPN 三者共同表达在鳞癌则高于腺癌;(2)晚期肺癌 P21ras蛋白、CD44v6、OPN 的阳性表达率均显著高于早期患者，而 CD44v6 及 OPN 则在淋巴结已有转移者阳性表达率显著高于无淋巴结转移者;(3)P21ras 蛋白、CD44v6、OPN 阳性组累积生存率低于阴性组。结论 P21ras 蛋白、CD44v6、OPN在鳞癌三者共同高表达，三者共同作用可能与肺鳞癌的发生、发展密切相关，P21ras 蛋白、CD44v6、OPN 的阳性表达预示着非小细胞肺癌不良预后。 【关键词】 RAS 基因;OPN ;CD44;肺鳞癌;肺腺癌RAS 基因活化、骨桥蛋白(osteopon
3、tin,OPN)以及黏附分子 CD44 与肺癌的发生、发展密切相关，近年来研究报道 RAS 基因活化促进 OPN 诱导生成1，而 RAS基因可以增强 CD44 启动子活性,使 CD44 表达增强，实验亦表明 RAS 诱导肿瘤形成通过 OPN-CD44-Rac 增强了细胞的侵袭性和恶性转化2，因此 RAS 基因、OPN 以及 CD44 在肿瘤的形成、发生、发展中密切相关。本文应用免疫组化方法对 P21 ras 蛋白、CD44v6 及 OPN 进行检测，探讨它们在非小细胞肺癌中表达的2相关性及其与预后的关系，进一步探索非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer ，NSCLC
4、)发生、发展的分子生物学机制。1 材料与方法1.1 标本来源 选取 2002 年 2 月-2004 年 12 月在宁夏医科大学附属医院手术切除的非小细胞肺癌患者 96 例，男 66 例，女 30 例，年龄 3278 岁，平均 57 岁。鳞癌 44 例，腺癌 52 例;分化好 38 例，分化差 58 例(分化好包括中分化、中-高分化、高分化;分化差指低分化);期+期 48 例，期+期 48 例;其中有淋巴结转移77 例，无淋巴结转移 19 例。以上标本常规福尔马林固定、石蜡包埋，且均有明确的病理诊断，所有患者术前均未接受放疗及化疗治疗。96 例非小细胞肺癌患者中仅 34 例长期追踪随访，其余失访
5、，其中鳞癌 19 例，腺癌 15 例，已死亡患者 27 例，7 例仍存活。1.2 试剂和方法 鼠抗人 OPN 单克隆抗体由日本株式会社提供;鼠抗人 Ras-p21 单克隆抗体，鼠抗人 CD44v6 单克隆抗体及 SP 免疫组化试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。采用 S-P 免疫组化检测技术，具体操作过程严格按说明书进行。PBS 代替一抗作为阴性对照，已证实的阳性肺癌组织切片作为阳性对照。1.3 结果判断 P21ras 阳性着色部位在细胞浆，阳性细胞内呈弥漫性细颗粒状，OPN 亦胞浆着色。CD44v6 阳性着色部位在细胞膜，阳性细胞膜呈棕黄色。用半定量法分析免疫组化切片A：按细胞显色深浅记分
6、，不显色为 0 分，浅黄色为 1 分，棕黄色为 2 分，棕褐色为 3 分。B：按显色细胞数记分，1/3 以下为 1 分，1/32/3 为 2 分，2/3 以上为 33分。积分数=AB，AB=0 为阴性;AB=14 为弱阳性，低表达;AB4 为强阳性，高表达。1.4 统计学方法 两样本率的处理用行列表的 2 检验。用 Kaplan-Meier 法进行生存数据的分析，Log-rank 检验差异性。2 结果2.1 CD44v6、OPN、P21 ras 蛋白与患者年龄、性别、吸烟的关系CD44v6、OPN、P21 ras 蛋白与患者的年龄、性别、吸烟与否均无关(P0.05)，见表 1。表 1 不同年龄
