广西三黄鸡抗马立克氏病相关基因筛选的研究

《广西三黄鸡抗马立克氏病相关基因筛选的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《广西三黄鸡抗马立克氏病相关基因筛选的研究（56页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、广西大掌硬士掌位论文广蕾r 三，| 鸡抗马立克景J t 相关| i 日姊葺l 的研究广西三黄鸡抗马立克氏病相关基因筛选的研究摘要马立克氏病( M D ) 是鸡的一种淋巴组织增生性疾病，对家禽业危害极大。开展广西三黄鸡抗M D 相关基因筛选的研究，旨在确立相应的分子遗传学标记来促进三黄鸡的抗M D 育种工作，以弥补传统的疫苗接种为主的M D 防制手段的不足。至此，已完成如下工作：应用广西M D V - 1 强毒分离株Y L 0 4 0 9 2 0 C 6 对7 日龄4 6 羽普通霞烟鸡 ( 分两组：A 组未免疫，2 4 羽、B 组1 日龄免疫H V T ，2 2 羽) 和5 3 羽M D抗性鸡(

2、 分两组：C 组未免疫，2 7 羽、D 组1 日龄免疫H V T ，2 6 羽) 分别进行攻毒试验，按常规分开隔离饲养，观察和记录鸡的死亡情况，至攻毒后( P C ) 1 2 周结束试验。结果发现，A 、B 、C 、D 四组的肿瘤死亡率分别为6 6 6 7 、6 3 6 3 、4 4 4 4 和4 2 3 1 ，肿瘤发生率分别为7 5 0 0 、7 2 7 2 、4 8 1 4 和4 6 1 5 ，经t 检验表明，M D 抗性鸡的肿瘤死亡率显著低于普通霞烟鸡( P 0 0 5 ) ；对不同脏器肿瘤发生率的统计表明，心脏肿瘤发生率最高( 4 3 5 ) ，肝脏肿瘤次之 ( 2 9 ) ，皮肤肿瘤

3、再次之( 1 0 6 ) ；采用血凝抑制( m ) 试验测定试验鸡血清鸡新城疫( N D ) 和禽流感( A I ) 抗体的效价，结果表明经过多次N D 和舢疫苗免疫后，鸡体N D 和赳抗体滴度一直没能达到预期水平，表明M D V 感染霞烟鸡后产生了一定的免疫抑制作用。攻毒前后共计五次无菌采集并分离鸡外周血淋巴白细胞( P B L s ) ，置于- 8 0 保存，为下一步研究准备材料。利用聚合酶链式反应( P C R ) 和限制性片段长度多态性( R F L P ) 分析的方法，对M D V 攻毒后抗性存在差异的1 1 2 份霞烟鸡P B L s 生长激素基因第四内含子( G i l l )

4、的P C R 扩增产物，采用限制性内切酶S a cI 和M s p1分别进行限制- 性片段长度多态陛检测。结果发现仅有1 个S a cI 酶切位点存在于G i l l 上，不具备多态性，而在G H l 上存在2 个M s pI 酶切位点，形成 6 种基因型分别为：A A 、A B 、A C 、B B 、B C 和C C 。M E ) 抗性鸡中A A 型所占比例最高( 5 0 ) ，B B 、C C 型为( O ) ，在普通霞烟鸡中B B 、C C 型分别为( 9 2 6 和1 8 5 ) 。经过卡方独立性检验表明，6 种基因型在M D 抗。陛鸡和普通霞烟鸡中的分布差异并不显著( P O 0 5

5、 ) ，W i t ht h es t a t i s t i c so ft u m o ro c c u r r e n c ei nd i f f e r e n tv i s c e r ao r g a n s h e a r tt u m o rw a st h em o s tc o m m o nm i n o r s ( 4 3 5 ) ，a n dt h e nW a sl i v e r ( 2 9 ) a n ds k i nf 1 0 6 ) S e r aw e r ec o l l e c t e df r o mt h ec h a l l e n g e db

6、 i r d sa f t e rt h ev a c c i n a t i o n so fc o m m e r c i a lv a c c i n e so fN e w c a s t l ed i s e a s e ( N D ) a n dA v i a nI n f l u e n z a ( A I ) f o rt h ed e t e c t i o no fa n t i b o d yr e s p o n s e sb yu s i n gh e m a g g J 【u t i n a t i o ni n h i b i t i o n ( H I )t e

