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1、15-HT 沙眼衣原体 K 血清型感染细胞 IL- 6 分泌水平的测定作者： 张雄鹰 查国章 武延隽 余平 【关键词】 沙眼衣原体摘 要 目的:探讨沙眼衣原体 K 血清型感染细胞 IL-6 分泌水平及其意义。方法:用 ELISA 双抗体夹心法检测沙眼衣原体感染细胞培养上清 IL-6 水平的变化。结果:沙眼衣原体感染 McCoy 细胞在沙眼衣原体感染后 36h、48h、60h、IL-6 分泌量分别为 1.36550.0046、2.96010.0104、4.04080.0722，均显著高于相应的对照组（P0.05），并且随感染时间的延长 IL-6 分泌水平显著地逐步增高（P0.05）。结论:沙眼衣
2、原体 K 血清型感染可诱导 McCoy 细胞分泌 IL-6，并且呈时间依赖性。关键词 沙眼衣原体;McCoy 细胞;白细胞介素-6沙眼衣原体（Ct）的致病机制涉及机体的免疫防御和免疫病理反应，白细胞介素6（IL-6）作为重要的炎症因子和免疫介导因子可能参与沙眼衣原体感染的致病过程。据报道，Ct 能诱导体外培养的上皮细胞、人单核细胞、淋巴细胞等多种细胞产生 IL-6 等细胞因子 1，2 ，而有关沙眼衣原体 K 血清型感染的 McCoy 细胞分泌细胞因子的报道尚少。本文检测沙眼衣原体 K 血清型感染的 McCoy 细胞分泌IL-6 水平，旨在为寻求衣原体感染性疾病的防治措施及进一步的研究提供参考。
3、1 材料沙眼衣原体 K 血清型由中山医科大学宁波教授惠赠，McCoy 细胞由湘雅医学院2病毒研究室惠赠，IL-6ELISA 试剂盒（晶美公司产品），RPMI-1640（GIBCO 产品）。2 方法2.1 衣原体增殖取一瓶单层 McCoy 细胞，弃上清，加 1mL 衣原体悬液至培养瓶中，3000r/min 离心 1h，37、5%CO 2 培养箱培养 2h，弃上清。加无双抗的 RPMI-1640 培养基（含 10%小牛血清、1g/mL 放线菌酮），置 37、5%CO 2 培养箱培养 48h 取出，冻融，500g 离心 10min，取上清（含衣原体），分装于无菌小试管，70冰箱保存备用。2.2 衣原
4、体滴定将增殖后的衣原体作系列稀释，接种于已经形成 McCoy 细胞单层的 24 孔培养板，培养 48h，用荧光标记的抗衣原体单克隆抗体染色后于荧光显微镜下计数感染细胞百分率，并计算 ID50 值。 2.3. ELISA 检测 IL-6 含量在已形成 McCoy 细胞单层的 24 孔培养板中接种 1ID50 衣原体，并设正常细胞对照，3000r/min 离心 1h，37、5%CO 2 培养箱培养 2h，弃上清。每孔加含 10%小牛血清的 RPMI-1640 培养基 1mL，37、5%CO 2 培养箱培养。于36h、48h、60h 分别取培养上清，用 ELISA 双抗体夹心法检测 IL-6 含量（
5、按试剂盒使用说明书操作）。在酶标仪上用 405nm 波长测 OD 值。将试剂盒提供的 IL-6 标准浓度与测得的 OD 值经 SPSS 统计软件做标准曲线，得出回归方程，根据样本的 OD 值计算其 IL-6 含量。2.3 统计学处理3实验结果用均数标准差（xs）表示，多组间比较用单因素方差分析，显著性差异以 P0.05 为准。 3 结果3.1 标准曲线将 IL-6 标准品含量与测得的 OD 值用 SPSS 统计软件处理获得 IL-6 含量标准曲线（见图 1），得出回归方程为:Y=1.9505+0.5967LnX（Y 为 OD 值，Ln 是以 e 为底的自然对数，X 为 IL-6 浓 度）。 图
6、 1 IL-6 含量标准曲线3.2. ELISA 双抗体夹心法检测 IL-6 的浓度结果见表 1、图 2。Ct 感染后 36h、48h、60h 细胞培养上清中 IL-6 的含量均显著高于相应的对照组（P0.05），且随感染时间的延长 IL-6 含量显著地逐步增高（P0.05）。 表 1 沙眼衣原体感染 McCoy 细胞分泌 IL-6 *与对照比较P0.05，与 36h Ct 组比较 P0.05，与 48h Ct 组比较 P0.05 图 2 沙眼衣原体感染 McCoy 细胞分泌 IL-6 的 ELISA 检测结果3 讨论IL-6 为具有广泛生物学效应的细胞因子，具有双向免疫调节作用，也是机体炎症