7、、性别、吸烟患者 CD44v6、OPN、P21 ras 蛋白的表达(例数，%)2.2 CD44v6 与非小细胞肺癌的关系非小细胞肺癌阳性表达率 68.8%，鳞癌阳性表达率 86.4%(38/44)，腺癌阳性表达率 53.8%(28/52)，鳞癌阳性表达率显著高于腺癌。非小细胞肺癌中，早期肺癌(、期)及晚期肺癌(、期)的阳性率分别为 35.4%、89.6%，两者间差别有统计学意义(P0.01)。非小细胞肺癌中，有淋巴结转移者 CD44v6 表达率(79.2%)高于无淋巴结转移者(42.1%)，P0.01。CD44v6 与非小细胞肺癌病理分化程度无关。CD44v6 在肺癌中的表达见表 2、图 1(
8、见封 4)。2.3 OPN 与 NSCLC 的关系由图 2(见封 4)可见，OPN 主要表达于肿瘤组织细胞，其周围的巨噬细胞和坏死组织处也有阳性表达。OPN 阳性表达率非小细胞肺癌为 54.2%，鳞癌为 70.5%，腺癌为 40.4%，鳞癌和腺癌间 OPN 阳性表达率差异有统计学意义(P=0.003)。非小4细胞肺癌中有淋巴结转移 64.9%(50/77)高于无转移者 36.8%(7/19)，P=0.026。非小细胞肺癌中 OPN 与病理分化程度无关。早期肺癌与晚期肺癌 OPN 表达差异有统计学意义(P0.05)，详见表 2。2.4 P21ras 蛋白与 NSCLC 的关系表 2 可见，非小细
9、胞肺癌阳性率为 59.4%，其中鳞癌、腺癌的阳性表达率分别为 54.5%、63.5%，鳞癌和腺癌间差异无统计学意义;非小细胞肺癌中，P21ras 蛋白与肺癌病理类型、有无淋巴结转移及病理分化程度无关。非小细胞肺癌中晚期肺癌 P21ras 蛋白阳性表达率高于早期肺癌。P21ras 蛋白在肺癌中的表达见图 3(封 4)。表 2 CD44v6、P21 ras、OPN 与 NSCLC 临床病理特征的关系(%)与鳞癌比较*P0.05;与无淋巴结转移比较P0.05;与-期比较P0.05，P0.012.5 P21ras 蛋白、CD44v6 和 OPN 与非小细胞肺癌预后的关系P21ras 蛋白、CD44v6
10、 和 OPN 阳性组累积生存率低于阴性表达组，同时 P21ras蛋白、CD44v6 和 OPN 阳性组中位生存期较阴性组短，经 Log-rank 检验差异有统计学意义。鳞癌的中位生存期 32 个月，腺癌中位生存期 20 个月，鳞癌累积生存率较腺癌长(见表 3)。表 3 P21ras 蛋白、CD44v6 和 OPN 的表达 44 例鳞癌患者中P21 ras、OPN、CD44v6 三者均表达者为 18 例(42.9%)，而 52 例腺癌中 P21 ras 、OPN、CD44v6 三者均表达着为 8 例(15.4%)，二者相比差异有统计学意义(P0.01)。故 P21 ras、OPN、CD44v6
11、三者共同表达主要是在 NSCLC 鳞癌中，而非腺癌。3 讨论5RAS 基因是人类最常见的癌基因之一，在信号转导及细胞增殖方面起主导作用。RAS 基因家族由 N-ras、K-ras、H-ras 组成，在肿瘤中的改变以点突变为主;在非小细胞肺癌中以 K-ras 基因单碱基突变为主。因突变 RAS 基因的编码蛋白存在单个氨基酸的改变，若发现突变 RAS 基因的编码蛋白 P21-ras 蛋白有高表达，可推测相应部位可能存在突变的 RAS 基因。本研究结果显示非小细胞肺癌 P21 ras 蛋白阳性率为 59.4%，其中鳞癌、腺癌的阳性表达率分别为 54.5%、63.5%，两者间无统计学意义。非小细胞肺癌
