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1、1HPLC 法测定复方水杨酸甲酯搽剂的含量【摘要】 目的 采用高效液相色谱法测定复方水杨酸甲酯搽剂的含量。方法 以辛烷磺酸钠溶液 乙腈梯度洗脱，Kromasil C18 柱（250 mm4.6 mm，5 m）为固定相，流速为 1.2 mL/min，检测波长为 280 nm。结果 马来酸氯苯那敏在 19.96399.22 g/mL 范围内线性关系良好，平均回收率为 100.0%，RSD 为 1.2%；壬酸香蓝酰胺在 1.96739.34 g/mL 范围内线性关系良好，平均回收率为 100.8%，RSD 为 1.3%。结论 方法简单、灵敏度高，可用于复方水杨酸甲酯搽剂的含量测定。 【关键词】 复方
2、水杨酸甲酯搽剂；马来酸氯苯那敏；壬酸香蓝酰胺；高效液相色谱法；含量测定Abstract:Objective To develop an HPLC method for analyzing the contents of active ingredients in compound methyl salicylate liniment.Methods Samples were analyzed on a Kromasil C18 column（250 mm4.6 mm，5 m） with a linear gradient elution mode using sodium octanesulf
3、onate and acetonitrile as eluents.The flow rate was 1.2 ml/min.UV detection wavelength was set 280 nm. Results Chlorphenamine maleate had a good linearity in the range of 19.96399.22 g/mL with average recovery of 100.0% and RSD of 1.2%.Pelargonic acid vanillylamide had a good linearity in the range
4、of 1.96739.34 g/mL with average recovery of 100.8% and RSD of 1.3%.Conclusion The method is simple,sensitive and rapid.Keywords:compound methyl salicylate liniment；chlorphenamine maleate；pelargonic acid vanillylamide；HPLC复方水杨酸甲酯搽剂又名安美露，是日本小林制药株式会社产品，由北京艾普迪医药科技有限公司申报进口药品注册。复方水杨酸甲酯搽剂是一种复方制剂，皮肤科用药，其主要成
5、分为水杨酸甲酯、马来酸氯苯那敏和壬酸香蓝酰胺等。马来酸氯苯那敏的测定方法已有较多文献报道1，2，本文采用高效液相色谱测定该制剂中马来酸氯苯那敏和壬酸香蓝酰胺两种主要成分的含量，以此作为复方水杨2酸甲酯搽剂质量控制指标。1 仪器与试药1.1 仪器岛津 L 20A 液相色谱仪,SPD 20A 紫外检测器,MT 5 梅特勒电子天平。1.2 试药马来酸氯苯那敏（批号：R03040803；质量分数：99.66%）和壬酸香蓝酰胺对照品（批号：59134；质量分数：97.95%）为企业工作对照；3 批复方水杨酸甲酯搽剂样品由北京艾普迪医药科技有限公司提供（批号为 J6001、K6002、K6001）；乙腈为
6、色谱纯；其余试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件与系统适用性以十八烷基键合硅胶为填充剂；以辛烷磺酸钠溶液（取三乙胺 20 mL 和水 950 mL 混合，用磷酸调节 pH 值为 3.0，加入 1.2 g 辛烷磺酸钠溶解，混匀，即得）为流动相 A，以乙腈为流动相 B，按表 1 进行梯度洗脱；流速为 1.2 mL/min；检测波长为 280 nm。理论塔板数按壬酸香蓝酰胺峰计算不低于 2 000，样品中各组分的分离度均能达到要求。对照品和样品的色谱图见图 1。表 1 梯度洗脱表（略）Tab.1 Gradient curve32.2 对照品溶液的制备取马来酸氯苯那敏和壬酸香蓝酰胺对照品适量