7、反应和一系列病理生理过程的重要介质。近年研究表明，Ct 的致病机制与机体的免疫防御和免疫病理过程有关。细菌的脂多糖、病毒 RNA、感染产生的中介物质均能刺激感染细胞及免疫细胞产生 IL-6。李海燕等报道，沙眼衣原体感染输卵管性不孕患者输卵管液中 IL-6 水平升高，IL-6 水平与 Ct 的亚临床感染或持续性感染状态密切相关 3 。本实验用双抗 体夹心法检测 IL-6 分泌水4平，结果显示，Ct 感染 McCoy 细胞引起 IL-6 分泌水平明显增高，与文献报道衣原体感染沙眼衣原体可促进体外培养的上皮细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞等分泌IL-6 的结果类似 1，2 。提示 Ct 感染后诱导细胞产
8、生的 IL-6 可能通过调节机体的免疫功能而参与 Ct 感染的致病过程，且可能影响 Ct 感染的状态。上述结果有待体内和临床实验进一步证实。文献报道，Ct 感染的 Hela 细胞培养上清中 24h 可检测到前炎症性细胞因子 IL-8显著增加，72h 后达高峰，3d 后，IL-8 分泌开始下降，可能与 Ct 繁殖周期48h72h 有关 4 。本实验结果显示，Ct 感染的 McCoy 细胞在感染后 24h 分泌前炎症细胞因子 IL-6 的水平显著高于对照组，且呈时间依赖性。提示 Ct 感染的McCoy 细胞分泌 IL-6 的水平也许与 Ct 的繁殖周期有关。本实验未检测衣原体感染 72h 及 72
9、h 后 IL-6 的分泌水平，故有待于进一步研究阐明。IL-6 和 TNF、IL-1、IL-8 等多种细胞因子协同构成复杂的炎性细胞因子网络，参与多种炎症性疾病的病理过程 5 。有文献报道，Ct 感染的 U937 细胞分泌 IL-1、IL-6、TNF- 等多种细胞因子 6 ，可能沙眼衣原体感染的 McCoy 细胞还产生其他的细胞因子，具体产生那些细胞因子及其相互作用，有待进一步研究。参考文献1 Rasmussen SJ，Eckmann L，Quayle AJ，et al.Secretion of proin-flammatory cytokines by epithelial cells in
10、 response to chlamydia infec-tion suggests a central role for epithelial cells in chlamydia pathogene-sis.J Clin Invest，1997，99（1）:77.2 Netea MG，Selzman CH，Kullberg BJ，et al.Acellular compo-nents of Chlamydia pneumoniae stimulate cytokine production in human blood mononuclear cells.Eur J Immunol，200
11、0，30（2）:541.3 李海燕，梁占光.沙眼衣原体感染输卵管性不孕患者输卵管液中肿瘤坏死因5子 和白细胞介素 6 的测定.中华妇产科杂志，2000，35（7）:411.4 余俊龙，余 平，李立新，等.沙眼衣原体感染诱导 Hela 细胞分泌 IL-8 和 IL-10.湖南医科大学学报，2003，28（2）:174.5 Old LJ.Tumor necrosis factor.polypeptide mediator network.Na- ture，1987，326:330.6 Rothermel CD，Scachter J，Lanrich P，et al.Chlamydia tra-chomatis induced production of interleukin-1by human monocyte.In-fect Immun，1989，57:2705.