12、中，晚期肺癌 P21 ras 蛋白阳性率高于早期肺癌。P21 ras 蛋白阳性组累积生存率低于表达阴性组。有人筛选了 8 篇检测 K-ras 基因突变同时有 2 年生存资料的非小细胞肺癌的文献，用 META 分析综合了 881 例非小细胞肺癌 K-ras 基因突变与 2 年生存率的关系，结果提示突变者生存期明显缩短3。因此非小细胞肺癌 RAS 基因突变预示不良预后。OPN 是一种具有多种生物学功能的分泌性、糖基化的磷酸蛋白，研究证实已发生转化的细胞株可分泌 OPN，而多数肿瘤组织(胃癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌等)OPN 呈高表达，71%肺癌组织 OPN 阳性表达4，本研究提示非小细胞肺癌中，鳞
13、癌的阳性表达率显著高于腺癌，张锦等5研究提示 OPN 在鳞癌呈优势表达。实验中发现非小细胞肺癌中有淋巴结转移者 OPN 阳性表达率高于无转移者，且早期肺癌低于晚期肺癌的 OPN 表达，与 Chang 等6研究结果一致;而 Hu 等7检测了 318 例肺癌组织及 143 例肺癌患者血浆，结果表明肺癌组织及血浆 OPN 高表达，且 OPN 表达与肿瘤分期及淋巴结转移密切相关，以上结果均提示 OPN 可能参与了肺癌的浸润和转移。本研究结果显示 OPN 阳性组累积生存率低于表达阴6性组。Boldrini 等人8研究也证实 OPN 高表达预示着肺癌的不良预后。由此可见，OPN 与非小细胞肺癌的发生、发展
14、及转移密切相关，OPN 表达预测非小细胞肺癌不良的预后。 宁夏医科大学学报 32 卷CD44 是细胞表面的跨膜糖蛋白，是介导细胞与细胞、细胞与基质间相互作用的黏附分子，其功能是 CD44 在细胞外基质与透明质酸结合，维持组织或器官的结构，促进细胞浸润和介导细胞迁移。CD44v6 是 CD44 的一种拼接变异体，CD44v6 的表达可能改变肿瘤的构成和功能，有助于肿瘤细胞获得转移潜能。近年来研究发现 CD44v6 的异常表达与许多人类恶性肿瘤的发生、发展和侵袭转移及预后密切相关。本研究结果显示非小细胞肺癌中 CD44v6 在鳞癌的阳性表达率显著高于腺癌。已有文献报道9-10CD44v6 在肺癌组
15、织阳性表达率显著高于正常组织且鳞癌高于腺癌，且已有转移的淋巴结 CD44v6 呈高表达，提示 CD44v6 参与肺鳞癌淋巴结的转移。本研究结果也提示有淋巴结转移者 CD44v6 阳性表达率高于无淋巴结转移者，且晚期肺癌的 CD44v6 表达率高于早期肺癌。CD44v6 阳性组累积生存率低于表达阴性组。Migoshi 等11人研究也表明有淋巴结转移者 CD44v6 阳性表达率显著高于无淋巴结转移者，而 Hirata 等12人报道 CD44v6 阳性组 5 年生存率低于表达阴性组, 阳性组远处转移率明显高于阴性组，提示 CD44v6 表达预示了I 期非小细胞肺癌的预后不佳。较多研究已证实 RAS
16、癌基因参与 OPN 诱导生成1，RAS 是通过作用于 OPN的启动子 RAE 序列诱导 OPN 表达，这可能是由于 OPN 的启动子上含有 RAS 的调控元件。本研究结果提示 OPN 在鳞癌中表达高于腺癌， OPN 与 P21ras 蛋白在7鳞癌的共同表达率高于腺癌，推测肺癌中 RAS 的活化可能与肺鳞癌 OPN 的高表达有关, 肺鳞癌中 OPN 受 RAS 的调控并参与了肿瘤的发展，而在腺癌中无此种情况，这与张锦的研究结果相似5。4 期张 锦，等.P21 ras、骨桥蛋白及 CD44v6 与肺鳞癌和腺癌关系的研究Hofmann 等13用激活的 RAS 基因转染克隆鼠胚胎成纤维细胞可使其表达CD44，并具有转移特性，用腺病毒基因 EIA 可以抑制 CD44 表达及转移特性,并证明激活的 ras 基因可以增强 CD44 启动子活性,从而使 CD44 表达增加。OPN 通过 RGD-依赖或 RGD-非依赖的方式与黏附分子整合素家族(主要为 v3、v5和 v1)以及分子相互作