7、 s t a n dl o w e rH It i t e r st h a nn o r m a lw e r eo b s e r v e da n dt h a tp r o v i d e da n广西大掌硕士学位论文广西三黄鸡抗马立克氏病相关墓因筛选的研究e v i d e n c e o ft h ei m m u n o s u p p r e s s i v ec o n d i t i o n si n d u c e db yt h ei n f e c t i o no fv i r u l e n t D V - 1 P e r i p h e r a lb l o o

8、 dl e u k o c y t ec e l l s ( P B L ) w e r es a m p l e di n5d i f f e r e n tt i m e sf r o mt h eb i r d sb e f o r ea n da R e rt h ec h a l l e n g e ，a n ds t o r e du n d e rt h e 一8 0 f o rt h ef u r t h e re x p e r i m e n t s AP C Rp r o c e d u r ew a sd e v e l o p e dt oa m p l i f yt

9、 h ef o u r t h i n t r o no fg r o w t hh o r m o n eg e n e ( 6 H 1 ) f r o mt h eP B Ls a m p l e so f112c h a l l e n g e db i r d s ，a n dt h eP C Rp r o d u c t sw e r ed i g e s t e dw i t hr e s t r i c t i o ne n d o n u c l e i d a s e sS a cIa n dM s pIr e s p e c t i v e l y N op o l y m

10、 o r p h i s mw a sf o u n di nt h ed i g e s t i o nw i t hS a cI ，b u ts i Xg e n o t y p e s ( A A ，A B ，A C ，B B ，B Ca n dC C ) w e r ec l a s s i f i e di nt h ed i g e s t i o nw i t hM s pI T h eg e n o t y p ef r e q u e n c yo fA Aw a s5 0 ，b u tt h eg e n o t y p ef r e q u e n c yo fB Ba

11、n dC Cw e r eO i nt h er e s i s t a n tl i n e , c o m p a r e dt h eg e n o t y p ef r e q u e n c yo fB Ba n dC Cw e r e9 2 6 a n d1 8 5 i nt h eg e n e r a ll i n e T h er e s u l t so f 矿a n a l y s i ss h o w e dt h a tt h e r ew e r en o ts i g n i f i c a n td i f f e r e n t ( P O 0 5 ) o n

12、t h ed i s t r i b u t i o no fs i xg e n o t y p e sb e t w e e nt h e2l i n e s T h eb i r d so fM D - r e s i s t a n c el i n eh a v eb e e nm a i n t a i n e dg o o dh e r e d i t yb a s i si nt h ep a s t15y e a r ss i n c et h ep u r i t yo fg e n ei nr e s i s t a n tl i n ew a sh i g h e r

13、, a n dt h eh e r e d i t yg u i d e l i n eo fh o m o z y g o s i t y , e f f e c t i v en u m b e ro fa l l e l e sa n dp o l y m o r p h i s mi n f o r m a t i o nc o n t a c tw e r el o w e rt h a nt h o s eo fg e n e r a ll i n e Ar e v e r s e t r a n s c r i p t a s ep o l y m e r a s ec h a

14、i nr e a c t i o n ( R T - P C R ) p r o c e d u r ew a sd e v e l o p e dt oa m p l i f yt h ea l a 2d o m a i n so fB F 、O C U S ( B - F a l a 2 ) o fm a j o rh i s t o c o m p a t i b i l i t yc o m p l e x ( ，M H C ) f r o m14b i r d sw i t hd i f f e r e n tr e s i s t a n c e si nt h ec h a l

15、l e n g ei n c l u d i n g11r e s i s t a n ti n d i v i d u a l s ( K 7 、K 1 3 、K 1 6 、Y 3 0 、A 3 、C 1 2 、C 1 3 、C 2 2 、D 2 、D 1 6 ) a n d3s u s c e p t i v ei n d i v i d u a l s ( A 2 2 、Y 1 2 、Y 2 5 ) A n dt h e nt h eP C Rp r o d u c t sw e r es e q u e n c e da n db l a s t e di nt h eG e n e

16、B a n kn u c l e o t i d ed a t a b a s e T h er e s u l t ss h o w e dt h a tr e s i s t a n ti n d i v i d u a l sD 2a n dD16h a v et h eh i g hn u c l e o t i d eh o m o l o g y ( 9 8 7 a n d9 9 4 ，r e s p e c t i v e l y ) w i t ht h eM D r e s i s t a n th a p l o t y p eB z ，a n dt h o s eb e t w e e nr e s i s t a n ti n d i v i d u a l sC 2 2 、K16a n dY 3 0w e r e9 9 2 ，9 9 O a n d9 9 8 r e s p e c t i v e l y