《dcsign表达调控与抗结核免疫应答关系的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《dcsign表达调控与抗结核免疫应答关系的实验研究（49页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、重庆医科大学硕士学位论文DC-SIGN表达调控与抗结核免疫应答关系的实验研究姓名：刘平申请学位级别：硕士专业：内科学（呼吸病学）指导教师：郭述良20090501重庆医科大学硕士研究生学位论文D C - SlG N 表达调控与抗结核免疫应答关系的实验研究1摘要目的：筛选合适的实验对象，研究I L - 4 调控树突状细胞特异性细胞间黏附分子3 结合非整合素( d e n d r i t i cc e l l - s p e c i f i cI C A M 一3g r a b b i n gn o n i n t e g r i n , D C S I G N ) 的表达对树突状细胞免疫学功能的影
2、响，进而探讨D C - S I G N 表达水平与结核病发生的关系。方法：密度梯度离心法获得C 5 7 B L 6 小鼠骨髓、脾脏和人外周血单个核细胞，贴壁法去除悬浮细胞，贴壁细胞中加入粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子( G M - C S F ) 和白细胞介素- 4 ( I L - 4 ) 协同诱导其分化为树突状细胞。倒置显微镜观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞表面C D ll c 、D C S I G N 、C D 8 0 、C D 8 3 、C D 8 6 和M H C - I I ( 或H L A - D R ) 分子的表达。用不同剂量的I L - 4 ( 5 、1 0 、5 0 、1 0
3、0 、2 0 0n g m 1 ) 调控人外周血来源的D C s 表面D C - S I G N 的表达水平，流式细胞仪检测各组D C s 表型。根据加入I L 一4 剂量将人外周血来源的D C s 分为I L - 4 ( 5n g m 1 ) 组和I L - 4( 5 0n g m 1 ) 组，分别加入脂多糖( L P S ) 、结核杆菌H 。，R v 菌悬液共培养。应用流式细胞仪检测各组D C s 表型( C D l l c 、D C - S I G N 、C D 8 3 、C D 8 6 、H L A D R ) ，E L I S A 法检测细胞培养液中I L - 1 2 、I L 一1
4、 0 含量，混合淋巴细胞培养法检测各组D C s 刺激同种异体T 淋巴细胞增殖的能力。基金项目：国家自然科学基金( 3 0 5 7 1 6 5 3 ) ：重庆市卫生局科研项目( 0 5 2 1 1 3 )3重庆医科大学硕士研究生学位论文结果：小鼠骨髓、脾脏及人外周血来源的D C s 培养7 天后具有D C s 的典型形态学特征。小鼠骨髓、脾脏来源的D C s 培养1 天、3 天、7 天后，D C - S I G N 表达水平均 0 0 5 ) 。表达不同水平D C - S I G N 的D C s 成熟度无显著差异( P 0 0 5 ) 。表达不同水平D C - S I G N 的D C s
5、加入L P S 、H 。，R v 诱导后，培养液中I L - 1 2 含量无显著差异( P 0 0 5 ) ，加入L P S 诱导后培养液中I L - I O 含量也无显著差异( 尸 0 0 5 ) ，但D C - S I G N h 油- D C s 加入H 。，R v 诱导后培养液中I L - I O含量明显高于D C S I G N h - D C s ( 尸 0 0 5 ) 。D C - S I G N h 油- D C s 加入H 。，R v 诱导成熟后与表达不同水平D C - S I G N 的D C s 加入L P S 诱导成熟后刺激同种异体T 淋巴细胞增殖的能力相当( 尸 0
6、0 5 ) ，但D C - S I G N h - D C s 加入H 。，R v 诱导后刺激4重庆医科大学硕士研究生学位论文同种异体T 淋巴细胞增殖能力明显低于其它3 组( 尸 0 0 5 ) T h em a t u r i t yd e g r e eo fD C sh a dn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e ，a l t h o u g ht h ee x p r e s s i o nl e v e l so fD C S I G Nw e r ed i f f e r e n t ( P O 0 5 ) T h e r ew a
7、 sn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c ei nt h ec o n c e n t r a t i o no fl L 12i nt h eD C sc u l t u r es u p e m a t a n to fa l lg r o u p s ( 尸 0 0 5 ) W h e nC O - c u l t u r e dw i t hL P S ，D C si nd i f f e r e n te x p r e s s i o nl e v e lo fD C - S I G Ns e c r e t e ds i m i l
8、a ra m o u n to fI L 1 0 妒 0 0 5 ) B u tw h e nC O c u l t u r e dw i t hH 3 7 R v , t h eD C SI G N h i g h _ D c ss e c r e t e dm o r eI L 10t h a nt h eD C SI G N I 。W D C sd i d ( P 0 0 5 ) C o m p a r e dw i t hD C sC O c u l t u r e dw i t hL P S ，t h eD C S I G N h i g h _ D c s ，w h i c hC