7、，精密称定，加乙腈溶解并稀释成每 1 mL 中含马来酸氯苯那敏 200 g 和壬酸香蓝酰胺 20 g 的混合溶液，作为对照品溶液。2.3 供试品溶液的制备取本品 5 mL，置 25 mL 量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2.4 标准曲线的制备取马来酸氯苯那敏对照品 50 mg 和壬酸香蓝酰胺对照品 5 mg，精密称定，置同一 50 mL 量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液，分别取上述贮备液 1、1、5、15、10 mL 分别置 50、25、25、50、25 mL 的量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，得到一系列标准溶液，按上述色谱条件测定峰面积。以质量浓度()作
8、横坐标，峰面积(A)作纵坐标，得到回归方程：马来酸氯苯那敏：A=5.203 210-4-3.827 810-3，r=0.999 9；壬酸香蓝酰胺 A=1.358 910-4+7.176 010-3，r=0.999 9，说明马来酸氯苯那敏、壬酸香蓝酰胺分别在 19.96399.22 g/mL和 1.96739.34 g/mL 范围内线性关系良好。2.5 精密度试验取对照品溶液，重复进样 6 次，记录色谱图，测定峰面积，计算 RSD 值，结果：马来酸氯苯那敏 RSD=0.9%、壬酸香蓝酰胺 RSD=0.8%。4图 1 对照品（A）和样品（B）高效液相色谱图（略）Fig.1 HPLC chromat
9、ograms of sample and reference2.6 稳定性试验取供试品溶液分别于 0、1、2、8、16、24 h 进样 20 L，记录色谱图，测定峰面积值，计算 RSD 值，结果马来酸氯苯那敏 RSD=1.7%、壬酸香蓝酰胺 RSD=1.2%。实验结果表明供试品在 24 h 内稳定。 2.7 重复性试验取同一批供试品（批号：J6001），平行制备 6 份，测定峰面积值，计算 RSD 值，结果马来酸氯苯那敏 RSD=1.8%、壬酸香蓝酰胺 RSD=1.3%。2.8 回收率试验采用加样回收试验法，按标示量的 80%，100%和 120%设计回收试验，共测定3 组浓度 9 份样品，结
10、果马来酸氯苯那敏平均回收率为 100.0%，RSD=1.2%；壬酸香蓝酰胺平均回收率为 100.8%，RSD=1.3%，见表 2、表 3。2.9 定量限的测定在上述色谱条件下，在色谱图主成份的峰高为基线噪音 10 倍时，根据进样量20 L 计算，得到马来酸氯苯那敏的定量限为 6.7 ng；壬酸香蓝酰胺的定量限为1.3 ng。2.10 样品测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 20 L，按上述色谱条件测定峰面积，5按外标法以峰面积计算标示百分含量，即得。3 批样品测定结果见表 4。表 2 马来酸氯苯那敏回收率试验结果（略）Tab.2 Recovery of chlorphenamine mal
11、eate表 3 壬酸香蓝酰胺回收率实验结果（略）Tab.3 Recovery of pelargonic acid vanillylamide表 4 样品测定结果（略）Tab.4 Contents of sample3 讨论3.1 本品为复方制剂，主要成分较多，马来酸氯苯那敏和壬酸香蓝酰胺的含量相对较少，标示量较大的水杨酸甲酯等成分对测定有干扰，所以选择的色谱条件为梯度洗脱。3.2 由于马来酸氯苯那敏和壬酸香蓝酰胺对流动相较敏感，略微调整，对保留时间影响很大，但考虑到整体测定，只能采用变动较小的梯度洗脱条件，这样可以缩短分析时间，使样品中马来酸氯苯那敏保留时间大于 3 min，壬酸香蓝酰胺的保
12、留时间小于 20 min。3.3 实验过程中，采用 Waters parker style （250 mm4.6 mm，5 m）和迪马（200 mm4.6 mm，5 m）两种不同品牌的色谱柱测定，结果发现 Waters 色谱柱分离效果较好，可以使被测主分与其他杂质分离良好，而迪马柱却不能达到要求。3.4 马来酸氯苯那敏的最大吸收在 268 nm，壬酸香蓝酰胺最大吸收在 280 6nm，但由于马来酸氯苯那敏的标示含量比壬酸香蓝酰胺大 10 倍，所以选择 280 nm 作为测定波长。【参考文献】1 郭丙炎，王岚，刘彩君.酸性染料比色法测定复方岩白菜素片中马来酸氯苯那敏的含量J.中国医院药学杂志，2000，20（12）：725.2 陆伟，赵新静.HPLC 法测定感冒通片中马来酸氯苯那敏的含量及含量均匀度J.中国药事，2004，18（1）：41.