9、O c u l t u r e dw i t hH 3 7 R v , h a ds i m i l a ra b i l i t yt os t i m u l a t ea l l o g e n i cTc e l lp r o l i f e r a t i o n 俨 O 0 5 ) B u tw h e nC O - c u l t u r e dw i t hH 3 7 R v , t h eD C S I G N I 。W _ D C sh a dl o w e ra b i l i t yt os t i m u l a t ea l l o g e n i cTc e l
10、lp r o l i f e r a t i o nt h a no t h e ro n e sd i d 俨0 0 5 ) 。加入不同剂量的I L 一4 ，各组D C s 表面C D l l c 、C D 8 6 、H L A D R 表达水平差异均无统计学意义( P 0 0 5 ) 。i 庆科太# 硬研究生学位论立口5 n _ 1口l 咖E 1日5 0 n - l口l O O n g m lC D I l cD C 一5 I G NC D 8 6H L A D R日2 0 0 a g = la ：P 0 0 5 ) 。2 2 2 表达不同水平D C - 8 1 G N 的D e s 培养
11、液中l L - 1 2 和I L - I O 含量比较( 图3 - 4 )2 52 01 5l O50一啊l羹厘l鼹霾l|萋|霾l霆A 1A 2B 1B 2图34 组D e s 培养液中I L - 1 2 含量比较( 1 1r o l l1 0 )囵A 1 ：I L 一4 ( 5 n g m 1 ) + L P SB 1 ：I L 一4 ( 5 0 n g = 1 ) + L P SB 2 ：I L 一4 ( 5 0 r i g = 1 ) + H 3 7 R vF i g3C o m p a r a t i o no ft h ec o n c e n t r a t i o no fI L
12、 - 1 2i nt h ec u l t u r es u p e r n a t a n ta m o n gf o u rg r o u p s ( n = 1 0 )_ 、H 目霾 缓 鳝缓疆 圜二一 霍A lA 2B 1B 2A 1 ：I L 一4 ( 5 n g m 1 ) + L P SA 2 ：I L 一4 ( 5 n g m 1 ) + H 3 7 R vB 1 ：I L 一4 ( 5 0 n g = 1 ) + L P SB 2 ：I L 一4 ( 5 0 n g e 1 ) + H 3 7 R va ：尸 0 0 5 ) 。I L - 4 ( 5n g m 1 ) + L
13、 P S 、I L - 4( 5 0n g m 1 ) + L P S2 组I L l O 含量没有显著差异( P 0 0 5 ) 。加入H 。，R v 诱导加们O11o I r IHo二。州p时“p岳ooIIou重庆医科大学硕士研究生学位论文成熟后，I L 一4 ( 5 0n g m 1 ) + H 。，R v 组I L l O 含量明显高于I L - 4 ( 5n g m 1 ) + H 。，R v组( P 0 0 5 ) 。I L 一4 ( 5 0n g m 1 )+ H 。，R v 组与I L - 4 ( 5n g m 1 ) + L P S 组、I L 4 ( 5 0n g 1 )
14、+ L P S 组刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力相当( 尸 0 0 5 ) 。但加入H 。，R v 诱导成熟后，I L - 4 ( 5n g m 1 )+ H 3 ，R v 组T 淋巴细胞增殖水平明显低于其它3 组( P 0 0 5 ) 。( 2 ) 表达不同水平D C - S I G N 的O C s 成熟度无显著差异( 尸 0 0 5 ) 。重庆医科大学硕士研究生学位论文( 3 ) 表达不同水平D C S I G N 的D C s 加入L P S 、H 3 7 R v 诱导后，培养液中I L - 1 2含量无显著差异( P 0 0 5 ) ，加入L P S 诱导后培养液中I L - I O
15、 含量也无显著差异( P 0 0 5 ) ，但D C - S I G N M 曲- D C s 加入H 。，R v 诱导后培养液中I L - I O 含量明显高于D C S I G N l 0 一D C s ( 0 0 5 ) 。D C - S I G N u 曲- D C s 加入H 。，R v 诱导成熟后与D C s 加入L P S 诱导成熟后刺激同种异体T 淋巴细胞增殖的能力相当( P 0 0 5 ) ，但D C - SI G N h - D C s 加入H 。，R v 诱导后刺激同种异体T 淋巴细胞增殖能力明显低于其它3 组( P 0 0 5 ) 。3 表达不同水平D C - S I
16、G N 的D C s 成熟度无显著差异( 尸 0 0 5 ) ，分泌I L - 1 2的水平差异无统计学意义( 尸 0 0 5 ) 。4 D C S I G N o 岫- D C s 加入H 。，R v 诱导后分泌I L - I O 的水平明显高于D C S I G N l 。 - D C s ，但D C - S I G N m - D C s 加入H 。，R v 诱导后刺激T 淋巴细胞增殖的能力明显降低。D C S I G N 表达过高或过低均不利于机体抗结核免疫应答。3 1重庆医科大学硕士研究生学位论文参考文献 1 R is s o a nMC ，S o u m e li sV ，K a d o w a k iN ，e 芒a 上R e c i p r o c a lc
